血細(xì)胞比容測(cè)定講稿

1、,血細(xì)胞比容測(cè)定,一、概念,血細(xì)胞比容（Hematocrit，HCT或packed cell volume，PCV）是指一定容積血液中紅細(xì)胞在全血所占體積的百分比。,二、檢測(cè)原理,（一）、溫氏法 : 將EDTA--K2抗凝血在一定條件下離心沉淀，由此而測(cè)出其紅細(xì)胞在全血中所占體積的百分比。,,（二）、微量法:是采用一次性使用的經(jīng)肝素化的干燥毛細(xì)玻璃管（每支含肝素2µ）直接采集末梢血，以相對(duì)離心力≥1000g(11000—

2、12000r/min)離心5min，取出后用尺量取血液總長度和血細(xì)胞層的長度，或用微量血細(xì)胞比容測(cè)定讀數(shù)器報(bào)告結(jié)果。,,（三）、血液分析儀法：目前絕大多數(shù)血液分析儀使用電阻抗法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測(cè)定。其原理是利用血漿是電的良導(dǎo)體，而相對(duì)血細(xì)胞是電的不良導(dǎo)體，當(dāng)細(xì)胞通過小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即為血細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高度代表血細(xì)胞的體積。,,使用血液分析儀法的血細(xì)胞比容是由測(cè)定紅細(xì)胞平均體積和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)后導(dǎo)出，

3、即血細(xì)胞比容（HCT=紅細(xì)胞平均體積X紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）,,（四）、相對(duì)離心力 1、相對(duì)離心力（RCF）g=1.118x10-5 x有效離心半徑（cm）x轉(zhuǎn)速2/min,,2、溫氏法測(cè)定時(shí)以相對(duì)離心力2264g（即有效離心半徑22.5cm，3000r/min）離心30 min，讀取紅細(xì)胞層的高度。,,3、微量法測(cè)定時(shí)以相對(duì)離心力1000g（11000—12000r/min）離心5 min，取出后用尺量取血液總長度和血細(xì)胞層的長度。,三、

4、檢測(cè)方法及方法學(xué)評(píng)價(jià),（一）、檢測(cè)方法 1、溫氏法:壓積容量管長11cm，內(nèi)經(jīng)2.5cm，管上刻有0—100mm刻度的平底管，其讀數(shù)一側(cè)由下而上供測(cè)紅細(xì)胞容積用，另一側(cè)由上而下供紅細(xì)胞沉降率測(cè)定用）,,2、微量法:按常法消毒、穿刺手指，將血液經(jīng)自然毛細(xì)現(xiàn)象進(jìn)入特制的毛細(xì)玻管中（肝素），用套塞或橡皮泥堵塞一端，放入專用離心機(jī)中，以11000—12000r/min高速離心5min。測(cè)量紅細(xì)胞層和全層的長度，計(jì)算比值，即為紅細(xì)胞比積。,,

5、（二）、方法學(xué)評(píng)價(jià)1、溫氏法：中速離心3000r/min，離心30min；離心沉淀過程中不能完全排除紅細(xì)胞間殘留的血漿，使結(jié)果偏高；所用時(shí)間長、標(biāo)本多，已屬淘汰之列。,,2、微量離心法：高速離心11000-12000 r/min，離心5min；離心力較大，紅細(xì)胞間殘留的血漿量平均較溫氏法低2%（約含1%-3%殘留血漿）；標(biāo)本用量小，操作簡(jiǎn)便，現(xiàn)被WHO定為首選常規(guī)方法。,,3、血液分析儀法：目前血液分析儀提供的參數(shù)中包括Hct測(cè)定，由

6、于結(jié)果是儀器測(cè)定數(shù)萬個(gè)細(xì)胞體積產(chǎn)生的脈沖疊加后換算而來的，避免了血漿殘留引起的誤差。但應(yīng)當(dāng)注意患者紅細(xì)胞增多、白細(xì)胞和血小板數(shù)量明顯增多、患者血漿中有異常蛋白質(zhì)或血漿滲透壓異常時(shí)，儀器法常會(huì)出現(xiàn)誤差。,四、質(zhì)量控制,（一）、手工法：應(yīng)注意以下因素1、抗凝劑量不準(zhǔn)確或抗凝劑與血液混勻不充分致血液凝固。2、離心速度不夠或時(shí)間過短均會(huì)產(chǎn)生誤差。3、所用器材必須清潔干燥，避免溶血,,4、紅細(xì)胞形態(tài)改變時(shí)應(yīng)注明（如大紅細(xì)胞、小紅細(xì)胞、橢圓形

7、紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞等），變形性減低的紅細(xì)胞可使血漿殘留量增加6%。不能使用改變紅細(xì)胞容積的抗凝劑。,,5、 紅細(xì)胞增多癥時(shí)，血細(xì)胞比容明顯增加，血漿殘留量亦會(huì)增加。6、避免血液稀釋（靜脈三通管抽血）7、離心條件必須恒定。,,（二）、血液分析儀法：1、避免溶血2、避免血液稀釋（靜脈三通管抽血）3、應(yīng)注意Hct與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞平均體積測(cè)定值的相關(guān)性。,五、參考值,1、溫氏法 男40%—54 %

8、 女 37%—47%2、微量法 男38%—48 % 女36%—47%3、血細(xì)胞分析儀,六、臨床意義,（一）、增高1、見于各種原因所致的血液濃縮，如大量嘔吐、大手術(shù)后、腹瀉、失血、大面積燒傷,,2、真性紅細(xì)胞增多癥和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥3、用于臨床補(bǔ)液及輸液量的依據(jù),,（二）、減低1、見于各種貧血。紅細(xì)胞減少，紅細(xì)胞比積隨之減少，但不同原因的貧血，紅細(xì)胞體積大小不同，兩者減低不一

9、定平行，故臨床常用計(jì)算紅細(xì)胞平均容積、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度，有助于貧血的鑒別與分類。,,2、可用作計(jì)算MCV、MCHC的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，是影響全血粘度的決定因素之一（例血液粘度增高致休克）。 3、大量飲水,,紅細(xì)胞平均指數(shù),,一、紅細(xì)胞平均指數(shù)包括：1、紅細(xì)胞平均容積（mean corpuscular volume，MCV），指每個(gè)紅細(xì)胞平均體積的大小，以飛升（fl）為單位；,,2、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（

10、mean corpuscular hemoglobin MCH），指每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)平均所含血紅蛋白量，以皮克（pg）為單位；,,3、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC），指平均每升紅細(xì)胞中所含血紅蛋白濃度（g/L）。,二、檢測(cè)原理,對(duì)同一抗凝血標(biāo)本同時(shí)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、測(cè)定血紅蛋白和血細(xì)胞比容，由此可進(jìn)一步計(jì)算出紅細(xì)胞3個(gè)平均指數(shù)。,,1、 MCV（fl）=每升

11、血液中紅細(xì)胞體積/每升血液中紅細(xì)胞數(shù)=Hct/RBC 例：紅細(xì)胞為3.50*1012/L，紅細(xì)胞比容0.36則： MCV=0.36/3.50*1012/L=103 fl,,2、  MCH（pg）=每升血液中血紅蛋白含量/每升血液中紅細(xì)胞個(gè)數(shù)=HB/RBC 例：紅細(xì)胞為3.50*1012/L，血紅蛋白為120 g/L，則： MCH=120g/L/3.50*1012/L=34.20 pg,,3、MCHC（g/L

12、）=每升血液中血紅蛋白含量/每升血液中紅細(xì)胞體積= HB/ Hct 例：血紅蛋白為120 g/L，血細(xì)胞比容為0.36，則： MCHC=120 g/L/0.36=333 g/L,三、方法學(xué)評(píng)價(jià),1、MCV 儀器法CV<1%，手工法CV值在10%左右。許多血液分析儀設(shè)定的MCV值最大域值是360fl，因此可能包含紅細(xì)胞團(tuán)塊，當(dāng)紅細(xì)胞凝集如冷凝集綜合征可引起MCV假性增高；嚴(yán)重的高血糖癥（葡萄糖高于33.3mmol/L）可

13、引起紅細(xì)胞腫脹，使MCV假性增高。,,2、MCH 高脂血癥或白細(xì)胞增多癥因血漿濁度增加而使MCH假性增高，手工法測(cè)定可先離心以消除濁度，測(cè)定結(jié)果可以得到糾正。儀器法CV為0.6%—1.2%，手工法CV值在10%左右。,,3、MCHC 這個(gè)值和血紅蛋白的溶解度有關(guān)，血紅蛋白濃度高于該值可能會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶。此外，手工法MCHC的測(cè)定受到Hct（血漿殘留或出現(xiàn)異常紅細(xì)胞）和Hb（高脂蛋白血癥、白細(xì)胞增多癥）的影響。儀器法CV為1%—1.5%，

14、,四、質(zhì)量控制,1、手工法 由于紅細(xì)胞3個(gè)平均指數(shù)都是間接算出的，因此，做紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定、血細(xì)胞比容的測(cè)定必須用同一份抗凝血標(biāo)本，且所測(cè)定的數(shù)據(jù)必須準(zhǔn)確，否則誤差很大。,,2、血液分析儀法 必須注意紅細(xì)胞3個(gè)平均指數(shù)之間與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容測(cè)定3個(gè)檢測(cè)指標(biāo)之間的相互關(guān)聯(lián)性。必須注意不能溶血。,五、參考值,1、手工法： MCV80-92fl； MCH27-31pg； MCHC320-360g/L

15、；2、儀器法： MCV80-100fl；MCH27-34pg； MCHC320-360g/L；,六、貧血的紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類,貧血分類 MCV MCH MCHC 貧 血正細(xì)胞性貧血 正常 正常 正常 再障、急性失血性

16、 貧血、某些溶貧大細(xì)胞性貧血 增高 增高 正常 各種造血物質(zhì)缺乏 或利用不良的貧血

17、 巨幼細(xì)胞性貧血單純小細(xì)胞貧血 減低 減低 正常 慢性感染、慢性肝

18、 腎疾病性貧血小細(xì)胞低色素貧血 減低 減低 減低 缺鐵性貧血及鐵利 用不良貧血、

19、 慢性失血性貧血、地中海貧血,,紅細(xì)胞直徑和厚度測(cè)定,,一、器材及使用（一）、器材1、接目測(cè)微器：這是一圓形玻片，正中刻有50或100等分格，每小格相當(dāng)于多少微米，必須根據(jù)當(dāng)時(shí)所用顯微鏡鏡筒長度以及目鏡、物鏡的放大倍數(shù)而改變。,,2、鏡臺(tái)測(cè)微器：這是用以校正接目測(cè)微器，外觀與載玻片相似，

20、正中有一圓形蓋片封有標(biāo)準(zhǔn)尺，總長為1mm，分為100等分，因此每格為10um。,,（二）校正 1、接目測(cè)微器的校正：（1）將接目測(cè)微器放在接目鏡內(nèi)，鏡臺(tái)測(cè)微器放在鏡臺(tái)上，用低倍鏡找到標(biāo)準(zhǔn)尺，并移至視野中央，換用測(cè)量所用物鏡，校正目鏡測(cè)微器，測(cè)量紅細(xì)胞直徑則換油鏡。,,（2）移動(dòng)載物臺(tái)，使鏡臺(tái)測(cè)微器標(biāo)準(zhǔn)尺與目鏡測(cè)微器的刻度平行，使左側(cè)線與零重合，然后觀察刻度與標(biāo)準(zhǔn)尺右側(cè)的重合線，分別記錄其格數(shù)，計(jì)算目鏡測(cè)微器在此放大倍數(shù)下每格的微

21、米數(shù)。,,（3）如目鏡測(cè)微器40格與鏡臺(tái)測(cè)微器6格重合，則目鏡測(cè)微器每格的微米數(shù)=6*10um/40=1.5 um 式中：6為鏡臺(tái)測(cè)微器實(shí)測(cè)格數(shù)；10 um為鏡臺(tái)測(cè)微器每小格的長度；40為目鏡測(cè)微器實(shí)測(cè)格數(shù)。,,（4）目鏡測(cè)微器經(jīng)校正后，不得更換物鏡、目鏡，也不能改變鏡筒長度。變換顯微鏡后，必須重新校正。,二、紅細(xì)胞平均直徑測(cè)定,（一）、方法與步驟 1、按常規(guī)制備一張薄血膜涂片，立即干燥固定，瑞氏染色。 2、 把鏡臺(tái)測(cè)

22、微器換為被檢血片，選擇細(xì)胞分布均勻而較稀疏的區(qū)域，依次測(cè)量每個(gè)紅細(xì)胞的直徑，共測(cè)500個(gè)紅細(xì)胞。,,3、 測(cè)量時(shí)，按紅細(xì)胞直徑所占目鏡測(cè)微器格數(shù)做記錄，對(duì)異性紅細(xì)胞應(yīng)測(cè)量長、短徑，取其平均值。記錄方式以0.5格為一記錄單位。,,4、  計(jì)算紅細(xì)胞平均直徑 紅細(xì)胞平均直徑=被測(cè)細(xì)胞總格數(shù)/被測(cè)細(xì)胞數(shù)*目鏡測(cè)微器每格相當(dāng)微米數(shù) 如：被測(cè)細(xì)胞總格數(shù)為980；被測(cè)細(xì)胞數(shù)為200；目鏡測(cè)微器每格的微米數(shù)為1.

23、5 um，則紅細(xì)胞平均直徑=980/200*1.5 um=7.4 um,,5、繪制紅細(xì)胞直徑曲線。以紅細(xì)胞直徑微米數(shù)為橫坐標(biāo)，紅細(xì)胞百分率為縱坐標(biāo)將各種不同直徑的紅細(xì)胞百分率連接起來，即成紅細(xì)胞直徑曲線。它可以清楚地反應(yīng)紅細(xì)胞的大小和其分布情況。,,（二）、正常參考值 紅細(xì)胞直徑6.7-7.7 um,,（三）、臨床意義 1、正常人紅細(xì)胞直徑大小差別不大，直徑曲線基底窄，呈突出的尖峰狀，其頂點(diǎn)位于7--8 um之間，紅細(xì)胞

24、直徑曲線基底愈寬、頂點(diǎn)愈低，表示紅細(xì)胞大小不均，差異愈大。,,2、主要用于貧血的鑒別診斷。（1）小紅細(xì)胞貧血時(shí)，平均紅細(xì)胞直徑小于正常參考范圍，平均直徑6.2—6.7 um，曲線基底略寬，頂峰左移，如有紅細(xì)胞大小不均時(shí)，使曲線的基底部增寬。,,,（2）大細(xì)胞性貧血時(shí)，紅細(xì)胞平均直徑大于正常參考范圍，紅細(xì)胞平均直徑7.5—9.6 um，紅細(xì)胞直徑曲線的頂峰偏右，底部明顯變寬，曲線平坦。,,（3）如果在正常細(xì)胞性貧血時(shí)，其紅細(xì)胞平均直徑及

25、其曲線圖形與正常相同。如急性失血性貧血。,(四)、方法學(xué)評(píng)價(jià),1、紅細(xì)胞直徑測(cè)定簡(jiǎn)單易行，不須特殊設(shè)備，對(duì)貧血的鑒別診斷有一定價(jià)值。但由于血涂片厚薄不同及推片技術(shù)差異，常使紅細(xì)胞產(chǎn)生人為的變化；推制的學(xué)涂片必須厚薄適宜，無紅細(xì)胞重疊，血片制成后，應(yīng)迅速干燥固定，以免紅細(xì)胞皺縮變形。病理形態(tài)的紅細(xì)胞也影響準(zhǔn)確的直徑測(cè)定，取其平均值記錄。,,2、 目鏡測(cè)微器一旦校正后，就不能任意更換鏡頭，也不能任意改變鏡筒的長度，以免改變放大倍數(shù)

26、，否則應(yīng)重新校正。 3、 測(cè)量時(shí)應(yīng)選擇紅細(xì)胞分布均勻的體尾交界處，依次測(cè)量200—500個(gè)紅細(xì)胞的直徑，不能任意取舍。,,4、血細(xì)胞分析儀可根據(jù)測(cè)量的單個(gè)紅細(xì)胞體積，計(jì)算出體積的變異系數(shù)即RDW，能客觀地、正確地反映紅細(xì)胞大小不等程度，結(jié)合紅細(xì)胞體積直方圖分析，對(duì)貧血的鑒別診斷更有價(jià)值。,三、紅細(xì)胞平均厚度的計(jì)算,紅細(xì)胞平均厚度=紅細(xì)胞平均體積/π(紅細(xì)胞平均直徑/2)2 例如：紅細(xì)胞平均體積88 fl，紅細(xì)胞平均直徑

27、7.2 um 則：紅細(xì)胞平均厚度=88/3.1416*（7.2/2）2=2.16 um,,臨床意義： 1、正常紅細(xì)胞平均厚度為2 um左右。 2、患遺傳性球性紅細(xì)胞性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血時(shí)，較正常略厚； 3、單純小細(xì)胞性貧血和阻塞性黃疸時(shí)，較正常略薄。,,紅細(xì)胞體積分布寬度,一、概念,紅細(xì)胞體積分布寬度（red blood cell volume distribution width,RDW）是一個(gè)較新的紅細(xì)胞參數(shù)，

28、由血液分析儀根據(jù)紅細(xì)胞體積的直方圖導(dǎo)出，反映所測(cè)標(biāo)本中紅細(xì)胞體積大小的異質(zhì)程度，常用變異系數(shù)（CV）表示。,二、檢測(cè)原理,檢測(cè)原理與血液分析儀紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同，多采用電阻抗原理，當(dāng)紅細(xì)胞通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)，取代了相同體積的電解質(zhì)溶液，使原來恒流的電路上孔電阻瞬時(shí)增加，于是產(chǎn)生脈沖信號(hào)，有多少個(gè)紅細(xì)胞通過小孔，就有多少個(gè)脈沖信號(hào)產(chǎn)生，且脈沖信號(hào)的強(qiáng)弱和細(xì)胞大小成正比。對(duì)被檢測(cè)的所有紅細(xì)胞體積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，則導(dǎo)出RDW值。,三、方法學(xué)評(píng)價(jià),1、

29、對(duì)紅細(xì)胞體積大小的評(píng)價(jià)，過去主要靠推片對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)的觀察，這種觀察受到許多因素的影響，如血涂片制作技術(shù)、血片的厚薄以及觀察者的主觀因素的影響較大，而且不能定量。,,2、儀器法測(cè)定數(shù)萬個(gè)紅細(xì)胞后，由直方圖導(dǎo)出RDW值，是一個(gè)定量的值，同時(shí)克服了人工觀察的各種主觀和客觀誤差，能更準(zhǔn)確 更客觀地反映紅細(xì)胞體積的異質(zhì)性的程度。,,3、相比較而言，MCV值只反映紅細(xì)胞體積平均大小，不能代表紅細(xì)胞之間體積的差異，如只用MCV作為貧血的形態(tài)學(xué)分類參考

30、依據(jù)，則可能會(huì)掩蓋病理性紅細(xì)胞體積大小的異質(zhì)性實(shí)際情況，從而影響貧血分類的準(zhǔn)確性。,四、質(zhì)量控制,紅細(xì)胞分布寬度結(jié)果判斷應(yīng)結(jié)合臨床及紅細(xì)胞直方圖的變化，同時(shí)分析RDW異常是否是由于紅細(xì)胞碎片 紅細(xì)胞凝集或雙相性紅細(xì)胞引起。,,五、參考值 成人：11.6%--14.6%,六、臨床意義,1、進(jìn)行貧血形態(tài)學(xué)新的分類 2、缺鐵性貧血(iron deficiency anemia IDA)早期篩選診斷和療效觀察,,3、鑒別缺鐵性貧血和β-

31、珠蛋白生成障礙性貧血，兩類貧血患者RDW變化：（1） 缺鐵性貧血100%(53/53)RDW增高（2）88%(38/44) 輕型β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的RDW正常 提示RDW可作為兩類貧血的鑒別診斷指標(biāo).,,4、用于貧血病因?qū)W鑒別診斷，腎性貧血RDW正常，肝性貧血RDW增高。,,注意:RDW單獨(dú)指標(biāo)不足以鑒別診斷貧血，應(yīng)結(jié)合其他檢驗(yàn)才能明確診斷。,紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用,不同貧血紅細(xì)胞體積的變化，使紅細(xì)胞體積分布圖形發(fā)

32、生變化，結(jié)合其它參數(shù)對(duì)鑒別診斷頗有價(jià)值。,,一、小細(xì)胞性貧血1、RDW正常：紅細(xì)胞主峰左移，分布在55—100fl，頂峰在75fl，基底較窄，為典型小細(xì)胞均一性圖形，提示為小細(xì)胞低色素。見于輕型珠蛋白生成障礙性貧血，血涂片紅細(xì)胞體積變小，大小一致。,,2、RDW輕度增高：紅細(xì)胞主峰左移，分布在55—100fl，頂峰在65fl處。提示為小細(xì)胞低色素和細(xì)胞的不均一性，見于缺鐵性貧血，血涂片紅細(xì)胞體積變小，大小不一致。,,3、RDW明顯增高

33、：紅細(xì)胞顯示兩個(gè)細(xì)胞峰，小細(xì)胞峰明顯左移，峰頂位于50fl處，較大細(xì)胞峰頂位于90fl，基底較寬，提示小細(xì)胞低色素和細(xì)胞的不均一性。見于鐵粒幼細(xì)胞性貧血、缺鐵性貧血經(jīng)治療有效時(shí)。血涂片紅細(xì)胞偏小，明顯大小不均。,,二、大細(xì)胞性貧血 1、RDW正常：紅細(xì)胞主峰明顯右移，分布在75—130fl，頂峰在100fl，提示為大細(xì)胞性，見于溶血性貧血、白血病前期、再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血。血涂片紅細(xì)胞體積較大，大小一致。,,2、RDW輕度

34、增高：紅細(xì)胞峰明顯右移，基底增寬，主峰分布在75—150fl，頂峰約在105fl，提示為大細(xì)胞、不均一性。見于葉酸、維生素B12缺乏引起巨幼細(xì)胞性貧血。血涂片紅細(xì)胞體積明顯增大，大小差異不明顯。,,3、RDW明顯增高：紅細(xì)胞峰明顯右移，出現(xiàn)兩個(gè)峰，以100fl處細(xì)胞峰為主，提示大細(xì)胞不均一性。血涂片紅細(xì)胞體積明顯增大，大小差異較明顯。見于巨幼細(xì)胞性貧血、葉酸、維生素B12治療初期。,,三、正細(xì)胞性貧血1、RDW正常：紅細(xì)胞分布在55—

35、110fl，頂峰在88fl，為正常紅細(xì)胞分布直方圖，見于慢性病、急性失血、骨髓纖維化、骨髓發(fā)育不良等。血涂片紅細(xì)胞形態(tài)正常，大小一致。,,2、 RDW輕度增高：紅細(xì)胞主群分布在44—120fl，頂峰在80fl，提示紅細(xì)胞不均一性，見于血紅蛋白異常、骨髓纖維化等。血涂片紅細(xì)胞體積正常，大小差異不明顯。,,3、RDW明顯增高：紅細(xì)胞主群分布在40—50fl，頂峰在90fl，提示紅細(xì)胞不均一性，見于早期或混合性營養(yǎng)不良。血涂片紅細(xì)胞體積大，大