免疫血液學一

1、,第四章 免疫血液學,醫(yī)學檢驗系 張晨光 3832185,主要內容： 1、紅細胞血型系統(tǒng) 2、HLA血型 3、血小板血型系統(tǒng) 4、血清型 5、輸血前免疫血液檢查 6、新生兒溶血病,,免疫血液學,ABO血型的問題,問題的發(fā)現(xiàn)——正反定型不符可能性有許多種ABO亞型，疾病因素，年齡體質和個體差異，冷抗體，自身抗體，輸血，其它血型抗體的干擾，蛋白干擾，多凝集等

2、。通常情況下O型紅細胞加AB血漿可以解決問題，但不總是這樣。孟買型和類孟買型常常不能輸O型血,?,Rh血型問題,Rh陰性的患者輸什么樣的血？輸什么樣的血成分？RhD亞型問題（弱D，不完全D，Del）Rh系統(tǒng)抗D、C、c、E、e抗體及其聯(lián)合Rh血型錯誤輸血的后果,同種抗體問題,常見紅細胞同種抗體有那些？如何鎖定目標？譜細胞，抗原/抗體測定，效價測定它們的臨床意義是否為溫抗體？是否致敏補體？紅細胞上有多少抗原？以往表現(xiàn)如何

3、？是否能提供配合型的血？是否有權宜方案？（親屬血）,自身抗體問題,自身抗體冷自身抗體和溫自身抗體如何鎖定目標？針對紅細胞的直抗試驗和放散試驗，針對血清的間抗試驗病史，輸血史它們的臨床意義是否為溫抗體？藥物抗體，類抗體，多凝集是否能提供配合型的血？是否有權宜方案？,新生兒溶血病診斷及換血,新生兒溶血病的實驗室診斷 直抗試驗、游離試驗、釋放試驗 ABO溶血病 換血血液的選擇Rh溶血病 換血血液的選擇,

4、骨髓移植后輸血,紅細胞血型的選擇血小板血型的選擇,其它特定病患的輸血前檢查,白血病消化道疾病多發(fā)性骨髓瘤冷凝集素病大量輸血輸液患者,已經(jīng)發(fā)生溶血性輸血反應的患者,區(qū)分自身抗體和同種抗體分離自身和輸入的紅細胞正確鑒定血型正確鑒定抗體血漿置換交換輸血,1818年英國婦產科醫(yī)生布倫德爾成功地用輸血救活了一名產后大出血的產婦，成為人類歷史上成功輸血的第一例。,1900年奧地利維也納大學 LandsteinerLands

5、teiner（1868－1943）獲得1930年諾貝爾獎金發(fā)現(xiàn)了ABO、MN、P、RH等許多血型,ABO血型的發(fā)現(xiàn),ABO血型發(fā)現(xiàn)的意義,打開了免疫血液學、免疫遺傳學的大門為臨床輸血鋪平了道路，使它成為一項有效的治療手段。,1900年→ → →2009年,1990年,1985年,,,ABO血型系統(tǒng)從血清學到分子生物學,抗原決定簇 (表位),血型抗原是紅細胞上的一種特異性的呈立體排列的化學基團。依生化性質人紅細胞抗原決定簇可分

6、為多肽和糖分子兩類。,人出生時，抗原決定簇是多肽的紅細胞膜的血型抗原已發(fā)育成熟，而決定簇為糖分子的血型抗原則在出生后逐漸發(fā)育成熟。,,決定簇,糖分子,多肽,,,,ABH，LweisIi，T／Tn,抗原,MNSs，Rh，Kell，Kidd,存在多種細胞表面體液和分泌液中,只分布于紅細胞膜其他血細胞膜上,分布,組織血型抗原可以表示細胞分化和成熟的標志，胎兒和新生兒紅細胞表達強i抗原，弱I抗原，而成人則為強I抗原，弱i抗原。,IgG,

7、相對分子量為15萬，由2條重鏈及2條輕鏈構成，根據(jù)重鏈恒定區(qū)氨基酸序列的差異，分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4四種亞類。IgG是唯一能通過胎盤到達胎兒的免疫球蛋白(1gG2通過胎盤效率最低)，并有結合補體的能力，IgG3結合補體能力最強。其次是IgGl，所以IgG3和IgGl在溶血性輸血反應和新生兒溶血病中有重要意義。,IgM,相對分子量為90萬，由5個免疫球蛋白單體通過J鏈連接而組成的五聚結構。IgM是胎兒免疫系統(tǒng)成熟時

8、最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，并具有高度的有效凝集素，使補體活化的效率高，1個IgM分子與紅細胞表面的抗原結合，就能引發(fā)補體介導的細胞溶解現(xiàn)象。,ABO血型系統(tǒng)抗體若按產生的原因又分為“天然抗體”和“免疫性抗體”?！疤烊豢贵w”主要由自然界中與A、B抗原類似的物質(細菌)免疫刺激產生，以IgM為主。 “免疫性抗體”主要是由母嬰血型不合的妊娠、血型不合及有輸血史的輸血產生，以IgG為主。,ABO抗體的特性,“天然抗體”與“免疫性抗體”的特征及區(qū)

9、別,,,,特性,天然抗體（IgM）,免疫性抗體（IgG）,抗原刺激,分子量,與紅細胞反應的最適溫度,被血型物質中和,溶血素效價,耐熱性,在鹽水中與相應紅細胞,反應發(fā)生肉眼可見凝集,對酶處理紅細胞的反應,通過胎盤,無察覺,100萬,4--25℃,能,較低,不耐熱（冷抗體）,能,變化不大,不能,有（妊娠、輸血）,15萬,37℃,不能,較高,耐熱（溫抗體）,不能,能反應,能,人在出生前尚未產生抗體.ABO抗體出生后3-6個月出現(xiàn)，5-6歲時

10、達高峰; 成人隨年齡增長而降低。新生兒血清中抗體常是來自母體的IgG，偶爾也有胎兒自身產生的IgM。由于新生兒血型抗原位點少，抗體效價低，為此檢測血型時應十分慎重，可因抗原少或抗體效價低而凝集不明顯而誤定血型。抗A、抗B、抗AB抗體存在于所有缺少相應抗原的人血清中，唾液、乳汁、淚液等各種體液及分泌物中也可發(fā)現(xiàn)ABO抗體.,ABO抗體的產生及存在部位,2 9個血型系統(tǒng)， 2 0 0多個抗原,第一節(jié)

11、紅細胞血型系統(tǒng),一、ABO血型系統(tǒng),ABH血型抗原不僅存在于紅細胞表面，而且還廣泛存在于消化道，皮膚上皮細胞，呼吸道及泌尿系統(tǒng)，包括唾液、眼淚、尿液、消化液、膽汁、乳液、羊水、體腔液及卵巢囊腫液中。,ABO血型系統(tǒng)的獨特特點,A和B抗原的免疫原性強血清中規(guī)律性存在抗A和/或抗B抗體分泌型個體的血漿、唾液、組織細胞等處存在A、B、H血型物質,ABO血型系統(tǒng)是根據(jù)每個人紅細胞上是否存在A和B抗原，可將人分成四種血型,ABO血型的配合性是

12、輸血前試驗的重要基礎,血型抗原能夠激活免疫系統(tǒng) ：,母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血,ABO血型的主要抗原和抗體,已知血清+受檢者紅細胞 受檢者血清+已知紅細胞 （正定型） （反定型） 抗A 抗B 受檢者血型 A細胞 B細胞 O

13、細胞 ＋ － A － ＋ － － ＋ B ＋ － － － － O ＋ ＋ － ＋ ＋ AB － － －,,,,(一) ABO血型的遺傳

14、基礎,我們從雙親的染色體各獲得一半的遺傳基因。我們遺傳的是二個血型基因，一個是從母親那兒來的A、B或O基因。另一個基因來自父親的A、B或O基因。,基因型，從雙親染色體上所遺傳下來的基因。表型，所觀察到的遺傳基因即血型本身。A和B基因對于O基因是顯性基因，O基因是隱性基因。,不同婚配類型子女可能的血型,(二) ABO血型表型的頻率,中國：從北向西南的方向，B基因頻率逐漸下降，而O基因頻率升高；云貴川和長江中下游地區(qū)A基因頻率升

15、高，兩廣、福建、臺灣O基因頻率較其它地區(qū)高。歐洲：A基因頻率最高B基因在亞洲頻率最高。,(三),(三) ABO血型抗原的生化合成,ABO系統(tǒng)抗原概述,A和B抗原是紅細胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類決定簇。二者之間的區(qū)別在于免疫結構域末端單糖性質不同。A抗原末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基是D-半乳糖。,Type1 Galβ1－3GlcNAc β1－R （主要存在于血漿）

16、Type2 Galβ1－4GlcNAc β1－R （存在于紅細胞、血漿）,ABO生化合成的概述----血型前體物質,在H基因編碼產生的巖藻糖基轉移酶(H轉移酶)的作用下，把一個巖藻糖接在其前身物質即紅細胞膜上寡糖鏈的半乳糖上形成H物質(H抗原)，它是A、B抗原的前身物質。,ABO生化合成的概述----H物質,ABO生化合成的概述----A酶和B酶,A抗原,D-半乳糖(H物質) + N-乙酰半乳

17、糖胺,D-半乳糖(H物質) +D-半乳糖,B抗原,A和B抗原是紅細胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖類決定簇。A抗原 N-乙酰半乳糖胺(GaLNAc)B抗原 D-半乳糖(GaL)。,ABO生化合成的概述----A抗原和B抗原,H抗原是形成A、B抗原的結構基礎，但是H物質抗原性很弱，血清中一般沒有抗H抗體。O型就只有H抗原，O基因為無效基因，不會產生轉移酶，糖不會連接到H物質上。如果缺失H基因，即缺乏H轉移酶，則

18、無H物質，這時即使體內存在A或B轉移酶也不能形成A或B抗原，如hh型(孟買型)就是缺乏H基因。,ABO生化合成的概述----0型和孟買型,ABO系統(tǒng)概述,O基因的產物是一種無活性的轉移酶，不能轉移任何糖基到H抗原上，因此O型個體的抗原就是H抗原。,ABO抗原不是ABO基因的直接產物，A和B基 因編碼不同的糖基轉移酶，催化不同的糖基轉移到H抗原末端半乳糖基上，形成相應的A或B抗原。,ABO基因糖基轉移酶結構模式圖（1）,ABO基因糖基

19、轉移酶結構模式圖（2）,ABO物質的生物合成,A、B、H血型物質,1930年Lehrs發(fā)現(xiàn)唾液中有A和B物質1943年Wiener發(fā)現(xiàn)分泌型占80％AB物質的量具有較顯著的個體差異血清中的血型物質較弱唾液中的血型物質較容易測到,---常見ABO亞型,A抗原中主要為A1和A2 其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、 Amos 、Aint、 Aw和AelB亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm、 Bmos和Bel等

20、其他亞型：嵌合體(Chimera) 、 CisAB型、孟買型、類孟買型,(四)ABO血型系統(tǒng)的抗原，亞型及變異型,ABO亞型的判斷,1. 紅細胞與抗A、抗A1、抗B及抗AB的凝集程度,2. 紅細胞上H物質活性的強弱,3. 血清中是否存在抗A1,4.分泌型人的唾液中A、B和H物質,A1和A2決定簇的區(qū)別是僅存在量的差異還是抗原決定簇結構不同？,A1型和A1B型紅細胞上的A1抗原數(shù)遠遠多于A2型和A2B型紅細胞，A1型個體血清中A酶的

21、活力也遠強于A2型。表明二者之間有量的差別。A2和A2B個體常常產生抗A1，說明A2細胞上缺乏A1細胞上的一種決定簇。,,H抗原強弱趨勢：O>A2 > B > A2B > A1 > A1B,A1和A2同樣存在質的區(qū)別,兩種A型抗原:A、A1。 A1細胞具有A、A1抗原。 A2細胞只有A抗原。 B型人血清中有抗A和抗A1。 A1細胞與抗A、抗A1反應 A

22、2細胞只與抗A反應,,,,,血型,抗原,抗體,A1A2OB,A1、AAHB,抗B抗B、抗A1抗A、抗B、抗A1抗A、抗A1,A1基因與A2基因共同遺傳——A1A2基因被存在的A1基因所隱蔽A2基因與B或O基因配對時——A2B、A2此時的A2基因為顯性遺傳,A1和A2的遺傳及表型,,根據(jù)ABO血型的血清學特點，A型和AB型可分為Al、A2和AlB、A2B四種亞型?？笰血清中含有抗A和抗A1兩種抗體，抗A可以凝集所

23、有A型和AB型紅細胞，而抗A1只能與一部分A型和AB型紅細胞反應. 據(jù)此凡與抗A1反應者被定為A1或A1B型，不與抗A1反應，而與抗A反應者被定為A2或A2B型。,A1和A2亞型鑒定原理,A1和A2表型鑒別,血型 抗原 抗-A 抗-A1A1 A、A1 + +A2 A +

24、 -,,,,A1、A2的血清學區(qū)別是以抗Al試劑作試驗獲得的?？笰1試劑：B型人的血清制成或為雙花 扁豆提取并稀釋的植物凝集素。凡與抗A1試劑發(fā)生凝集反應者為A1，如果同時還與抗B凝集，則為A1B型。不與抗A1試劑凝集者為A2或A2B型。,A1、A2亞型的鑒定方法,,防止誤定血型。在常規(guī)輸血試驗中，A2或A2B型人的血清含有抗A1抗體，患者與供血者間的A1或A2需加以區(qū)別。 較A2更弱的亞血型不常發(fā)現(xiàn)， 一位弱亞型患者錯

25、誤地定型為O型而輸予0型血液時，預期應無嚴重的后果。 若一位具有弱A抗原的供血者血液，被定型錯誤而輸給一位0型的患者時，則能引發(fā)嚴重的輸血反應問題。,A1、A2亞型的臨床意義,用A2細胞重復吸收來源于B型血清，可以移去所有抗A血清，血清中余下的抗體只能與A1型紅細胞反應，表明B型個體的血清中含有抗A和抗A1兩種抗體?？笰1不僅存在于A2亞型，在B型和O型人的血清中除含抗A外還有抗A1 ，所以抗A1試劑可以從B型人血清中獲取。,,A

26、1 4+ 0 4+ 0 4+ 0 0 4+ 0 A HA2 4+ 0 4+ 3+ 0 2+ 0 4+ 0 A HA3 2+mf 0 2+mf 3+ 0

27、 + 0 4+ 0 A HAm 0/± 0 +/± 4+ 0 0 0 4+ 0 A HAx 0/± 0 +/2+ 4+ 0 2+ 0/2+ 4+ 0

28、 HB 0 4+ 4+ 0 3+ 4+ 0 0 B HB3 0 +mf 2+mf 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBm 0 0 0/±

29、 4+ 4+ 4+ 0 0 B HBx 0 0/± 0/2+ 4+ 4+ 4+ 0 0 H,,A亞型及B亞型的鑒定表,紅細胞表現(xiàn)型,紅細胞與已知抗血清反應,血清與試劑紅細胞反應,分泌者唾液 含型物質,抗A 抗B

30、抗AB 抗H 抗A1 A1 A2 B O,,,注：mf為混合外觀凝集；0為無凝聚,,,,,,,,A3,最早由Friedenreich在1936年描述與抗A和抗AB共同孵育時：“混合視野外觀” 。即：小的凝集塊周圍是大量未凝集的細胞。與抗A反應強度低于A2。與抗AB反應呈混合視野,但并不增強.偶有抗A1 (occasionally) 血型物質 A、 HA3不像是A2和O細胞的嵌合體,Aend（Afin

31、n，Abantu）,Aend最早由Weiner等于1959年描述類似于A3細胞：它們與一些抗A和抗AB表現(xiàn)很弱的混合視野外觀Aend分泌型的唾液中只有H物質，但是無A物質抗A1出現(xiàn)在部分Aend個體的血清中10％細胞凝集（Mf）,Am,Am細胞不能被抗A和抗AB凝集，或者僅能發(fā)生很弱的凝集。血型物質: A、 HAm細胞可以吸附放散抗A。Am分泌型的唾液中包含正常含量的A和H物質，Am血清中通常無抗A1。Am作為ABO位點

32、上一個稀有等位基因遺傳。,Ax,Ax表現(xiàn)型最初于1935年報道，它的主要血清學特點是：紅細胞與多數(shù)來源于B型血清的抗A不發(fā)生反應，但是可以被大多數(shù)來源于O型個體的抗AB凝集。血清中含有抗A1，有時可凝集A1和A2細胞除了H物質，Ax分泌型個體唾液中可以撿出痕量的A物質。,Ael,在通常的條件下，Ael細胞與抗A和抗AB不發(fā)生凝集，雖然它們可以結合這些抗體，結合的抗體通過吸收放散技術可以檢測到。Ael分泌型唾液中無A物質，僅有H物

33、質，血清中常含有抗A1，也可以含有能夠凝集A2細胞的抗體。Ael以ABO位點上的一種稀有的等位基因遺傳的。,各種弱A亞型的鑒別程序,B亞型,弱的B變異型是很少的?？赡苁怯捎谠谠S多群體中B基因的頻率要相對低得多。弱B亞型較難以分類。Salmon做出結論：B亞型最好的分類應參照A變異型：B3、Bx、Bm和Bel，另外加上那些不符合其它4種類型的Bw。,成人與新生兒抗原數(shù)量比較,ABH 抗原決定簇,新生兒正定型：RBC與血型試劑反應弱

34、。 1、5－6周的胚胎RBC就可檢測出來 2、出生時發(fā)育不完整 3、2－4歲紅細胞發(fā)育完全,新生兒通常不做反定型 1、 新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟 2、 血清抗體易受到母親血清的干擾,抗A、抗B的特性,IgM、IgGIgM抗體可被2－Me（2－巰基乙醇），DTT(2－硫蘇糖醇)破壞IgA抗體經(jīng)2－Me處理血清學活性下降，但抗體不破壞。IgG抗體分子量小，可以通過胎盤屏障,交叉反應性抗AB：,來源于O型人血清

35、聯(lián)合抗體 ：抗（A＋B) 不是簡單的混合A細胞與O型血清吸收后放散液可以凝集B細胞，反之亦然。,孟買型與類孟買型,孟買型（Oh）和類孟買血型(Amh /Bmh /ABmh /Omh ) 是人群中兩種非常罕見的稀有血型,紅細胞膜上缺乏A、B、H抗原，而血清中則含有抗A、抗B和抗H抗體。由于缺乏H基因，即使孟買型的人有ABO基因，也不會形成ABO抗原。孟買型個體血清中的抗H在4-37℃范圍內都具有很強的活性。血清與所有O型人

36、的紅細胞反應都很強。而且孟買型的抗H常含有IgG類抗體。,孟買型,細胞上沒有H抗原。其細胞上有少量的A或B抗原。原因:（1) H基因受到了其抑制基因z的影響，基因的表達產物大大下降，但仍有一小部分H抗原產生。(2)這一小部分H抗原在正常的A基因或B基因的作用下轉化成少量的A或B抗原。,類孟買型,ABO血型系統(tǒng)基因分型,ABO基因分型及核苷酸序列分析,聚合酶鏈反應PCR-RFLPDNA序列測定,展 望,紅細胞血型領域中還