腎炎四味片可減輕56腎切除大鼠的腎臟纖維化

1、1腎炎四味片可減輕56腎切除大鼠的腎臟纖維化遲雁青，林海英，張濤，劉茂東，王保興，李英(050051河北石家莊，河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院腎內(nèi)科)［摘要］目的觀察腎炎四味片對(duì)56腎切除大鼠腎組織核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)表達(dá)的影響。方法24只Wistar大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(A組)、模型組(B組)、干預(yù)組(C組)、空白對(duì)照組(D組)，C、D兩組術(shù)后3天予腎炎四味片灌胃，術(shù)后第90天處死，RealTimePCR和

2、westernblot分別測(cè)定組織中NFκB、TGFβ1的mRNA和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與A組相比，B組的NFκB、TGFβ1的mRNA和蛋白水平表達(dá)增強(qiáng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，C組雖然高于A組(P＜0.05)，但其表達(dá)低于B組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；免疫組化結(jié)果類似。NFκB、TGFβ1二者的表達(dá)存在密切關(guān)系。結(jié)論腎炎四味片可能通過下調(diào)NFκB、TGFβ1的mRNA和蛋白的表達(dá)發(fā)揮治療腎臟纖維化的作用。［關(guān)鍵詞］腎炎

3、四味片；56腎切除大鼠；腎纖維化；核轉(zhuǎn)錄因子κB；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1［中圖法分類號(hào)］R331R332R692.30.53R693.206［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］AShenyansiweitabletcouldalleviatethefibrosisof56subtotalnephrectomizedratsChiYanqingLinHaiying1LiuMaodongZhangTaoWangBaoxingLiYing(DepartmentofNeu

4、rologyTheThirdHospitalofHebeiMedicalUniversityShijiazhuanHebeiProvince050051China)［Abstract］ObjectiveToobservedtheexpressionofNFκBTGFβ1byshenyansiweipianTabletin56subtotalnephrectomizedrats.Methods24maleWistarratswererom

5、lydividedinto4groupsshamoperatedgroup(groupA)subtotalnephrectomy(STN)group(groupB)STNwithshenyansiweitablettreatedgroup(groupC)nomalratswithshenyansiweitablettreatedgroup(groupD).Theseratswereintragastricadministratedwit

6、hshenyansiweiTabletat3daysafteroperationweresacrificedat90daysafteroperationanalyzedthechangesofexpressionofNFκBTGFβ1byroutineimmunohistochemicalmethod.ResultImmunohistochemicalresults:TheexpressionofNFκBTGFβ1ingroupBgra

7、duallyincreasedtherewassignificantlydifferenceinthesamegroupatthethreetimepointsthatingroupCwassignificantlyhighercomparedwithgroupAofthesamestage(P＜0.05)significantlylowercomparedwithgroupB(P＜0.05).Therewaspositivecrela

8、tionbetweenthetwocytokinesofNFκBTGFβ1therewaspositivecrelationbetweenthetwocytokinesmetionedaboveserumcreatinine.ConclusionShenyansiweiTabletcandownregulatetheexpressionofNFκBTGFβ1in56subtotalnephrectomizedrats.［Keywds］S

9、henyansiweiTablet56subtotalnephrectomizedratRenalfibrosisNFκBTGFβ1SupptedbytheStateAdiministrationTraditionalChineseMedicineoftheHebeiProvince（20072340).Crespondingauth:ChiYanqingTel:8631166781219Email:lilychi@、[基金項(xiàng)目]河北省

10、中醫(yī)藥管理局科研課題（2007234）[通信作者]遲雁青，電話：(0311)66781219，Email:lilychi@腎纖維化是各種慢性腎臟病的最終結(jié)局。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（(transfminggrowthfactβ，TGFβ)）是已知最重要的致纖維化因子。核轉(zhuǎn)錄因子κB(tranionfactnuclearfactκB，NFκB)是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子蛋白，主要涉及機(jī)體防御反應(yīng)、組織損傷和應(yīng)激、細(xì)胞分化和調(diào)亡以及腫瘤生長(zhǎng)抑制過程的信息

11、傳遞，參與了腎臟損傷和腎纖維化的形成[1]。腎炎四味片主要成分為細(xì)梗胡枝子、黃芩、北京石葦、黃芪。臨床用于治療慢性腎炎，主要是通過活血化瘀、清熱解毒、補(bǔ)腎益氣等作用減輕水腫、降低血壓、減少蛋白尿[2]。本實(shí)驗(yàn)通過56腎切除方法建立腎纖維化大鼠模型，應(yīng)用腎炎四味片進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)腎組織NFκB和TGFβ1表達(dá)影響，探討其對(duì)腎纖維化的保護(hù)機(jī)制。1材料與方法1.1模型制備及干預(yù)清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠24只，體質(zhì)量（20010）g（購(gòu)

12、自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），隨機(jī)分為4組，假手術(shù)組（A組）、模型組（B組）、干預(yù)組（C組）、空白對(duì)照組32.3realtimePCR檢測(cè)NFκB、TGFβ1的mRNA表達(dá)水平RealtimePCR結(jié)果顯示，B組中NFκB、TGFβ1的mRNA表達(dá)水平強(qiáng)于空白對(duì)照組和假手術(shù)組，C組NFκB、TGFβ1的mRNA表達(dá)水平降低，雖然強(qiáng)于A組，但較B組有明顯的減輕，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見圖2。00.20.40.60.811.21.

13、41.61.822.2ABCDmRNArelativeexpressionlevelNFkBTGFβ1aabba：P＜0.05，與A組比較；b：P＜0.05，與B組比較圖2RealtimePCR檢測(cè)NFκB和TGFβ1的mRNA表達(dá)2.4Westernblot檢測(cè)NFκB、TGFβ1蛋白的表達(dá)Westernblot結(jié)果顯示，B組中NFκB、TGFβ1的蛋白表達(dá)水平強(qiáng)于空白對(duì)照組和假手術(shù)組，C組NFκB、TGFβ1的蛋白表達(dá)水平降低，雖然

14、強(qiáng)于A組，但已經(jīng)比B組有明顯的減輕，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見圖3。A組B組C組D組NFkBNFkBTGFβTGFβ1βactinβactin00.40.81.21.62ABCDProteinrelativeexpressionlevelNFkBTGFβ1aabb上圖為Westernblot檢測(cè)結(jié)果；下圖為半定量分析結(jié)果a：P＜0.05，與A組比較；b：P＜0.05，與B組比較圖3Westernblot檢測(cè)各組NFκB和TGFβ

15、1的蛋白表達(dá)2.5免疫組織化學(xué)檢查2.5.1NFκB的表達(dá)及分布A、D組腎組織幾乎沒有NFκB表達(dá)。術(shù)后90d，B組大鼠腎間質(zhì)及腎小球中NFκB陽(yáng)性表達(dá)增加，與A、D組相比有顯著性差異（P＜0.05）。C組大鼠NFκB陽(yáng)性表達(dá)較B組明顯減輕（P＜0.05），但仍重于A、D組（P＜0.05）見表2、圖4。2.5.2TGFβ1的表達(dá)及分布A、D組在腎臟皮質(zhì)與髓質(zhì)交界區(qū)的腎小管和腎小球有少量表達(dá)。B組大鼠腎間質(zhì)及腎小球中TGFβ1陽(yáng)性表達(dá)增加

16、，尤以腎間質(zhì)表達(dá)增多明顯，與A、D組相比有顯著性差異（P＜0.05）。C組大鼠TGFβ1陽(yáng)性表達(dá)較B組明顯減輕（P＜0.05），但仍重于A、D組（P＜0.05）見表2、圖5。2.5.3ColⅢ的表達(dá)及分布A、D組在腎小管和間質(zhì)中極少量表達(dá)。B組大鼠腎間質(zhì)ColⅢ陽(yáng)性表達(dá)增加，與A、D組相比有顯著性差異（P＜0.05）。C組大鼠ColⅢ陽(yáng)性表達(dá)較B組明顯減輕（P＜0.05），但仍重于A、D組（P＜0.05）見表2、圖6。表2各組大鼠腎組織

17、免疫組織化學(xué)染色NFκB、TGFβ1、ColⅢ的相對(duì)表達(dá)[n=6，（s）%]組別NFκBTGFβ1ColⅢA2.390.274.020.810.680.12B11.390.91a10.240.31a3.430.45aC10.040.17ab9.240.27ab1.890.31abD2.820.714.040.510.690.11a：P＜0.05，與A、D組比較，b：P＜0.05，與B組比較A組B組C組D組圖4免疫組化檢測(cè)各組大鼠腎組織中

18、NFκB的表達(dá)（200）A組B組C組D組圖5免疫組化檢測(cè)各組大鼠腎組織中TGFβ1的表達(dá)（200）A組D組C組B組圖6免疫組化檢測(cè)各組大鼠腎組織中ColⅢ的表達(dá)（200）3討論轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFβ)是一種具有多向調(diào)節(jié)功能的生長(zhǎng)因子，是致腎纖維化最主要的生長(zhǎng)因子，在哺乳動(dòng)物有三種亞型，其中主要發(fā)揮作用的是TGFβ1。核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)作為一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子在體內(nèi)各組織細(xì)胞中廣泛存在，調(diào)控眾多的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的基因表達(dá)。研究證