鯉魚湯對阿霉素腎病大鼠腎臟纖維化的作用.pdf

1、目的：
　　 腎小球細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解的失衡可導(dǎo)致腎小球濾過膜屏障功能缺失，產(chǎn)生蛋白尿并發(fā)展至纖維化乃至硬化，基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子TIMP-2共同調(diào)節(jié)ECM的新陳代謝，同時受轉(zhuǎn)化生長因子-1(TGF-β1)的調(diào)控。本實驗擬用阿霉素制備阿霉素腎病模型大鼠，用鯉魚湯干預(yù)，觀察MMP-2、TIMP-2、TGF-β1在腎組織中的表達(dá)以及鯉魚湯對其表達(dá)的影響，并觀察尿蛋白、血生化和病理的變化。探討鯉魚湯

2、對阿霉素腎病大鼠腎臟纖維化的作用及其機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、動物模型制備與干預(yù):50只Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，尿蛋白檢測陰性后，隨機(jī)分為空白對照組（N組）、腎病模型組（S組）、厄貝沙坦組（IR組）、鯉魚湯高劑量組（H組）、鯉魚湯低劑量組（L組），每組10只。除N組外各組大鼠參照Bertani[1]的方法，給予單劑量尾靜脈注射阿霉素6.2mg/kg，N組大鼠給予一次性尾靜脈注射等劑量生理鹽水。注射后對大鼠行

3、灌胃干預(yù)，H組以500％鯉魚湯9ml/kg灌胃，L組250％鯉魚湯9ml/kg灌胃;IR組以50mg/kg灌胃（溶解于9ml/kg的飲用水中）;S、N組以9ml/kg飲用水灌胃，每日一次，共干預(yù)8w。
　　 2、生化指標(biāo)檢測:尿標(biāo)本采用金屬代謝籠收集，禁食除水，收集大鼠注射阿霉素前以及注射阿霉素后1w、2w、3w…10w晨尿及12h尿液，測定12h尿蛋白定量。實驗10周末心臟取血，測定總蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、膽固醇、血脂。

4、
　　 3、病理檢查:常規(guī)石蠟切片、HE染色、光鏡下觀察腎小管損害程度、基底膜厚度、纖維化程度等形態(tài)學(xué)變化，IPP6.0專業(yè)圖像分析軟件計算腎小球截面積、腎小球體積。
　　 4、免疫組化檢測MMP-2、TIMP-2蛋白、TGF-β1的表達(dá):采用SABC免疫組化法染色，IPP6.0圖像分析軟件分析切片免疫組化結(jié)果，計算平均光密度。
　　 結(jié)果：
　　 1、12h尿蛋白定量:統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示造模前各組12h

5、尿蛋白排泄量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);造模后1周S組、H組、L組、IR組12h尿蛋白排泄量無統(tǒng)計學(xué)意義，與N組比較均有顯著性意義(P＜0.05），表明造模成功;第8周，H組、L組、IR組12h尿蛋白排泄量呈時間依賴降低，實驗第10周，H組、L組、IR組12h尿蛋白排泄量已顯著降低(P＜0.05)，與S組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、血生化指標(biāo):與N組比較，S組大鼠TP、ALB顯著降低（P＜0.05），

6、Cr、BUN顯著上升(P＜0.05)。與S組比較，H組、L組TP、ALB升高，Cr、BUN有所降低(P＜0.05)。
　　 3、病理結(jié)果:N組大鼠腎小球大小正常，毛細(xì)血管袢開放良好，無炎癥侵潤及ECM的蓄積;S組大鼠腎小球體積明顯增大（與N組比較，P＜0.05），毛細(xì)血管袢變狹窄或閉塞，大量炎細(xì)胞侵潤且系膜細(xì)胞增多，腎小球內(nèi)細(xì)胞減少，可見腎小管萎縮、蛋白管型、腎小球纖維化;H組、L組、IR組腎小球體積輕微增大，系膜細(xì)胞增多不明顯

7、，部分腎小球毛細(xì)血管管腔狹窄，炎癥侵潤不明顯。
　　 4、免疫組化染色結(jié)果:與N組比較，S組大鼠腎組織MMP-2、TIMP-2蛋白的表達(dá)均降低，TGF-β1表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.05），表達(dá)主要定位于腎小球基質(zhì)，腎小管間質(zhì);與S組比較，L組、H組、IR組大鼠腎組織MMP-2、TIMP-2蛋白表達(dá)上調(diào)，TGF-β1表達(dá)降低(P＜0.05)，MMP-2/TIMP-2值明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 鯉