醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)講義

1、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)講義醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)講義浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程組醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程組20122012年9月3日3例加入磷酸緩沖液即可染染色體標(biāo)本。1份Giemsa原液＋9份磷酸緩沖液8磷酸緩沖液(pH6.8)溶液A：磷酸二氫鉀(KH2PO4.2H2O)9.078g溶于1000ml蒸餾水中。溶液B：磷酸氫二鈉(Na2HPO4.2H2O)11.876g溶于1000ml蒸餾水中。100ml緩沖液：需溶液A50.8ml，溶液B49.

2、2ml。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1采血先在供血者肘部用酒精棉球消毒，取2ml干燥滅菌注射器，配上針頭（612號）并吸取肝素液0.2ml濕潤針筒，采靜脈血2ml，轉(zhuǎn)動針筒使血與肝素混勻。2培養(yǎng)采血完畢立即將針頭插入含RPMI1640培養(yǎng)瓶內(nèi)（瓶蓋預(yù)先用酒精棉球消毒），每瓶滴入30滴血，搖勻。2ml血可分裝三至四瓶。置37℃?0.5℃恒溫中培養(yǎng)72小時(shí)，其間可搖動2~3次。3秋水仙素(colchicine)處理在終止培養(yǎng)前2~3小時(shí)，加入秋

3、水仙素，612號針頭3滴（每ml約60滴），使細(xì)胞分裂終止在中期。秋水仙素的濃度不宜過高和作用時(shí)間過長，雖然這樣做可以得到較多的分裂相，但導(dǎo)致染色體過分縮短，不宜用于顯帶分析。4離心將培養(yǎng)物倒入刻度離心管內(nèi)，以1000rpm離心10分鐘，棄去上清液，留底層沉淀物并用吸管打勻。5低滲處理加8ml預(yù)溫(37℃)的0.075MKCl低滲液，用吸管打勻使細(xì)胞懸浮于低滲液中，37℃水浴箱靜止25~30分鐘，使白細(xì)胞膨脹，染色體分散，紅細(xì)胞解體。低

4、滲處理的效果與低滲的成分、處理的時(shí)間和溫度有關(guān)。這是比較關(guān)鍵的一步，對任一組織和低滲液都要事先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最合適的處理時(shí)間。6預(yù)固定在低滲25~30分鐘后，加新配置的固定劑（甲醇:冰醋酸，3:1）1ml，打勻。這樣有助于細(xì)胞的均勻懸浮而不團(tuán)聚凝塊和防止細(xì)胞丟失。甲醇和冰醋酸要現(xiàn)配現(xiàn)用，如放置時(shí)間較長，即不宜再用，以免影響固定效果。7再離心1000rpm離心10分鐘，棄去上清液，留沉淀物。8固定沿離心管壁加入新配制的固定液（甲醇