環(huán)境生物學實驗教案

1、1實驗一實驗一污染物對生物在生物化學和分子水平上的影響污染物對生物在生物化學和分子水平上的影響——空氣中空氣中SOSO2對植物葉片葉綠素含量對植物葉片葉綠素含量及葉綠素及葉綠素a、b含量比例的影響含量比例的影響[實驗目的實驗目的]（1）掌握植物葉綠素含量的測定方法）掌握植物葉綠素含量的測定方法（2）了解）了解SO2對植物葉綠素含量的影響對植物葉綠素含量的影響[實驗原理實驗原理]（1）用丙酮提取葉綠素）用丙酮提取葉綠素（2）葉綠素）葉綠素

2、a、b的最大吸收峰分別位于的最大吸收峰分別位于663nm和645nm，根據(jù)，根據(jù)LambertBeer定律，可得：定律，可得：Ca（mgL）=12.7D663－2.69D645Cb（mgL）=22.9D645－4.68D663式中：Ca、Ca為葉綠素a、b的濃度。將Ca與Cb相加即得葉綠素總量CT：CT（mgL）=CaCb=20.21A6458.02A663按下列公式計算葉綠素在葉片中的含量，并計算葉綠素按下列公式計算葉綠素在葉片中的含

3、量，并計算葉綠素a、b的比例。的比例。mgg??葉綠素濃度提取液最終體積稀釋倍數(shù)葉綠素含量（）=葉片鮮重克數(shù)[實驗器材實驗器材]（1）儀器設備）儀器設備：分光光度計；電子天平；研缽；剪刀；：分光光度計；電子天平；研缽；剪刀；50mL棕色容量瓶；棕色容量瓶；小漏斗；玻璃棒；定量濾紙；吸水紙；滴管；小漏斗；玻璃棒；定量濾紙；吸水紙；滴管；2mL移液管；移液管；50mL燒杯。燒杯。（2）試劑）試劑：丙酮，：丙酮，80%丙酮，石英砂，碳酸鈣粉。

4、丙酮，石英砂，碳酸鈣粉。（3）實驗材料）實驗材料：經(jīng)：經(jīng)SO2熏氣和未經(jīng)熏氣的植物樣品熏氣和未經(jīng)熏氣的植物樣品[實驗步驟實驗步驟]（1）分別剪取兩種處理植物的葉樣，洗凈，擦干，除去中脈，稱?。┓謩e剪取兩種處理植物的葉樣，洗凈，擦干，除去中脈，稱取0.5g，剪碎。剪碎。（2）將剪碎的葉樣置于研缽中，加少許石英砂和碳酸鈣，再加少許丙酮，）將剪碎的葉樣置于研缽中，加少許石英砂和碳酸鈣，再加少許丙酮，磨成勻漿。再加磨成勻漿。再加15mL左右丙酮

5、，攪拌，靜置左右丙酮，攪拌，靜置3min。（3）將提取液過濾至）將提取液過濾至50mL棕色容量瓶中，多次洗滌研缽、研棒。棕色容量瓶中，多次洗滌研缽、研棒。（4）用滴管吸取丙酮，將濾紙上的葉綠素全部洗入容量瓶。用丙酮定容至）用滴管吸取丙酮，將濾紙上的葉綠素全部洗入容量瓶。用丙酮定容至50mL，搖勻。，搖勻。（5）分別?。┓謩e取2mL葉綠素提取液和葉綠素提取液和2mL80%丙酮于丙酮于50mL燒杯，混勻，成燒杯，混勻，成比色液。比色液。3實

6、驗二實驗二污染物對生物在個體水平上的影響污染物對生物在個體水平上的影響——藻類急性毒性試驗藻類急性毒性試驗[實驗目的實驗目的]（1）掌握藻類急性毒性試驗的方法）掌握藻類急性毒性試驗的方法（2）了解毒性試驗在有害物質(zhì)的生態(tài)影響評價中的應用）了解毒性試驗在有害物質(zhì)的生態(tài)影響評價中的應用[實驗原理實驗原理]藻類是水生生態(tài)系統(tǒng)中最重要的初級生產(chǎn)者，影響藻類生長的主要因子包影響藻類生長的主要因子包括光、二氧化碳、溫度、括光、二氧化碳、溫度、pH值

7、及氮、磷、微量元素等營養(yǎng)成分。水環(huán)境中的這值及氮、磷、微量元素等營養(yǎng)成分。水環(huán)境中的這些生態(tài)因子的變化會刺激或抑制藻類的生長。些生態(tài)因子的變化會刺激或抑制藻類的生長。而有毒有害的化學物質(zhì)進入水體，同樣會刺激或抑制藻類的生長。低濃度短時間的接觸可能會刺激藻類的生長，但隨著污染物濃度增加，接觸時間延長，最終都會抑制藻類生長。污染物毒性越強，抑制效應需要的劑量越小。因此，可以用半數(shù)效應濃度指示污染物的毒性，評價污染物對水生生態(tài)系統(tǒng)的影響。因此

8、，藻類急性毒性試驗一方面可以用來評價化學物質(zhì)的毒性，另一方面可以用來評價化學物質(zhì)對水生生態(tài)系統(tǒng)的影響。所以，水生生態(tài)系統(tǒng)藻類毒性試驗已經(jīng)成為許多國家水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測的標準方法之一。藻類藻類生長狀況的觀察采用生物量指標，生物量測定采用光密度法生物量測定采用光密度法。[實驗器材實驗器材]（1）儀器設備）儀器設備：恒溫水??；分光光度計；照度計；：恒溫水浴；分光光度計；照度計；pH試紙；滅菌鍋；三試紙；滅菌鍋；三角瓶；移液管；量筒；燒杯。角瓶；移

9、液管；量筒；燒杯。（2）實驗材料：受試物：實驗材料：受試物：Cd2試驗生物：斜生柵藻試驗生物：斜生柵藻Scenedesmusobliguus（3）培養(yǎng)基）培養(yǎng)基[實驗步驟實驗步驟]（1）藻類培養(yǎng)基的配制）藻類培養(yǎng)基的配制按配方配制，高壓滅菌后分裝在三角瓶中。（2）藻類預培養(yǎng)）藻類預培養(yǎng)準備試驗藻種，包括接種、純化、同步等過程。（3）預備試驗）預備試驗預備試驗的目的在于探明受試物抑制藻類生長的半數(shù)效應濃度（探明受試物抑制藻類生長的半數(shù)效應