谷物種子蛋白質(zhì)中賴氨酸含量的測定

1、谷物種子蛋白質(zhì)中賴氨酸含量的測定谷物種子蛋白質(zhì)中賴氨酸含量的測定一、實驗目的一、實驗目的掌握茚三酮比色法測定氨基酸含量的原理和方法測定谷物種子蛋白質(zhì)中賴氨酸含量。二、實驗原理二、實驗原理蛋白質(zhì)中的賴氨酸具有一個游離的εNH2，它與茚三酮試劑反應生成藍紫色物質(zhì)，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與賴氨酸的含量成線性關系。因此，用已知濃度的游離氨基酸制作標準曲線，通過比色分析（530nm）即可測定出樣品中的賴氨酸含量。亮氨酸與賴氨酸的碳原子數(shù)目相同，

2、而且僅有—個游離氨基(εNH2)，所以通常用亮氨酸亮氨酸配制標準液。但由于這兩種氨基酸分子質(zhì)量不同，以亮氨酸為標準計算賴氨酸含量時，應乘以校正系數(shù)校正系數(shù)1.1515，最后再減去樣品中游離氨基酸含量。三、實驗儀器三、實驗儀器1電子分析天平（11000）、可見分光光度計、恒溫水浴箱、干燥器、移液器。2試管架（塑及鋁）、具塞試管、具塞三角瓶、細口瓶、漏斗（或0.45um濾膜）、吸管等。四、實驗試劑四、實驗試劑10.4molL檸檬酸緩沖液：稱

3、取4.202g檸檬酸和5.88g檸檬酸三鈉，溶于100ml蒸餾水中。2茚三酮試劑：稱40mg二氯化錫(防腐)溶于25ml檸檬酸緩沖液中；稱lg茚三酮溶于25ml95％乙醇中；將上述兩液混合搖勻，濾去沉淀，上清液置冰箱中保存?zhèn)溆谩?0.02molL鹽酸：取12molL鹽酸0.17ml，用蒸餾水稀釋定容至100ml。4亮氨酸標準液：準確稱取20mg亮氨酸，加數(shù)滴0.02molL鹽酸使之溶解，然后用蒸餾水稀釋定容到100ml，則得濃度為200