導(dǎo)入高賴氨酸蛋白質(zhì)基因改良水稻種子的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì).pdf

1、根據(jù)水稻谷蛋白(GluB-1,GeneBank序號(hào)X54314)基因的序列,設(shè)計(jì)了l對(duì)引物,利用PCR方法擴(kuò)增出水稻谷蛋白(GluB-1)基因的啟動(dòng)子序列.分別利用能夠在種子中特異性表達(dá)的水稻谷蛋白啟動(dòng)子和玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、高賴氨酸蛋白質(zhì)基因cDNA和篩選基因nptⅡ基因構(gòu)建了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化用表達(dá)載體pCGK和pCl9ZK.利用能夠在種子中特異性表達(dá)的玉米醇溶蛋白啟動(dòng)子、高賴氨酸蛋白質(zhì)基因cDNA、篩選基因bar基因和核骨架結(jié)合序列(MA

2、R)構(gòu)建了基因槍轉(zhuǎn)化用表達(dá)載體p19ZKBAR和p19ZKMAR,表達(dá)載體p19ZKMAR與表達(dá)載體p19ZKBAR結(jié)構(gòu)的不同之處是載體p19ZKMAR的目的基因兩端連接有核骨架結(jié)合序列(MAR).用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別將植物表達(dá)載體pCl9ZK和pCGK導(dǎo)入水稻品種龍?zhí)馗的成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織中.獲得再生植株178株.PCR和Southern blot檢測(cè)表明,轉(zhuǎn)化表達(dá)載體pCl9ZK獲得轉(zhuǎn)基因植株24株,轉(zhuǎn)化表達(dá)載體pCGK獲得轉(zhuǎn)基因

3、植株l株.用基因槍轟擊法將植物表達(dá)載體p19ZKBAR和p19ZKMAR導(dǎo)入龍?zhí)馗的成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織和中優(yōu)早5號(hào)的幼胚中.共獲得再生植株64株,PCR檢測(cè)16株呈陽(yáng)性(龍?zhí)馗 5株,中優(yōu)早5號(hào)1l株),其中轉(zhuǎn)化表達(dá)載體p19ZKMAR未獲得轉(zhuǎn)基因植株.用葉片涂抹除草劑法檢測(cè)了Tl代轉(zhuǎn)基因植株中外源基因在轉(zhuǎn)基因植株后代中的表達(dá)和分離情況,檢測(cè)了15個(gè)株系群體共160株,抗性植株有8l株(龍?zhí)馗 19株,中優(yōu)早5號(hào)62株),各個(gè)株

4、系中抗性苗的比例(25﹪~80﹪)不同.Southern blot檢測(cè)30株呈陽(yáng)性(龍?zhí)馗 7株,中優(yōu)早5號(hào)23株).Western-blot分析了12株轉(zhuǎn)基因成熟種子中蛋白質(zhì)的積累情況,結(jié)果表明高賴氨酸蛋白質(zhì)基因在水稻中得到了表達(dá),在50 ku處出現(xiàn)了與對(duì)照位置一致的條帶.對(duì)基因槍轉(zhuǎn)化表達(dá)載體p19ZKBAR產(chǎn)生的部分Tl代轉(zhuǎn)基因植株成熟種子進(jìn)行的分析結(jié)果表明,中優(yōu)早5號(hào)轉(zhuǎn)基因種子中蛋白質(zhì)含量(12.07﹪~16.20﹪)平均提高了

5、35.18﹪,蛋白質(zhì)中賴氨酸的含量(4.02﹪~4.35﹪)平均提高了7.42﹪,龍?zhí)馗轉(zhuǎn)基因種子中蛋白質(zhì)含量(11.92﹪~12.87﹪)平均提高了27.69﹪,種子干重中賴氨酸的含量(0.51﹪~0.57﹪)平均提高了16.15﹪.對(duì)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化pCl9ZK產(chǎn)生的部分T0代龍?zhí)馗轉(zhuǎn)基因植株成熟種子的分析結(jié)果表明,種子中蛋白質(zhì)含量(10.87﹪~13.16﹪)平均提高了22.03﹪,種子干重中賴氨酸的含量(0.47﹪~0.6