第十四章-新藥藥物動(dòng)力學(xué)研究1

1、第十四章新藥的藥物動(dòng)力學(xué)研究,新藥研究開發(fā)中藥物動(dòng)力學(xué)的作用1、臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究： 通過動(dòng)物體內(nèi)和體外的研究方法，揭示藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，獲得藥物的基本藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄的過程和特點(diǎn)。2、臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究： 旨在闡明藥物在人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。,第一節(jié) 新藥藥物動(dòng)力學(xué)研究的內(nèi)容,新藥臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究的基本原則： （1）試驗(yàn)

2、目的明確；（2）試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理；（3）分析方法可靠；（4）所得參數(shù)全面，滿足評(píng)價(jià)要求；（5）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)進(jìn)行綜合分析與評(píng)價(jià)；（6）具體問題具體分析。,新藥臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究的基本要求試驗(yàn)藥品 質(zhì)量穩(wěn)定且與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究所用試驗(yàn)藥品一致。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 一般采用成年和健康動(dòng)物。常用的有犬、小鼠、大鼠、兔和豚鼠等。 選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本原則：首選動(dòng)物應(yīng)與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究一致；創(chuàng)新藥應(yīng)選用兩種動(dòng)物或兩種以上的動(dòng)物，其中

3、一種為嚙齒類動(dòng)物，另一種為非嚙齒類動(dòng)物，其他類別藥物，可選用一種動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；口服給藥不宜選用兔等食草類動(dòng)物。,3、給藥途徑和給藥劑量 應(yīng)盡可能與臨床用藥一致。藥動(dòng)學(xué)研究至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，高劑量一般接近于最大耐受量，中、小劑量根據(jù)動(dòng)物有效劑量的上下限范圍選取。以考察藥代過程是否線性和解釋藥效和毒性。,4、取樣時(shí)間點(diǎn)安排 吸收相：2～3個(gè)采樣點(diǎn) Cmax附近：至少3個(gè)采樣點(diǎn)

4、 消除相：4～6個(gè)采樣點(diǎn) 采樣時(shí)間至少應(yīng)持續(xù)到3～5個(gè)半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為 Cmax的1/10～1/20。5、藥時(shí)曲線數(shù)據(jù)處理 要求提供的基本藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有： 靜注給藥的t1/2、V、 AUC和Cl等； 血管外給藥的ka、Cmax、tmax、 t1/2 和AUC等。 水溶性藥物：應(yīng)提供血管外給藥的絕對(duì)生物利用度。 緩、控釋制劑：應(yīng)根

5、據(jù)多次給藥穩(wěn)態(tài)時(shí)完整給藥間隔的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，提供穩(wěn)態(tài)時(shí)達(dá)峰時(shí)間tmax 、穩(wěn)態(tài)峰濃度等。,臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究?jī)?nèi)容,血藥濃度-時(shí)間曲線吸收分布血漿蛋白結(jié)合率藥物生物轉(zhuǎn)化藥物排泄對(duì)藥物代謝酶活性的影響,血藥濃度-時(shí)間曲線,1.劑量的選擇：在有效安全范圍內(nèi)，要選擇三種劑量2.給藥后取血時(shí)間應(yīng)注意到下列三個(gè)相的時(shí)間點(diǎn)分布。血管外給藥時(shí)應(yīng)體現(xiàn)吸收相、平衡相和消除相。實(shí)驗(yàn)觀察期不小于3個(gè)半衰期。3.口服給藥,一般在給藥前禁食

6、12h。研究口服給藥,不宜選用兔和反芻動(dòng)物如羊等。4.盡量從同一動(dòng)物多次采樣以避免采用多只動(dòng)物合并樣品。,動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)在體實(shí)驗(yàn)（原位灌流）,藥物的吸收,離體實(shí)驗(yàn),外翻腸囊,Ussing擴(kuò)散池,Caco-2細(xì)胞模型吸收預(yù)測(cè),藥物的分布,選用大鼠或小鼠做分布試驗(yàn)較為方便。選擇劑量后、至少測(cè)定藥物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、脂肪、骨髓肌等組織的分布。特別注意藥物在靶器官/靶組織(包括藥效學(xué)與毒理學(xué))的分布。以血藥濃度-時(shí)間

7、曲線作參考,選2-3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別代表分布相、平衡相和消除相的藥物。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的組織,必須有至少5只動(dòng)物的數(shù)據(jù)。擬通過改進(jìn)劑型而增加組織分布的藥物，應(yīng)該提供改進(jìn)劑型與原劑型比較的組織分布研究，以支持其立題依據(jù)。,藥物與血漿蛋白的結(jié)合,研究藥物與血漿蛋白結(jié)合的方法包括平衡透析法、超濾法、超速離心法、凝膠過濾法等,注意事項(xiàng),藥物與血漿蛋白結(jié)合程度受很多因素影響,如血漿pH、血漿濃度、藥物濃度等。血漿pH應(yīng)固定為7.4,至少選擇三個(gè)血藥濃度(

8、包括有效濃度在內(nèi))進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。必須證明藥物與半透膜本身有無結(jié)合,并做對(duì)照予以校正。 可被血漿轉(zhuǎn)化的藥物,應(yīng)加入少量酶抑制劑,以終止其轉(zhuǎn)化。建議進(jìn)行比較試驗(yàn)對(duì)于蛋白結(jié)合率大于90%以上的藥物，建議開展體外藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)。,藥物的代謝,考察轉(zhuǎn)化類型、代謝途徑、代謝物結(jié)構(gòu)及量、代謝酶等對(duì)藥物代謝酶的影響觀察藥物對(duì)細(xì)胞色素P450同功酶的誘導(dǎo)或抑制作用；應(yīng)用肝微粒體技術(shù)，了解代謝相互作用或種族差異。,藥物的排泄,確定藥物的排泄途經(jīng)

9、、排泄速率和各排泄途經(jīng)的排泄量。藥物排泄試驗(yàn)一般選用小鼠或大鼠進(jìn)行。,新藥臨床藥物動(dòng)力學(xué)的基本內(nèi)容與要求,臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究的GCP要求受試藥物的要求受試者的選擇劑量的確定藥時(shí)曲線的數(shù)據(jù)的測(cè)定藥時(shí)曲線的數(shù)據(jù)的處理新藥臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究報(bào)告,1.符合GCP要求 試驗(yàn)的方案設(shè)計(jì)與試驗(yàn)過程中，均應(yīng)注意對(duì)受試者的保護(hù)。2．倫理學(xué)考慮 按照GCP原則制訂試驗(yàn)方案并經(jīng)倫理委員會(huì)討論批準(zhǔn)，受試者必須自愿參加試驗(yàn)，并簽訂書面知情同意

10、書。3.受試藥物 應(yīng)為經(jīng)國(guó)家藥檢部門檢驗(yàn)合格，符合臨床研究用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中試放大產(chǎn)品。,新藥臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究的基本要求,4.受試者的選擇 Ⅰ期臨床藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)選擇健康志愿者。年齡以18–45歲為宜。體重符合標(biāo)準(zhǔn)。不吸煙、不嗜酒。5.劑量確定 一般選用低、中、高三種劑量。高劑量組劑量必須接近或等于人最大耐受的劑量。,6.藥時(shí)曲線的數(shù)據(jù)測(cè)定 單劑量和多劑量試驗(yàn)時(shí)，均確定12例以上受試者。 多劑量試驗(yàn)時(shí)，根據(jù)給藥

11、次數(shù)不同而確定不同的服藥方法，具體參見教材和輔導(dǎo)材料。取血時(shí)間點(diǎn)可參見臨床前藥物動(dòng)力學(xué)研究的相關(guān)內(nèi)容。,7.藥時(shí)曲線數(shù)據(jù)處理 通過單次給藥測(cè)得的各受試者血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，需獲得的主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)包括：ka、tmax、Cmax、AUC、V、k、t1／2和Cl等。從尿藥濃度估算藥物經(jīng)腎排泄的速率和總量。通過多次給藥的穩(wěn)態(tài)血藥濃度-時(shí)間曲線數(shù)據(jù)，求得主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)包括：tmax、t1/2、Cl、 、 、 穩(wěn)態(tài)血藥濃度-時(shí)

12、間曲線下面積AUCss及DF等。,,,,新藥藥物動(dòng)力學(xué)研究中生物樣本的測(cè)定方法生物樣品的特點(diǎn)：* 取樣量少* 藥物濃度低* 干擾物質(zhì)多* 個(gè)體差異大,生物樣本的測(cè)定方法：（1）色譜法：氣相色譜法 高效液相色譜法 色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法等；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法 酶

13、免疫分析法 熒光免疫分析法等（3）微生物學(xué)方法,測(cè)定方法注意點(diǎn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件,首選HPLC、GC等分離方法,以及紫外、熒光等測(cè)定方法。用放射性核素標(biāo)記藥物,在用前要進(jìn)行純度檢查,放化純度要<95%。定位標(biāo)記要指明標(biāo)記位置。放射免疫法和酶標(biāo)免疫法具有一定特異性,靈敏度高,但原藥與其代謝產(chǎn)物或內(nèi)源性物質(zhì)常有交叉反應(yīng),需提供證據(jù),說明特異性。生物檢定法常能反映藥效學(xué)

14、本質(zhì),但一般特異性較差,最好用特異性高的方法予以對(duì)比、證明,否則應(yīng)加以說明。,生物樣本測(cè)定方法的方法學(xué)驗(yàn)證指標(biāo)1、精密度2、準(zhǔn)確度3、特異性4、樣品穩(wěn)定性5、回收率6、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍7、定量下限,目前用于生物樣品測(cè)定的部分儀器,填充柱超臨界流體色譜儀,微量毛細(xì)HPLC系統(tǒng),分析\純化LC-MS系統(tǒng),GC-MS系統(tǒng),,正電子發(fā)射斷層顯像(Positron Emission Tomography,PET)基本原理：

15、利用回旋加速器加速帶電粒子(如質(zhì)子、氘核)轟擊靶核發(fā)生核反應(yīng),產(chǎn)生正電子放射性核素, 通過有機(jī)合成或無機(jī)反應(yīng)制備各種正電子顯像劑。顯像劑進(jìn)入體內(nèi)后定位于靶器官,在衰變過程中發(fā)射帶正電荷的電子。這種正電子與人體組織中的負(fù)電子相互作用, 產(chǎn)生能量相等、方向相反的兩個(gè)高能光子, 兩個(gè)光子被PET儀相對(duì)的兩個(gè)探頭同時(shí)檢測(cè)到，這被稱為“符合事件”，表明兩個(gè)探頭連線上存在著被正電子核素標(biāo)記的藥物?！胺鲜录钡亩嗌賱t由藥物在局部的密集程度決定。P

16、ET能對(duì)體內(nèi)放射性標(biāo)記的藥物的分布進(jìn)行準(zhǔn)確的定位和定量，再經(jīng)過計(jì)算機(jī)重建，即可獲得三維的分布圖像。,18F-FDG（18氟－脫氧葡萄糖）顯影,PET的優(yōu)點(diǎn)：1、小動(dòng)物PET顯像的方法和結(jié)果可類推到人體研究，縮短了新化合物進(jìn)入臨床應(yīng)用的時(shí)間。2、可以在同一動(dòng)物身上進(jìn)行無損傷的反復(fù)實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用，并且可以對(duì)同一只動(dòng)物在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行研究，消除種屬差異。3、PET 顯像可以對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行動(dòng)態(tài)掃描，能獲得動(dòng)態(tài)的數(shù)據(jù)資料。 4、

17、可對(duì)整個(gè)動(dòng)物進(jìn)行有效的測(cè)量和在體外快速的掃描，從而對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行縱向研究，可以觀察動(dòng)物體內(nèi)疾病的發(fā)展?fàn)顩r以及藥物對(duì)疾病的治療效果，快速得出更加明確的結(jié)論。,PET的局限性：1、PET設(shè)備較昂貴,試驗(yàn)費(fèi)用高。2、PET用示蹤劑品種有限，而且標(biāo)記過程操作困難，或某些藥物的示蹤劑難以標(biāo)記。3、有些標(biāo)記化合物在體內(nèi)不穩(wěn)定易分解, PET 圖像難以區(qū)分標(biāo)記藥物與代謝物。,計(jì)算機(jī)在藥物動(dòng)力學(xué)研究中的應(yīng)用,主要軟件介紹3P87/97軟件：

18、國(guó)內(nèi)應(yīng)用較廣，可處理各種用藥途徑的線性和非線性藥動(dòng)學(xué)模型，給出有關(guān)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及各種圖表的詳細(xì)結(jié)果。 DAS軟件：是在NDST-21基礎(chǔ)上發(fā)展起來，在微軟視窗下運(yùn)行的專業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件包。DAS可完成臨床前藥學(xué)、藥理以及臨床新藥研究關(guān)系密切的各種統(tǒng)計(jì)計(jì)算， WinNonlin軟件：國(guó)外最常用的藥動(dòng)學(xué)軟件，被認(rèn)為可用于幾乎所有的藥動(dòng)、藥效及非房室模型的分析。NDST軟件：可進(jìn)行與臨床前藥理及臨床新藥研究關(guān)系密切的各種統(tǒng)計(jì)計(jì)算。PKBP-

19、N1軟件： 計(jì)算方法主要有：最優(yōu)化方法中的單純形法、解矛盾方程組的正交化方法與二分法、樣條插值法、優(yōu)選法和逐次直線回歸法等。NONMEN軟件：主要用于群體藥動(dòng)學(xué)的參數(shù)估算及分析，是群體藥動(dòng)學(xué)分析的主流軟件。,第二節(jié) 生物利用度與生物等效性一、生物利用度與生物等效性的概念二、生物利用度和生物等效性研究在新藥研究中的作用三、生物等效性評(píng)價(jià)方法四、生物利用度研究方法五、生物等效性統(tǒng)計(jì)分析,一、生物利用度與生物等效性的概念,生物

20、利用度（Bioavailability, BA）是指劑型中的藥物被吸收進(jìn)入體循環(huán)的速度(rate of bioavailability, RBA)與程度（extent of bioavailability, EBA）。包括絕對(duì)生物利用度和相對(duì)生物利用度,絕對(duì)生物利用度（absolute bioavailability）是藥物吸收進(jìn)入體循環(huán)的量與給藥劑量的比值，是以靜脈給藥制劑（通常認(rèn)為靜脈給藥制劑生物利用度為100%）為參比制劑獲得

21、的藥物吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對(duì)量。相對(duì)生物利用度（relative bioavailability）是以其他非靜脈途徑給藥的制劑（如片劑和口服溶液）為參比制劑獲得的藥物吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對(duì)量，是同一種藥物不同制劑之間比較吸收程度與速度而得到的生物利用度。,計(jì)算公式：,相對(duì)生物利用度,絕對(duì)生物利用度,生物等效性（Bioequivalence, BE）：是指一種藥物的不同制劑在相同試驗(yàn)條件下，給以相同劑量，反映其吸收程度和速度的主要藥物動(dòng)力學(xué)

22、參數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 藥學(xué)等效性（pharmaceutical equivalence）：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則可以認(rèn)為它們是藥學(xué)等效的。,生物等效性與藥學(xué)等效性的區(qū)別,藥學(xué)等效性沒有反映藥物制劑在體內(nèi)的情況。生物等效性的研究,反映了藥物制劑的生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn),對(duì)臨床療效提供直接的證明。,二、生物利用度與生物等效性研究在新藥研究中的作用,新藥研究階段：選擇合適給藥途徑、確定用藥方案；

23、考察處方、工藝對(duì)生物利用度的影響開發(fā)新劑型或仿制：與原研生物等效藥品上市后：處方變更保證生物等效,要求進(jìn)行生物等效性研究的藥物,新開發(fā)的藥物產(chǎn)品,尤其是口服制劑。改變劑型的產(chǎn)品。 改變處方與工藝的產(chǎn)品(仿制產(chǎn)品)。,有必要進(jìn)行生物等效性研究的藥物,預(yù)防與治療嚴(yán)重疾病的藥物治療指數(shù)窄的藥物：治療指數(shù)是毒性濃度與有效濃度的比值水溶性低的藥物：水溶解度低于5mg/ml溶解速度慢的藥物有胃腸道中生物轉(zhuǎn)化或在胃腸中不穩(wěn)定的藥物

24、 有特殊理化性質(zhì)的藥物如多晶型藥物,溶劑化物、粒度影響吸收的藥物賦形劑比例高的產(chǎn)品,三、生物等效性評(píng)價(jià)方法SFDA推薦的方法從高到低排列為：*藥物動(dòng)力學(xué)研究方法*藥效動(dòng)力學(xué)研究方法*臨床比較試驗(yàn)方法*體外研究方法,,,體內(nèi)方法,1、藥物動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)方法 采用峰濃度Cmax、達(dá)峰時(shí)間tmax和血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC全面評(píng)價(jià)。2、藥效動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)方法 采用明確的可分級(jí)定量的人體藥效學(xué)指標(biāo)通過效應(yīng)

25、-時(shí)間曲線（Effect-Time curve）與參比制劑比較來確定生物等效性。 3、臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)評(píng)價(jià)方法 給予患者兩種（或多種）藥物制劑后，通過觀察藥物的療效、不良反應(yīng)與毒性之間的差異進(jìn)行評(píng)價(jià)（≥100例）。4、體外研究 鑒于體外結(jié)果并不能完全代替體內(nèi)行為，一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性。根據(jù)BCS分類，可用體外溶出替代一些藥物的生物等效性試驗(yàn)。,BCS分類系統(tǒng),溶解性：37℃ ，pH 1～7.5，

26、<250mL劑量完全溶解通透性：體內(nèi)吸收<85%；Caco-2 細(xì)胞滲透Papp <酒石酸美托洛爾 （33 ×10-6cm/s）透膜性差： rule of five1）含5個(gè)以上氫鍵供體（-OH/-NH）2)含10個(gè)以上氫鍵受體（N/O）3）LogP<5 正辛醇/水pH7.44) Mw <500尤其是1000以上,四、生物利用度的研究方法,血藥濃度法尿藥數(shù)據(jù)法藥理效應(yīng)法,,（一）血

27、藥濃度法 藥物的吸收量應(yīng)等于劑量乘以吸收分?jǐn)?shù)f，即 制劑的生物利用度F為,,（二）尿藥數(shù)據(jù)法 如果藥物大部分（<70%）經(jīng)尿排泄，而且藥物在尿中的累積排泄量與藥物吸收總量的比值保持不變，則可用藥物在尿中排泄的數(shù)據(jù)估算生物利用度。,,（三）藥理效應(yīng)法 在某些情況下由于分析方法精密度不夠，重現(xiàn)性差或其它原因，無法進(jìn)行血藥濃度測(cè)定，可以用急性藥理作用（如瞳孔放大、心率或血壓）作為藥物生物利用度測(cè)定的

28、指標(biāo)。,五、生物利用度(生物等效性)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),研究單位分析方法的指標(biāo)與要求研究對(duì)象受試制劑與參比制劑試驗(yàn)設(shè)計(jì)洗凈期給藥劑量與方法采樣點(diǎn)的確定結(jié)果處理,1．研究單位的基本條件 要求研究單位應(yīng)有良好的醫(yī)療監(jiān)護(hù)條件，良好的分析測(cè)試條件和良好的數(shù)據(jù)分析處理?xiàng)l件。參加生物利用度研究的人員，應(yīng)包括臨床藥物動(dòng)力學(xué)研究人員、臨床醫(yī)師、分析檢驗(yàn)技術(shù)人員和護(hù)理人員等。,2．供試品的基本要求 供試品的臨床前研究工作已經(jīng)完成并通過嚴(yán)格的

29、臨床前評(píng)審，獲得了國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局的臨床試驗(yàn)批文。供試品應(yīng)當(dāng)在符合GMP條件的車間制備，制備過程應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格執(zhí)行GMP的要求，應(yīng)符合國(guó)家藥品監(jiān)督管理局審定的藥品標(biāo)準(zhǔn)要求并有質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。,3．參比制劑的選擇 參比制劑選擇方法： 絕對(duì)生物利用度研究選用在我國(guó)已獲得上市許可的相同藥物靜脈注射劑作為參比制劑。 相對(duì)生物利用度研究時(shí)，選用在我國(guó)已獲得上市許可的相同藥物相同劑型的主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑；若為完成特定研究目的，可選用相同藥物的

30、其它藥劑學(xué)性質(zhì)相近的上市劑型作為參比制劑，這類參比制劑亦應(yīng)為上市主導(dǎo)產(chǎn)品。,4．檢測(cè)方法的選擇與評(píng)價(jià) 生物樣品中藥物的分離測(cè)定應(yīng)選靈敏度高、專屬性強(qiáng)、精密度好、準(zhǔn)確度高的分析方法。生物樣品分析方法確證完成后方可測(cè)試未知樣品。每個(gè)未知樣品一般測(cè)定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。每批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20％。,5．對(duì)受試對(duì)象的要求 臨床生物等效性評(píng)價(jià)中的

31、生物利用度研究，受試對(duì)象是健康人。年齡一般18～40歲； 性別以男性為宜；體重應(yīng)具標(biāo)準(zhǔn)體重或接近標(biāo)準(zhǔn)體重，一般要求為標(biāo)準(zhǔn)體重（1±10％）范圍內(nèi)，或體重指數(shù)BMI 在20～24范圍內(nèi)；試驗(yàn)前兩周內(nèi)未服用其它藥物，且受試期間忌煙、酒。,6.試驗(yàn)設(shè)計(jì) 盡量避免生物因素與給藥方法影響，成為生物利用度試驗(yàn)應(yīng)注意的重要問題。生物利用度試驗(yàn)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，主要目的就是為了消除個(gè)體差異與試驗(yàn)周期對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。生物利用度的試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求采

32、用隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。,7.洗凈期試驗(yàn)中設(shè)置洗凈期是為了避免前一次所用藥物對(duì)后一次試驗(yàn)產(chǎn)生影響。洗凈期由受試藥物t1/2 而定。洗凈期一般不小于7個(gè) t1/2， 洗凈期通常為1周或2周，半衰期長(zhǎng)的藥物需要更長(zhǎng)的洗凈期。,8.給藥劑量與方法劑量為臨床常用量，最大不得超過最大安全劑量。當(dāng)采用非臨床治療劑量時(shí)，應(yīng)提供劑量設(shè)置的依據(jù)。通常，供試品與參比制劑的給藥劑量應(yīng)該一致。普通制劑的生物利用度試驗(yàn)一般采用單劑量給藥方式。,9.

33、采樣點(diǎn)的確定包括吸收相、平衡相及消除相。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性代謝物3倍t1/2后，或持續(xù)采樣至血藥濃度為Cmax的1/10以后。應(yīng)用尿藥法時(shí)，要求收集受試藥原形或其代謝物7倍t1/2后的全部尿樣。,10.試驗(yàn)中的醫(yī)學(xué)監(jiān)護(hù) 新藥的生物利用度試驗(yàn)方案需經(jīng)倫理委員會(huì)審批通過方可進(jìn)行試驗(yàn)。生物利用度試驗(yàn)工作在一期臨床試驗(yàn)的觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)及時(shí)處理和記錄，并通報(bào)新藥開發(fā)研究

34、單位和藥品監(jiān)督管理部門。,11.結(jié)果處理方法應(yīng)提供如下資料：各受試者經(jīng)時(shí)過程的血藥濃度數(shù)據(jù)、平均值及標(biāo)準(zhǔn)差，并繪制血藥濃度時(shí)間曲線。生物利用度評(píng)價(jià)所需參數(shù)，如藥時(shí)曲線下面積AUC0→t 或 AUC0→∞。峰值血藥濃度Cmax、達(dá)峰時(shí)間tmax，均為實(shí)測(cè)值。生物利用度F。其它藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，如MRT、t1/2等。盡量能提供用血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)擬合得到的血藥濃度隨時(shí)間變化的規(guī)律及其相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。,生物利用度試驗(yàn)的注意點(diǎn),嚴(yán)格挑選受

35、試者、設(shè)立嚴(yán)格的試驗(yàn)設(shè)計(jì)來減少或消除生物學(xué)因素與給藥方法對(duì)生物利用度測(cè)定的影響。采用嚴(yán)格的自身對(duì)照、隨機(jī)分組的試驗(yàn)設(shè)計(jì)。無特殊情況，采用空腹給藥；控制飲水量和飲用水水溫以減少水量和水溫對(duì)藥物吸收的影響。受試者應(yīng)無煙酒嗜好，試驗(yàn)過程應(yīng)禁煙、酒、茶和咖啡。避免受試者參加劇烈運(yùn)動(dòng)或靜臥。對(duì)血藥濃度的分析檢測(cè)方法嚴(yán)格要求。,等效性判斷標(biāo)準(zhǔn),血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC與藥物吸收總量成正比, 代表藥物吸收的程度。達(dá)峰時(shí)tmax表示吸收

36、的速度。峰濃度Cmax是與治療效果及毒性水平有關(guān)參數(shù),也與藥物吸收數(shù)量有關(guān)。,六、生物等效性統(tǒng)計(jì)分析,生物等效性的統(tǒng)計(jì)采用將受試藥和參比藥比較, 從其樣本均數(shù), 推斷總體均數(shù)是否等效。統(tǒng)計(jì)分析多采用方差分析、雙單側(cè)檢驗(yàn)、置信區(qū)間、貝葉斯分析等。將AUC和Cmax兩參數(shù), 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后, 以多因素方差分析(ANOVA) 進(jìn)行判斷, 比較制劑間, 周期間和個(gè)體間的差異, 如P<0.05 說明無差異性。,生物等效性評(píng)價(jià)的檢驗(yàn)方法,

37、以雙向單側(cè)t檢驗(yàn)和計(jì)算(1－2α)%可信區(qū)間(90%可信區(qū)間)進(jìn)行判斷。 雙向單側(cè)t檢驗(yàn), 設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥不等效, 受試藥在參比藥一定范圍之外, 為兩個(gè)單側(cè)t檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí), 說明受試藥沒有超過參比藥的高限和低限, 因此, 兩制劑等效。,方差分析,方差分析是檢驗(yàn)差異的傳統(tǒng)方法,也是其它方法的基礎(chǔ)。方差分析的統(tǒng)計(jì)假設(shè)是:樣品的隨機(jī)化;方差齊性;統(tǒng)計(jì)模型的可加性;殘差的獨(dú)立性和正態(tài)性。,生物等效性評(píng)價(jià)中方差

38、分析的基礎(chǔ),受試者的選擇與分配應(yīng)是隨機(jī)的。試驗(yàn)組與參比組的誤差來源和影響因素應(yīng)當(dāng)相等或至少相當(dāng)。誤差的作用具有加和性且不發(fā)生交互作用。評(píng)價(jià)指標(biāo)符合正態(tài)分布。,若無法滿足上述條件則需采用其它措施如數(shù)據(jù)的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換等以使其符合上述條件。許多生物學(xué)數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布,接近于對(duì)數(shù)正態(tài)分布。由血藥濃度數(shù)據(jù)計(jì)算出的AUC和Cmax趨于偏態(tài)分布,其變異隨平均值增大而增大,對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后可改善這種情況,使其變異與平均值無關(guān)。,方差分析用來檢驗(yàn)試驗(yàn)組與參

39、比組組內(nèi)與組間差異,評(píng)價(jià)受試者、試驗(yàn)周期、制劑間的變異和其它試驗(yàn)設(shè)計(jì)的變異。一般差異的顯著性水平定為0.05。方差分析是顯著性檢驗(yàn),不是等效性檢驗(yàn)。,雙單側(cè)檢驗(yàn),雙單側(cè)t檢驗(yàn)用于可信限檢驗(yàn),確定受試制劑與參比制劑生物利用度參數(shù)平均值的差異是否在允許范圍內(nèi)。,置信區(qū)間,置信區(qū)間分析：生物等效性分析中常用90%的置信區(qū)間分析，即為受試制劑的生物利用度有90％的可能性在此范圍之間。,生物等效判斷標(biāo)準(zhǔn): AUC的90%可信限在參比制

40、劑80%～125%范圍. Cmax的90%可信限在70%～143%范圍. tmax用非參數(shù)檢驗(yàn).,,第三節(jié) 緩釋與控釋制劑的藥物動(dòng)力學(xué)一、緩釋與控釋制劑的藥物動(dòng)力學(xué)設(shè)計(jì)二、緩釋與控釋制劑的生物利用度與生物等效性研究三、緩釋與控釋制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià),緩釋與控釋制劑的定義緩釋制劑：系指在規(guī)定釋放介質(zhì)中，按要求緩慢地非恒速釋放藥物，其與相應(yīng)的普通制劑比較，給藥頻率比普通制劑減少一半或給藥頻率比普通制劑有所減少，且

41、能顯著增加患者順應(yīng)性的制劑。 控釋制劑：系指在規(guī)定釋放介質(zhì)中，按要求緩慢地恒速或接近恒速釋放藥物，且與相應(yīng)的普通制劑比較，給藥頻率比普通制劑減少一半或給藥頻率比普通制劑有所減少，血藥濃度比緩釋制劑更加平穩(wěn)，且能顯著增加患者順應(yīng)性的制劑。,緩釋、控釋制劑和普通制劑的比較,緩控釋制劑設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià)的藥物動(dòng)力學(xué)原理 緩釋與控釋制劑的藥物動(dòng)力學(xué)設(shè)計(jì),,,,由于,符合一室模型藥物的血藥濃度與時(shí)間關(guān)系為,,,,,對(duì)于控釋制劑,如果吸收過程不能

42、被忽略 ，則,,如果控釋部分以零級(jí)速率釋放藥物，同時(shí)有速釋部分劑量,時(shí)，血藥濃度與時(shí)間關(guān)系為：,口服單室模型,當(dāng)控釋制劑以零級(jí)速率釋放藥物時(shí)，控釋制劑的維持劑量Xm等于釋放速率,與維持時(shí)間T的乘積， 而釋放速率,,緩控釋制劑的劑量設(shè)計(jì),,,應(yīng)與體內(nèi)藥物消除量相等，即：,如臨床治療希望該藥物達(dá)到的穩(wěn)態(tài)血藥濃度為,則,,控釋制劑的速釋劑量與維持劑量所產(chǎn)生的血藥濃度時(shí)間曲線,,,,或,速釋劑量的校正方法為：,,控釋制劑的總劑量為速釋劑量與緩釋

43、劑量之和，則,,,不同半衰期藥物的緩釋速釋劑量比,,,,緩控釋制劑生物等效性研究的基本要求,緩釋與控釋制劑的生物利用度與生物等效性研究,1．參比制劑 如果國(guó)內(nèi)已有相同產(chǎn)品上市，應(yīng)選用該緩、控釋制劑相同的國(guó)內(nèi)上市的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑；如系首創(chuàng)的緩、控釋制劑，則可以該藥物已上市同類普通制劑的原創(chuàng)藥或主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑。,2.單劑量給藥試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本同普通制劑，給藥方式應(yīng)與臨床推薦用法用量一致。注意：Cmax 、tmax

44、為單個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)數(shù)據(jù)，其準(zhǔn)確程度有賴于試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)的時(shí)間點(diǎn)確定及藥物消除速度、表觀分布容積的影響，此外緩、控釋制劑的藥時(shí)曲線一般達(dá)峰時(shí)間不明顯，峰濃度多為平臺(tái)狀并維持較長(zhǎng)時(shí)間，有時(shí)還會(huì)出現(xiàn)多峰現(xiàn)象,因此使用Cmax與tmax反映藥物的吸收速度將出現(xiàn)較大誤差。MRT不宜用于反映一些t1/2較長(zhǎng)藥物的吸收速度。,單劑量試驗(yàn)應(yīng)提供的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)：（1）各受試者受試制劑與參比制劑的血藥濃度-時(shí)間曲線。（2）AUC 0→∞ 、AUC 0→?、Cm

45、ax 、tmax和F 值，并應(yīng)盡可能提供其它參數(shù)如平均滯留時(shí)間（MRT）等體現(xiàn)緩（控）釋特征的指標(biāo)。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,AUCss,Cmax,Cmin,,,,τ,,單次給藥及多次給藥試驗(yàn),3.多次給藥試驗(yàn),重復(fù)給藥的人體生物利用度和生物等效性研究,目的: 比較緩控釋制劑與參比制劑多次給藥達(dá)Css時(shí), 藥物的吸收程度、Css和峰谷波動(dòng)的情況。了解緩、控制劑的藥物動(dòng)力學(xué)規(guī)律及特點(diǎn)。1. 服藥方法: 受試制

46、劑: 每日早上空腹服藥一次。 參比制劑: 每日服2～3次, (早、中、晚)。2. 服藥持續(xù)時(shí)間: 根據(jù)藥物消除t1/2估算, <7t1/2。,3. 采血點(diǎn): 達(dá)Css后, 采取三次谷濃度血樣和末次給藥后的系統(tǒng)采樣。4. 進(jìn)行血藥濃度分析并繪制血藥濃度-時(shí)間曲線。5. 藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)估算: AUC、Cmax、Cmin、tmax、Css、 Css 、t1/2、DF和F值。6. 進(jìn)行生

47、物等效性、峰谷波動(dòng)及Css等的評(píng)估。,,,多劑量達(dá)穩(wěn)態(tài)試驗(yàn)應(yīng)提供的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)： （1）各受試者受試制劑與參比制劑的血藥濃度-時(shí)間曲線。（2）各受試者在血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時(shí)間曲線。tmax、AUC0→∞、DF、AUC0→τ、F、MRT、t1/2、 、 等。,,4.食物影響試驗(yàn) 食物對(duì)緩、控釋制劑的影響較大。食物影響試驗(yàn)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)是2×3交叉設(shè)計(jì)。所測(cè)定的指標(biāo)有AUC

48、和Cmax,參比制劑為緩、控釋制劑時(shí)：供試品與參比制劑的AUC0→t 或AUC0→∞比值的90%可信限在80% ～125%置信區(qū)間內(nèi)；供試品與參比制劑的Cmax或比值的90%可信限在70% ～143%置信區(qū)間內(nèi)；供試品與參比制劑的AUC 0→t或AUC 0→∞ 、Cmax或 的雙單側(cè)t檢驗(yàn)均得到P＜0.05的結(jié)果，t1≥ 與t2≥ 同時(shí)成立；tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)無差異，則認(rèn)為供

49、試品與參比制劑為生物等效制劑,,等效性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),參比制劑為普通制劑時(shí)：供試品與參比制劑的AUC0→∞比值的90%可信限在80%～125%置信區(qū)間內(nèi)，雙向單側(cè)t檢驗(yàn)P＜0.05，t1≥ ，t2≥ 則認(rèn)為供試品與參比制劑為吸收程度上的生物等效制劑；Cmax ,DF 和 有顯著降低，tmax有顯著延長(zhǎng)，表明供試品具有緩/控釋特征。,,,（一）釋放度試驗(yàn)釋放度：指一定劑型的藥物在規(guī)定介質(zhì)中釋

50、放的速度和程度。通常緩、控釋制劑的釋放度測(cè)定至少需設(shè)置3個(gè)時(shí)間點(diǎn)。第一點(diǎn)的取樣時(shí)間為0.5－2小時(shí)，用于考察藥物是否有突釋。第二點(diǎn)為在累計(jì)釋放量約為50％左右取樣，用于考察釋藥特性及藥物是否平穩(wěn)釋放。最后取樣在累計(jì)釋放量至少達(dá)80％或釋放達(dá)到平臺(tái)期時(shí)進(jìn)行，用于考察藥物釋放是否基本完全。,緩釋與控釋制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià),中國(guó)藥典收載的緩、控釋制劑及釋放度要求,藥品名稱 釋 放 度 要 求（占標(biāo)示量的百分

51、率） 1h 2h 3h 4h 5h 6h 7h 8h 12h 16h緩釋膠囊 布洛芬 10-35 25-55 50-80 ＞75鹽酸曲馬多 20-45 35-60 55-80 ＞75鹽酸氨溴索 15-45 45-

52、80 ＞80硫酸沙丁胺醇 < 40 45-80 ＞75緩釋片鹽酸嗎啡 25-45 40-60 55-75 65-85 70-90 ＞80鹽酸維拉帕米 20-45 45-70 ＞70氨茶堿 25-45 35-5

53、5 ＞50硫酸亞鐵 20-40 50-75硫酸慶大霉素 45-70 60-85 ＞80氯化鉀 10-35 30-70 ＞80碳酸鋰 45-65 65-85硫酸嗎啡 3

54、0-45 45-65 55-75 65-85 75-95 ＞80己酮可可堿 10-30 30-55 50-85 ＞75茶堿 20-40 40-65 ＞70酒石酸美托洛爾 25-45 40-75

55、 ＞75,,1. 坪時(shí)間（plateau time） （1）半峰濃度維持時(shí)間（2）治療維持時(shí)間（3）延遲商 2. 血藥濃度超過平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度的維持時(shí)間 3. 波動(dòng)度（degree of fluctuate，“ DF”）亦稱峰谷波動(dòng)百分率（the percent peak –trough fluctuation , “PTF%”） 4. 峰谷擺動(dòng)率（Swing%） 5. AUC波

56、動(dòng)百分率（AUC- fluctuation, “AUCF%”） 6. 波動(dòng)系數(shù) （fluctuation index，F(xiàn)I） 7. 面積偏差法 （method of area deviation, RA）,,,穩(wěn)態(tài)時(shí)血藥濃度波動(dòng)情況的評(píng)價(jià),第一層次：體外釋放曲線與體內(nèi)吸收曲線上相應(yīng)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別相關(guān)，為點(diǎn)對(duì)點(diǎn)相關(guān)，為最高水平的相關(guān)。此種緩釋制劑的體外溶出曲線可以直接和藥物吸收的百分?jǐn)?shù)相比較。第二層次：基于統(tǒng)計(jì)距分析的原理，即藥

57、物在體內(nèi)的平均滯留時(shí)間和體外的平均溶出時(shí)間是確定而相關(guān)的。但鑒于平均滯留時(shí)間不能完全描述體內(nèi)的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線，因此這種相關(guān)水平低于第一層次的相關(guān)性。第三層次：指釋放時(shí)間點(diǎn)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之間單點(diǎn)相關(guān)。相關(guān)程度最低。,體外試驗(yàn)與體內(nèi)試驗(yàn)的相關(guān)性評(píng)價(jià),基本要求,了解新藥藥物動(dòng)力學(xué)研究的基本要求和基本內(nèi)容。了解生物利用度研究的基本要求。了解生物等效性統(tǒng)計(jì)分析方法。了解緩釋與控釋制劑的藥物動(dòng)力學(xué)。掌握生物利用度的研究方法。掌握生物等效性評(píng)