藥理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法

1、藥理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法,藥學(xué)院藥理學(xué)科組,,www.nordridesign.com,Contents,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉持與給藥,1,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)和分組,2,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉,3,,4,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血,www.nordridesign.com,,,大鼠,豚鼠,家兔,犬,一、捉持與給藥,小鼠,www.nordridesign.com,小鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起，放在飼養(yǎng)合的面

2、罩上。,用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。,翻轉(zhuǎn)左手掌，以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚，使小鼠整個(gè)呈一條直線。,,,,,用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。,,www.nordridesign.com,大鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,首先戴好防護(hù)手套,用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。,左手順勢按、卡在大鼠軀干背部，稍

3、加壓力向頭頸部滑行。,,,,,以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定。,,www.nordridesign.com,豚鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。,順勢抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)箍其頸部。,用右手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取固定。,,www.nordridesign.com,兔的捉持,,,,,,,,,,,,,,,用右手抓住兔頸部的被毛和

4、皮膚，輕輕把兔提起。,用左手托住兔的臀部,家兔的固定方式有腹臥式和仰臥式兩種,,www.nordridesign.com,犬的捉持,,,,,,,,,,,,,,,實(shí)驗(yàn)者先撫摩，逐步接近，勿使其驚恐或?qū)⑵浼づ?用粗棉繩兜住狗的下頜，并在上頜打結(jié)（勿太緊）。,如犬不合作，則先用一根特制長柄狗頭夾，從后面夾住犬頸，限制犬頭部活動(dòng)，再按上述方法捆住犬嘴。,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿.MPG,www.nordridesign.com,灌胃給藥——大小鼠,,

5、,,,,,,,,,,,,,1、將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液。,左手捉持動(dòng)物，使頭部向上。,右手持針，把灌胃針頭的前端放進(jìn)動(dòng)物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推。,,,,,用右手食指將針?biāo)聣?，將注射器中的藥液灌入?dòng)物的胃中。,,劑量：小鼠約0.1-0.5ml／10g體重。最大體積為1.0ml/只 大鼠約1-2 ml／100g體重，最大體積為1.0ml/只,www.nordridesign.com,灌胃給藥

6、——兔,,,,,,,,,,,,,,,將兔放進(jìn)固 定架內(nèi)，灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰，將下頜擠開使兔被動(dòng)張口。,右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。,胃管經(jīng)開口器的孔插入，向前推進(jìn)約15cm，可達(dá)胃內(nèi)。,,,,,在插管時(shí)應(yīng)將胃管另一端泡在水中確認(rèn)沒有冒氣泡，即可用注射器經(jīng) 胃管注入藥液。,,豚鼠灌胃同家兔,www.nordridesign.com,皮下注射給藥——大小鼠,,,,,,,,,,,,,,,頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的

7、皮下,注射針頭取一銳角角度刺入皮下。,將針頭輕輕向左右 擺動(dòng)，易擺動(dòng)則表示已 刺入皮下。,,,,,再輕輕抽吸， 如無回血，可緩慢地將 藥物注入皮下,,www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——大小鼠,,,,,,,,,,,,,,,將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器 中，通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴,用左手捏住鼠尾巴中下部，用75％ 酒精棉球反復(fù)擦拭尾部,注射時(shí)，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用

8、食指從下面托起尾，,,,,,右手持4號(hào)針頭的注射器，使針頭與 靜脈平行（小于30度角）,,大鼠亦可用舌下靜脈注射,www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——犬,,,,,,,,,,,,,,,前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射 。,先將注射部位毛剪去 。,在靜脈血管的近心端，用乳膠管扎緊肢體，使血管充盈，注射器針頭向靜脈血管的近心端方向穿刺 。,,,,,回抽注射器針?biāo)?，如有回血，則證明針尖在血管內(nèi)，即可推注藥液。,,

9、www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——兔,,,,,,,,,,,,,,,兔放在固定架內(nèi)，酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳緣靜脈充盈。,用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無名指和小指放在耳郭下作墊。,右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針 頭從遠(yuǎn)心端插入血管,,,,,回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血,,豚鼠可用足背靜脈注射,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥.MPG,www.nordridesign.com,二、實(shí)驗(yàn)

10、動(dòng)物的采血,尾尖采血,眼眶靜脈叢采血,斷頭采血,腹主動(dòng)脈采血,,心臟采血,腹主動(dòng)脈采血,靜脈采血,www.nordridesign.com,方法：固定動(dòng)物并露出鼠尾，將尾部在45℃的溫水中浸泡數(shù)分鐘（或以二甲苯棉球涂擦），使尾部血管擴(kuò)張。將鼠尾擦干，用銳器切去尾尖0.3～0.5cm，讓血液滴入盛器或直接以血紅蛋白吸管吸取。對(duì)象：大、小鼠特點(diǎn)：小量采血，可以多次采血。,,,,,1,尾尖采血,www.nordridesign.com,方

11、法：用左手捉鼠，拇指及中指抓住頭頸部皮膚，食指按于眼后，使眼球輕度突出，眼底球后靜脈叢淤血。右手持取內(nèi)徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細(xì)管（臨用前折斷成1-1.5cm長的毛細(xì)管段，浸入1％肝素溶液中，干燥后用）刺入深度小鼠2～3mm，大鼠4～5mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)再稍后退，得到所需要的血量后，拔出。 對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：中等血量（0.2～0.3ml，小鼠；0.5～1.0ml，大白鼠），避免動(dòng)物死亡。,2,眼眶靜脈叢采血,www.n

12、ordridesign.com,方法：左手以拇指和食指保持動(dòng)物的頭頸部，使其頭略下傾，右手持剪刀猛力剪斷鼠頸，讓血液滴入盛器。 對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：需要血量較大（小白鼠可采血0.8～1.0ml，大白鼠可采血5.0～8.0ml） ，且不需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。,3,斷頭采血,www.nordridesign.com,方法：動(dòng)物要麻醉后進(jìn)行，用針管在腹主動(dòng)脈分叉處，與血管平行刺入。對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：需要血量較大，且不

13、需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。,4,腹主動(dòng)脈采血,www.nordridesign.com,方法：將動(dòng)物背位固定，在左胸第2至第4肋間剪毛一塊，用碘酒和酒精消毒。然后用配有7號(hào)針頭的10ml注射器，在心跳最明顯處作穿刺。針頭刺入心臟后即見血液流入注射器；或邊刺邊抽，直至血液流入注射器。取得所需血量后，迅速將針頭拔出，這樣心肌上的穿刺孔較易閉合。 對(duì)象：兔、豚鼠等。特點(diǎn)：采血量較大，繼續(xù)保存動(dòng)物生命。,5,心臟采血,www.nordr

14、idesign.com,方法：將家兔放在固定箱內(nèi)，剪去擬采血耳殼上的毛，用電燈照射加熱或用二甲苯棉球涂擦耳殼，使耳部血管擴(kuò)張。用粗針頭刺破耳緣靜脈或以刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出，滴入已放有抗凝劑的盛器中。采血完畢，用干棉球壓住出血口，以待止血。如一時(shí)不易止血，可用木夾夾住耳殼10～20分鐘。 對(duì)象：犬——在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血；小型豬——為耳大靜脈、后肢靜脈特點(diǎn)：采血量較大，繼續(xù)保存動(dòng)物生命。,6,靜脈采血,www.

15、nordridesign.com,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組,（一）編號(hào)： 1、單色涂染法：在每組動(dòng)物不超過l0只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過40只的情況下適用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠。 常用染色劑：3-5％苦味酸溶液， 可染成黃色。,www.nordridesign.com,方法步驟： (1)涂染原則：從左到右、從上到下。 (2)左前肢為l號(hào)、左側(cè)腹部2號(hào)、 左后肢3號(hào)。 (3)兩耳后部4號(hào)、背中部5號(hào)、

16、 后肢背部6號(hào)。 (4)右前肢7號(hào)、 右側(cè)腹部8號(hào)、 右后肢9號(hào)。 (5)尾巴根為10號(hào)。（6）額部為20號(hào),www.nordridesign.com,2、雙色涂染法： 在每組動(dòng)物不超過100只的情況下用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠。 常用染色劑： (1)3-5％苦味酸溶液，可染成黃色。 ——作為“個(gè)”位數(shù)。 (2) 0.5%中性紅或品紅溶液，可染

17、成紅色?！鳛椤笆蔽粩?shù)。,www.nordridesign.com,方法步驟： (1) 用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記。 (2) 用苦味酸(黃色)染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)。(3) 用品紅(紅色)染色標(biāo)記作為十位數(shù)，（4）左前肢為10號(hào)、 左側(cè)腹部20號(hào)、 左后肢30號(hào)， 兩耳后部40號(hào)、 背部50號(hào)、 后肢背部60號(hào)， 右前肢70號(hào)、 右側(cè)腹部 80號(hào)、 右后肢90號(hào) 第100號(hào)不作染色標(biāo)記。,

18、www.nordridesign.com,3、穿耳孔法 用專用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法，原則是：左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：兔、犬、豬4、標(biāo)牌法 一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上或 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：犬、猴5、烙印法6、剪毛法,,,www.nordridesign.com,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組,（二）分組：1、組別的要求： 正常對(duì)照組

19、模型組 陽性藥組 藥物不同劑量組,www.nordridesign.com,（1）正常對(duì)照組　?、?要求　不加任何處理，指在正常條件下進(jìn)行觀察和對(duì)照，給藥組如是灌胃給藥，對(duì)照組應(yīng)用灌胃溶劑?！　、?目的　對(duì)比觀察模型是否成功；觀察被試藥能否使病理改變恢復(fù)正常。（2）陽性藥對(duì)照組　?、?要求　所選藥必須是藥典所有的或國家批準(zhǔn)的藥，如用西藥，則采用公認(rèn)的，療效可靠的?！　、?目的　說明所用方法的可靠性；對(duì)

20、比新藥的優(yōu)劣和特點(diǎn)。（3）模型對(duì)照組　?、?要求　除不用藥外，其他處理同給藥組，模型要符合中醫(yī)證或病的模型。　?、?目的　對(duì)比觀察受試藥的藥理作用。,,www.nordridesign.com,（4）藥物組■一般應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，大動(dòng)物，操作特殊困難者可設(shè)兩個(gè)劑量組；■能夠測出LD50的受試藥物，動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量一般為1/10～1/5 LD50；■很多中藥制劑毒性甚小，無法測出LD50者，一般常用人用劑量（g或mg生藥/kg體

21、重）來折算動(dòng)物用量；■正式實(shí)驗(yàn)時(shí)常以等效劑量作為中劑量或小劑量，大、中、小劑量差以2～3的等比級(jí)數(shù)為宜；,,,www.nordridesign.com,,,www.nordridesign.com,,完全隨機(jī)分組 完全隨機(jī)分組時(shí)將試驗(yàn)對(duì)象完全按隨機(jī)原則分組。它的設(shè)計(jì)、分組、和統(tǒng)計(jì)處理都比較簡單，但試驗(yàn)效率較低。 例：將30只SD 大鼠隨機(jī)分配到甲、乙、丙3組。 使用excel對(duì)試驗(yàn)對(duì)象完全隨機(jī)分組的操作步驟

22、如下:,（二）分組的方法,www.nordridesign.com,,1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、隨機(jī)號(hào)、分組號(hào)，隨后在A2、A3中分別鍵入1、2，然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成1～30的編號(hào)。 2.在B2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字，然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在B2～B31生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。故需選中“B2”至“B31”單元格

23、區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性粘貼。,www.nordridesign.com,,3.選中A 列、B 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇以‘’隨機(jī)數(shù)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,按“確定”按扭,則按B 列隨機(jī)數(shù)字的大小完成A 列、B 列的排序。 4.分別在C2～C11、C12～C21 和C22～C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序

24、”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。（見表1）,www.nordridesign.com,,隨機(jī)區(qū)組分組 隨機(jī)區(qū)組分組是按照一定條件，將幾個(gè)條件相同的試驗(yàn)對(duì)象分為一個(gè)區(qū)組，然后在每個(gè)區(qū)組內(nèi)部按隨機(jī)化原則，將每個(gè)對(duì)象分配到各組。 例：將SD大鼠32只，體重180g～220g,按體重大小配成8 個(gè)單位組,每個(gè)單位組中的4 只大鼠隨機(jī)分配接受A、B、C

25、、D 4 種處理,試給出隨機(jī)化分組的結(jié)果 1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、區(qū)組號(hào)、隨機(jī)號(hào)，隨后在A2A3中分別鍵入1、2，然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成1～32的編號(hào)。 2.在C2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字，然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在C2～C33生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。故需選中“C2”至“C33”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域

26、,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性粘貼。,www.nordridesign.com,,3.選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“區(qū)組”為“主要關(guān)鍵字”排序“, 隨機(jī)數(shù)”為“次要關(guān)鍵字”排序,然后,單擊“確定”按鈕,即完成以區(qū)組單位的隨機(jī)數(shù)字排序4.分別在C2～C11、C12～C21 和C22～C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序

27、”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。5. 在“D1”中鍵入“分組號(hào)”,在“D2”、“D3”、“D4”和“D5”中分別依次鍵入“1”、“2”、“3”和“4”,對(duì)余下的各個(gè)區(qū)組,同樣依次輸入“1”、“2”、“3”和“4”,作為同一區(qū)組內(nèi)4 對(duì)象的分組號(hào)。,www.nordridesign.com,,6. 單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇“編號(hào)”

28、為排序的“主要關(guān)鍵字”,單擊“確定”按鈕,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。（見表2）,www.nordridesign.com,,②分層分組法：將動(dòng)物先按雌雄分層，然后分別稱體重，將體重相同的放在一起，不同體重的動(dòng)物放在不同的動(dòng)物盒中，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求分別放在各組動(dòng)物盒中，使每只動(dòng)物都有相同的機(jī)會(huì)分配到各組，如此分組的結(jié)果，各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物平均體重基本一致。,www.nordridesign.com,,③抽簽法：如有小鼠40只，要隨

29、機(jī)分為四組，可將小鼠從1-40編號(hào)，將準(zhǔn)備的號(hào)簽也編1-40號(hào)，然后將號(hào)簽充分混合后，隨機(jī)各抽10個(gè)號(hào)，然后對(duì)號(hào)將小鼠分配到各個(gè)組去；,www.nordridesign.com,,④摸球法：如實(shí)驗(yàn)所需設(shè)四組，即可用40只雌雄各半的小鼠，將小鼠按體重大小排列，雄性鼠編為1-20號(hào)，雌性鼠編為21-40號(hào)，然后用紅、黃、藍(lán)、綠四種彩球表示甲、乙、丙、丁四組，將數(shù)量相等四種顏色的球放入一個(gè)口袋里，充分混合后，每次摸取都要徹底混合，每次摸出一

30、個(gè)，然后放回袋中，若第一次摸出是紅球，就將第一鼠放入甲組，第二次摸出的綠球，就將第二號(hào)放入丁組，第三次摸出的又是紅球，因已出現(xiàn)過紅球，可不計(jì)再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的籃球，將第三號(hào)鼠放入丙組，第四號(hào)鼠不必再摸球決定，剩下的乙組就是第四號(hào)鼠，如此類推，將鼠分配完畢。,www.nordridesign.com,四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉,動(dòng)物麻醉是消除動(dòng)物手術(shù)疼痛，便于實(shí)驗(yàn)操作，保證動(dòng)物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。動(dòng)物全身麻醉分四期：1

31、.第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)失調(diào)；2.第二期：不隨意興奮期，由意識(shí)完全喪失至規(guī)則的自動(dòng)呼吸開始時(shí)止。3.第三期：外科麻醉期，4.第四期：延髓麻醉期，進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過量。,www.nordridesign.com,麻醉方法與麻醉藥,麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動(dòng)物麻醉。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局

32、麻）,www.nordridesign.com,常用麻醉藥的劑量及注射途徑,www.nordridesign.com,麻醉注意事項(xiàng),麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重；注意麻醉劑量，麻醉劑量與動(dòng)物品種、健康狀況有關(guān)；麻醉過程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況；注意保溫，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平；靜脈注射時(shí)，速度要均勻，不宜太快。注射速度過快是引起動(dòng)物死亡的重要因素之一；如麻醉深度不夠，必須經(jīng)過一定時(shí)間后，才能補(bǔ)充麻醉劑，如戊巴比妥