藥理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法_第1頁
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文檔簡介

1、藥理學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法,藥學(xué)院藥理學(xué)科組,,www.nordridesign.com,Contents,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉持與給藥,1,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)和分組,2,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉,3,,4,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血,www.nordridesign.com,,,大鼠,豚鼠,家兔,犬,一、捉持與給藥,小鼠,www.nordridesign.com,小鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起,放在飼養(yǎng)合的面

2、罩上。,用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚,將小鼠提起。,翻轉(zhuǎn)左手掌,以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚,使小鼠整個(gè)呈一條直線。,,,,,用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚,將小鼠提起。,,www.nordridesign.com,大鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,首先戴好防護(hù)手套,用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起,放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。,左手順勢按、卡在大鼠軀干背部,稍

3、加壓力向頭頸部滑行。,,,,,以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚,其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚,完成抓取固定。,,www.nordridesign.com,豚鼠的捉持,,,,,,,,,,,,,,,先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。,順勢抓緊其肩胛上方皮膚,拇指和食指環(huán)箍其頸部。,用右手輕輕托住其臀部,即可將豚鼠抓取固定。,,www.nordridesign.com,兔的捉持,,,,,,,,,,,,,,,用右手抓住兔頸部的被毛和

4、皮膚,輕輕把兔提起。,用左手托住兔的臀部,家兔的固定方式有腹臥式和仰臥式兩種,,www.nordridesign.com,犬的捉持,,,,,,,,,,,,,,,實(shí)驗(yàn)者先撫摩,逐步接近,勿使其驚恐或?qū)⑵浼づ?用粗棉繩兜住狗的下頜,并在上頜打結(jié)(勿太緊)。,如犬不合作,則先用一根特制長柄狗頭夾,從后面夾住犬頸,限制犬頭部活動(dòng),再按上述方法捆住犬嘴。,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿.MPG,www.nordridesign.com,灌胃給藥——大小鼠,,

5、,,,,,,,,,,,,,1、將灌胃針連接在注射器上,吸入一定量的藥液。,左手捉持動(dòng)物,使頭部向上。,右手持針,把灌胃針頭的前端放進(jìn)動(dòng)物的口腔,順著上腭部插入咽部,順咽后壁輕輕往下推。,,,,,用右手食指將針?biāo)聣?,將注射器中的藥液灌入?dòng)物的胃中。,,劑量:小鼠約0.1-0.5ml/10g體重。最大體積為1.0ml/只 大鼠約1-2 ml/100g體重,最大體積為1.0ml/只,www.nordridesign.com,灌胃給藥

6、——兔,,,,,,,,,,,,,,,將兔放進(jìn)固 定架內(nèi),灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰,將下頜擠開使兔被動(dòng)張口。,右手將開口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。,胃管經(jīng)開口器的孔插入,向前推進(jìn)約15cm,可達(dá)胃內(nèi)。,,,,,在插管時(shí)應(yīng)將胃管另一端泡在水中確認(rèn)沒有冒氣泡,即可用注射器經(jīng) 胃管注入藥液。,,豚鼠灌胃同家兔,www.nordridesign.com,皮下注射給藥——大小鼠,,,,,,,,,,,,,,,頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的

7、皮下,注射針頭取一銳角角度刺入皮下。,將針頭輕輕向左右 擺動(dòng),易擺動(dòng)則表示已 刺入皮下。,,,,,再輕輕抽吸, 如無回血,可緩慢地將 藥物注入皮下,,www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——大小鼠,,,,,,,,,,,,,,,將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器 中,通過金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴,用左手捏住鼠尾巴中下部,用75% 酒精棉球反復(fù)擦拭尾部,注射時(shí),以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè),用

8、食指從下面托起尾,,,,,,右手持4號(hào)針頭的注射器,使針頭與 靜脈平行(小于30度角),,大鼠亦可用舌下靜脈注射,www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——犬,,,,,,,,,,,,,,,前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射 。,先將注射部位毛剪去 。,在靜脈血管的近心端,用乳膠管扎緊肢體,使血管充盈,注射器針頭向靜脈血管的近心端方向穿刺 。,,,,,回抽注射器針?biāo)?,如有回血,則證明針尖在血管內(nèi),即可推注藥液。,,

9、www.nordridesign.com,靜脈注射給藥——兔,,,,,,,,,,,,,,,兔放在固定架內(nèi),酒精消毒并揉搓血管,使兔的耳緣靜脈充盈。,用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端,拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端,無名指和小指放在耳郭下作墊。,右手拿注射器,針尖的斜面朝上,將針 頭從遠(yuǎn)心端插入血管,,,,,回抽有血即可注射,拔針后用棉球止血,,豚鼠可用足背靜脈注射,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥.MPG,www.nordridesign.com,二、實(shí)驗(yàn)

10、動(dòng)物的采血,尾尖采血,眼眶靜脈叢采血,斷頭采血,腹主動(dòng)脈采血,,心臟采血,腹主動(dòng)脈采血,靜脈采血,www.nordridesign.com,方法:固定動(dòng)物并露出鼠尾,將尾部在45℃的溫水中浸泡數(shù)分鐘(或以二甲苯棉球涂擦),使尾部血管擴(kuò)張。將鼠尾擦干,用銳器切去尾尖0.3~0.5cm,讓血液滴入盛器或直接以血紅蛋白吸管吸取。對(duì)象:大、小鼠特點(diǎn):小量采血,可以多次采血。,,,,,1,尾尖采血,www.nordridesign.com,方

11、法:用左手捉鼠,拇指及中指抓住頭頸部皮膚,食指按于眼后,使眼球輕度突出,眼底球后靜脈叢淤血。右手持取內(nèi)徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細(xì)管(臨用前折斷成1-1.5cm長的毛細(xì)管段,浸入1%肝素溶液中,干燥后用)刺入深度小鼠2~3mm,大鼠4~5mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)再稍后退,得到所需要的血量后,拔出。 對(duì)象:大、小鼠等。特點(diǎn):中等血量(0.2~0.3ml,小鼠;0.5~1.0ml,大白鼠),避免動(dòng)物死亡。,2,眼眶靜脈叢采血,www.n

12、ordridesign.com,方法:左手以拇指和食指保持動(dòng)物的頭頸部,使其頭略下傾,右手持剪刀猛力剪斷鼠頸,讓血液滴入盛器。 對(duì)象:大、小鼠等。特點(diǎn):需要血量較大(小白鼠可采血0.8~1.0ml,大白鼠可采血5.0~8.0ml) ,且不需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。,3,斷頭采血,www.nordridesign.com,方法:動(dòng)物要麻醉后進(jìn)行,用針管在腹主動(dòng)脈分叉處,與血管平行刺入。對(duì)象:大、小鼠等。特點(diǎn):需要血量較大,且不

13、需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。,4,腹主動(dòng)脈采血,www.nordridesign.com,方法:將動(dòng)物背位固定,在左胸第2至第4肋間剪毛一塊,用碘酒和酒精消毒。然后用配有7號(hào)針頭的10ml注射器,在心跳最明顯處作穿刺。針頭刺入心臟后即見血液流入注射器;或邊刺邊抽,直至血液流入注射器。取得所需血量后,迅速將針頭拔出,這樣心肌上的穿刺孔較易閉合。 對(duì)象:兔、豚鼠等。特點(diǎn):采血量較大,繼續(xù)保存動(dòng)物生命。,5,心臟采血,www.nordr

14、idesign.com,方法:將家兔放在固定箱內(nèi),剪去擬采血耳殼上的毛,用電燈照射加熱或用二甲苯棉球涂擦耳殼,使耳部血管擴(kuò)張。用粗針頭刺破耳緣靜脈或以刀片在血管上切一小口,讓血液自然流出,滴入已放有抗凝劑的盛器中。采血完畢,用干棉球壓住出血口,以待止血。如一時(shí)不易止血,可用木夾夾住耳殼10~20分鐘。 對(duì)象:犬——在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血;小型豬——為耳大靜脈、后肢靜脈特點(diǎn):采血量較大,繼續(xù)保存動(dòng)物生命。,6,靜脈采血,www.

15、nordridesign.com,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組,(一)編號(hào): 1、單色涂染法:在每組動(dòng)物不超過l0只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過40只的情況下適用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:大鼠、小鼠。 常用染色劑:3-5%苦味酸溶液, 可染成黃色。,www.nordridesign.com,方法步驟: (1)涂染原則:從左到右、從上到下。 (2)左前肢為l號(hào)、左側(cè)腹部2號(hào)、 左后肢3號(hào)。 (3)兩耳后部4號(hào)、背中部5號(hào)、

16、 后肢背部6號(hào)。 (4)右前肢7號(hào)、 右側(cè)腹部8號(hào)、 右后肢9號(hào)。 (5)尾巴根為10號(hào)。(6)額部為20號(hào),www.nordridesign.com,2、雙色涂染法: 在每組動(dòng)物不超過100只的情況下用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:大鼠、小鼠。 常用染色劑: (1)3-5%苦味酸溶液,可染成黃色。 ——作為“個(gè)”位數(shù)。 (2) 0.5%中性紅或品紅溶液,可染

17、成紅色?!鳛椤笆蔽粩?shù)。,www.nordridesign.com,方法步驟: (1) 用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記。 (2) 用苦味酸(黃色)染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)。(3) 用品紅(紅色)染色標(biāo)記作為十位數(shù),(4)左前肢為10號(hào)、 左側(cè)腹部20號(hào)、 左后肢30號(hào), 兩耳后部40號(hào)、 背部50號(hào)、 后肢背部60號(hào), 右前肢70號(hào)、 右側(cè)腹部 80號(hào)、 右后肢90號(hào) 第100號(hào)不作染色標(biāo)記。,

18、www.nordridesign.com,3、穿耳孔法 用專用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法,原則是:左耳代表十位,右耳代表個(gè)位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:兔、犬、豬4、標(biāo)牌法 一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上或 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:犬、猴5、烙印法6、剪毛法,,,www.nordridesign.com,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組,(二)分組:1、組別的要求: 正常對(duì)照組

19、模型組 陽性藥組 藥物不同劑量組,www.nordridesign.com,(1)正常對(duì)照組 ?、?要求 不加任何處理,指在正常條件下進(jìn)行觀察和對(duì)照,給藥組如是灌胃給藥,對(duì)照組應(yīng)用灌胃溶劑?! 、?目的 對(duì)比觀察模型是否成功;觀察被試藥能否使病理改變恢復(fù)正常。(2)陽性藥對(duì)照組 ?、?要求 所選藥必須是藥典所有的或國家批準(zhǔn)的藥,如用西藥,則采用公認(rèn)的,療效可靠的?! 、?目的 說明所用方法的可靠性;對(duì)

20、比新藥的優(yōu)劣和特點(diǎn)。(3)模型對(duì)照組 ?、?要求 除不用藥外,其他處理同給藥組,模型要符合中醫(yī)證或病的模型。 ?、?目的 對(duì)比觀察受試藥的藥理作用。,,www.nordridesign.com,(4)藥物組■一般應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組,大動(dòng)物,操作特殊困難者可設(shè)兩個(gè)劑量組;■能夠測出LD50的受試藥物,動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量一般為1/10~1/5 LD50;■很多中藥制劑毒性甚小,無法測出LD50者,一般常用人用劑量(g或mg生藥/kg體

21、重)來折算動(dòng)物用量;■正式實(shí)驗(yàn)時(shí)常以等效劑量作為中劑量或小劑量,大、中、小劑量差以2~3的等比級(jí)數(shù)為宜;,,,www.nordridesign.com,,,www.nordridesign.com,,完全隨機(jī)分組 完全隨機(jī)分組時(shí)將試驗(yàn)對(duì)象完全按隨機(jī)原則分組。它的設(shè)計(jì)、分組、和統(tǒng)計(jì)處理都比較簡單,但試驗(yàn)效率較低。 例:將30只SD 大鼠隨機(jī)分配到甲、乙、丙3組。 使用excel對(duì)試驗(yàn)對(duì)象完全隨機(jī)分組的操作步驟

22、如下:,(二)分組的方法,www.nordridesign.com,,1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、隨機(jī)號(hào)、分組號(hào),隨后在A2、A3中分別鍵入1、2,然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成1~30的編號(hào)。 2.在B2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字,然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在B2~B31生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。故需選中“B2”至“B31”單元格

23、區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性粘貼。,www.nordridesign.com,,3.選中A 列、B 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇以‘’隨機(jī)數(shù)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,按“確定”按扭,則按B 列隨機(jī)數(shù)字的大小完成A 列、B 列的排序。 4.分別在C2~C11、C12~C21 和C22~C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序

24、”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。(見表1),www.nordridesign.com,,隨機(jī)區(qū)組分組 隨機(jī)區(qū)組分組是按照一定條件,將幾個(gè)條件相同的試驗(yàn)對(duì)象分為一個(gè)區(qū)組,然后在每個(gè)區(qū)組內(nèi)部按隨機(jī)化原則,將每個(gè)對(duì)象分配到各組。 例:將SD大鼠32只,體重180g~220g,按體重大小配成8 個(gè)單位組,每個(gè)單位組中的4 只大鼠隨機(jī)分配接受A、B、C

25、、D 4 種處理,試給出隨機(jī)化分組的結(jié)果 1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、區(qū)組號(hào)、隨機(jī)號(hào),隨后在A2A3中分別鍵入1、2,然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成1~32的編號(hào)。 2.在C2單元格鍵入“=RAND()”后回車產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字,然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在C2~C33生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。故需選中“C2”至“C33”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域

26、,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性粘貼。,www.nordridesign.com,,3.選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“區(qū)組”為“主要關(guān)鍵字”排序“, 隨機(jī)數(shù)”為“次要關(guān)鍵字”排序,然后,單擊“確定”按鈕,即完成以區(qū)組單位的隨機(jī)數(shù)字排序4.分別在C2~C11、C12~C21 和C22~C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序

27、”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。5. 在“D1”中鍵入“分組號(hào)”,在“D2”、“D3”、“D4”和“D5”中分別依次鍵入“1”、“2”、“3”和“4”,對(duì)余下的各個(gè)區(qū)組,同樣依次輸入“1”、“2”、“3”和“4”,作為同一區(qū)組內(nèi)4 對(duì)象的分組號(hào)。,www.nordridesign.com,,6. 單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”→“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇“編號(hào)”

28、為排序的“主要關(guān)鍵字”,單擊“確定”按鈕,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。(見表2),www.nordridesign.com,,②分層分組法:將動(dòng)物先按雌雄分層,然后分別稱體重,將體重相同的放在一起,不同體重的動(dòng)物放在不同的動(dòng)物盒中,按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求分別放在各組動(dòng)物盒中,使每只動(dòng)物都有相同的機(jī)會(huì)分配到各組,如此分組的結(jié)果,各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物平均體重基本一致。,www.nordridesign.com,,③抽簽法:如有小鼠40只,要隨

29、機(jī)分為四組,可將小鼠從1-40編號(hào),將準(zhǔn)備的號(hào)簽也編1-40號(hào),然后將號(hào)簽充分混合后,隨機(jī)各抽10個(gè)號(hào),然后對(duì)號(hào)將小鼠分配到各個(gè)組去;,www.nordridesign.com,,④摸球法:如實(shí)驗(yàn)所需設(shè)四組,即可用40只雌雄各半的小鼠,將小鼠按體重大小排列,雄性鼠編為1-20號(hào),雌性鼠編為21-40號(hào),然后用紅、黃、藍(lán)、綠四種彩球表示甲、乙、丙、丁四組,將數(shù)量相等四種顏色的球放入一個(gè)口袋里,充分混合后,每次摸取都要徹底混合,每次摸出一

30、個(gè),然后放回袋中,若第一次摸出是紅球,就將第一鼠放入甲組,第二次摸出的綠球,就將第二號(hào)放入丁組,第三次摸出的又是紅球,因已出現(xiàn)過紅球,可不計(jì)再放回口袋,重新摸取,第四次摸出的籃球,將第三號(hào)鼠放入丙組,第四號(hào)鼠不必再摸球決定,剩下的乙組就是第四號(hào)鼠,如此類推,將鼠分配完畢。,www.nordridesign.com,四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉,動(dòng)物麻醉是消除動(dòng)物手術(shù)疼痛,便于實(shí)驗(yàn)操作,保證動(dòng)物安全,為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。動(dòng)物全身麻醉分四期:1

31、.第一期:隨意興奮期,出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)失調(diào);2.第二期:不隨意興奮期,由意識(shí)完全喪失至規(guī)則的自動(dòng)呼吸開始時(shí)止。3.第三期:外科麻醉期,4.第四期:延髓麻醉期,進(jìn)入此期,麻醉已嚴(yán)重過量。,www.nordridesign.com,麻醉方法與麻醉藥,麻醉方法:全身麻醉和局部麻醉,通過吸入、注射(靜脈、皮下、肌肉、腹腔)、口服、灌胃等方法使動(dòng)物麻醉。常用麻醉藥物:乙醚(吸入),戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮(靜脈),普魯卡因、利多卡因(局

32、麻),www.nordridesign.com,常用麻醉藥的劑量及注射途徑,www.nordridesign.com,麻醉注意事項(xiàng),麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重;注意麻醉劑量,麻醉劑量與動(dòng)物品種、健康狀況有關(guān);麻醉過程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況;注意保溫,在寒冷冬季,麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平;靜脈注射時(shí),速度要均勻,不宜太快。注射速度過快是引起動(dòng)物死亡的重要因素之一;如麻醉深度不夠,必須經(jīng)過一定時(shí)間后,才能補(bǔ)充麻醉劑,如戊巴比妥

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