藥理學實驗基本技能

1、藥理學實驗基本知識,藥理教研室,實驗要求（一）實驗課前1、仔細閱讀實驗指導，了解實驗目的、要求、步驟及注意事項。2、復習相關理論知識，充分理解實驗的原理和意義。3、預測實驗結果，寫好預習報告。,（二）實驗課中1、穿白大褂，帶學生證領實驗器材、藥品。2、分工合作，積極參與實驗操作、觀察、記錄。3、節(jié)約試劑和藥品，愛護實驗器材，如出現(xiàn)故障，及時請示老師。4、嚴格控制時間，保證在規(guī)定的課時內完成實驗任務。,（三）實驗課后

2、1、清洗，整理實驗用品。2、值日3、整理實驗記錄，寫好實驗報告。,藥理實驗學的基本原理,為了解生命的某些規(guī)律,必須設計并進行特定的實驗，對結果進行分析總結,從而作出正確的判斷。 可見，實驗的三個基本要素是（1）符合條件的動物或標本（實驗對象）（2）作用于實驗對象的某些實驗條件（實驗因素）（3）實驗對象的某些生命活動的變化（實驗效應或指標）,實驗報告的書寫,1、實驗名稱2、實驗目的3、實驗動物4、實驗步驟

3、5、實驗結果6、討論、結論,常用實驗動物,一、實驗動物的定義 實驗動物（laboratory animal）是根據(jù)科學研究需要在實驗室條件下有目的、有計劃進行人工馴養(yǎng)，繁殖和科學培育而獲得的動物。 如,轉基因動物,二、實驗用動物 泛指一切用于實驗的動物，這是一個廣義的概念，其中包括要求嚴格的實驗動物，還包括家畜、野生動物和觀賞動物等。,常用實驗動物的特點及應用,一、青蛙和蟾蜍（frog v hoptoad

4、）,（一）生物學特性 兩棲類變溫動物，有兩個心房、一個心室，房室區(qū)分不明顯。蟾蜍背部有許多突起毒腺，分泌毒素。 （二）在生物科學研究中的應用 1.藥物對心臟的灌流實驗。 2.藥物對神經(jīng)、肌肉、神經(jīng)-肌接頭的影響。常用于： 蛙心灌流 坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本 坐骨神經(jīng)-縫匠肌標本,不同灌流液對心肌收縮的

5、影響,二、實驗小鼠(mice),（一）生物學特性,一般特性： 1.對外界環(huán)境反應敏感，適應性差，強光或噪聲刺激時，可能導致哺乳母鼠神經(jīng)紊亂，發(fā)生食仔現(xiàn)象。溫度過高或過低時，生殖能力下降，嚴重時會發(fā)生死亡；2.對多種毒素和病原體易感，百萬分之一的破傷風毒素能使小鼠死亡；3.對致癌物敏感，自發(fā)性腫瘤多。,(二)生物醫(yī)學中的應用1、藥物學研究和毒性試驗(1)藥物篩選試驗:小鼠常用于藥物對疾病療效篩選試驗,如抗腫瘤藥物,抗結核藥物,

6、抗瘧疾藥物等的篩選。(2)藥效及其副作用研究:如：利用聲源性驚厥小鼠來評價抗痙攣藥物:利用小鼠角膜和耳廓反射評價鎮(zhèn)定藥物。,(3)毒性試驗和安全分析,如：用于鉛、苯、汞、矽、一氧化碳等職業(yè)性中毒的急性、亞急性和慢性毒性試驗以及半致死量測定。2.腫瘤學研究(1)近交系小鼠自發(fā)性腫瘤研究,如AKR小鼠白血病發(fā)生率可達90％,C3H小鼠乳腺癌發(fā)病率達97％。而C57BL小鼠乳腺癌發(fā)病率極低。,（2）小鼠對致癌物質、射線及某些病毒敏

7、感，進行腫瘤模型的復制?！「腥拘∈蟀籽〔《究烧T發(fā)白血??；感染人類腺病毒可誘發(fā)小鼠肉瘤及淋巴瘤?！∫浦残阅[瘤模型：　將各種實體瘤、腹水瘤、白血病等一定數(shù)量的瘤細胞或無細胞的濾液（病毒性腫瘤）接種于相關品系的小鼠，就可以使該品系的一群小鼠帶有相同的腫瘤，這種腫瘤模型經(jīng)常用在篩選抗腫瘤新藥的研究。,(3)免疫缺陷小鼠在腫瘤研究中應用。 裸小鼠是一種11號染色體上隱性裸基因(nu)發(fā)生突變的小鼠。其生理特征為無胸腺、缺少T細胞、B細

8、胞雖存在但功能缺損,屬于免疫缺陷小鼠,可進行異體腫瘤移植。,3.免疫學研究:免疫缺陷小鼠應用如:進行愛滋病、紅斑狼瘡相關研究。4.傳染性疾病研究:小鼠對多種病原體特別是病毒極為敏感,如流感、腦炎、血吸蟲病5.遺傳學和遺傳性疾病的研究：如:糖尿病肥胖、遺傳性貧血 轉基因小鼠,研究導入基因的作用。,6.老年病學的研究： 小鼠壽命短,傳代時間短,隨著鼠齡的增加,機體內的一些生理生化指標不斷發(fā)生變化,特別是高齡鼠中老年病明顯

9、增多,是老年學研究的極好材料。多用于糖質、脂質、膠原和免疫等方面的研究。7.計劃生育研究： 小鼠繁殖力強,性周期和妊娠期短,生長快,適合計劃生育研究。如常用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實驗應用上的首選動物。,8.不宜采用小鼠制作動物模型的實驗研究 ：(1)研究體溫變化的試驗,因為小鼠體溫變化不穩(wěn)定；(2)慢性支氣管炎的試驗,因為小鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達；(3)催吐試驗,因為小鼠無嘔吐反應;(4)動脈粥樣硬化試驗,

10、因為小鼠不形成動脈粥樣硬化。,三、大鼠（rat）,（一）生物學特性一般特性：1.對營養(yǎng)缺乏非常敏感，特別是維生素A和氨基酸供應不足時，可發(fā)生典型的缺乏癥狀。2.大鼠不能嘔吐。3.對外部環(huán)境反應敏感。,（二）解剖學特點1.肝臟共分6葉，再生能力強，部分切除術后仍可再生。2.無膽囊。3.心臟的血液供給既來自冠狀動脈，也來自冠狀外動脈。4.無扁桃體。5.眼角膜無血管，有棕色脂肪組織。,3.藥物學研究（ 1 ）藥物毒理學試驗

11、急性、亞急性、慢性毒性試驗、生殖毒性試驗和藥物依賴試驗等;“三致”試驗研究。 （ 2 ）藥物藥效研究①副交感神經(jīng)效應器接點的藥物研究時，首選大鼠。②SHR大鼠－－研究高血壓藥物的極好模型。③抗炎藥物藥效評價，大鼠踝關節(jié)對炎癥反應敏感。,4.腫瘤研究：具有較高的腫瘤自發(fā)率，易研究癌變機理。如，肝癌、肺癌、白血病。5.遺傳疾病研究：具有自發(fā)性遺傳疾病，如白內障、尿崩癥、肥胖、高血壓等。6.傳染病研究：多種病原體可使大鼠產(chǎn)生與人

12、相似的疾病，如，慢性支氣管炎，病毒性肝炎，血吸蟲病，鉤蟲病等。,7.口腔醫(yī)學研究：大鼠牙齒上的琺瑯質蛀損在宏觀和微觀上同人的蛀齒相似，可用來研究齲齒。8. 環(huán)境污染與人類健康的研究：大鼠對空氣污染非常敏感，重金屬污染也可導致大鼠的病理改變，常作為這方面研究的動物模型。,9.不宜采用大鼠制作動物模型的實驗研究：⑴研究體溫變化的試驗,因為大鼠體溫變化不穩(wěn)定；⑵慢性支氣管炎的試驗,因為大鼠氣管及支氣管腺不發(fā)達；⑶催吐試驗,因為大鼠無嘔

13、吐反應；⑷膽囊功能試驗,因為大鼠無膽囊。,四、豚鼠,（一）生物學特性1.豚鼠對外界刺激極為敏感。聽覺發(fā)達、易驚----怕噪音；短被毛緊貼皮膚----怕高溫、高濕；喜活動、愛群居----不宜單籠飼養(yǎng)。,3. 胃壁簿，盲腸發(fā)達。4.晚成動物，孕期比大、小鼠長，產(chǎn)仔少，所以品系少。5.自身不能合成維生素C。6.自動調節(jié)體溫能力較差。7.易引起變態(tài)反應，產(chǎn)生大量補體。染色體為32對。,（二）生物醫(yī)學中的應用,1.藥物學研究：

14、⑴妊娠期長，適用于藥物或毒物對胎兒后期發(fā)育影響的試驗；⑵豚鼠對多種抗生素類藥物非常敏感，是研究抗生素和青霉素的動物模型。 ⑶豚鼠還可用于研究麻醉藥及鎮(zhèn)咳藥的藥效實驗。,2.免疫學研究：豚鼠血清是所有實驗動物中補體含量最多的一種, 是過敏性休克和變態(tài)反應研究的首選動物。3.傳染病研究：對多種病原體敏感，用于病原的分離、鑒別、診斷，尤其對結核桿菌高度敏感，幼齡豚鼠經(jīng)常用于支原體感染后的病理和細胞免疫的研究。,3.營養(yǎng)學研究：體內

15、不能合成維生素C，對其缺乏十分敏感，是研究實驗性壞血病和維生素C生理功能的理想動物模型。4.耳科學研究：聽神經(jīng)對聲波特別是700～2000Hz的純音最敏感，常用于聽覺和內耳疾病的研究。5.肺水腫研究：切斷頸部兩側迷走神經(jīng)可引起肺水腫,復制典型的急性肺水腫模型,適于觀察出血和血管通透性變化實驗,6.不宜采用豚鼠做動物模型的研究（1）急性實驗。因為豚鼠易感染，皮膚厚，不宜注射，血管神經(jīng)不易分離； （2）慢性支氣管炎癥實驗。因為豚

16、鼠氣管、支氣管腺體不發(fā)達； （3）嘔吐實驗。因為豚鼠嘔吐反應不敏感。,五. 家兔,（一）生物學特性1.性情溫順，群居性差。2.家兔喜干怕熱3.有食糞特性4.兔的胸腔構造與其它動物不同，縱隔將胸腔分左右兩室，互不相通。暴露心臟時，不需人工呼吸。,5.在回盲處有特有的圓小囊。囊壁富有淋巴濾泡，其粘膜不斷分泌堿性液體，可以中和盲腸中微生物分解纖維素所產(chǎn)生的各種有機酸，有利于消化吸收。6.屬恒溫動物，正常體溫在38.5～39.5℃之

17、間，對致熱物質反應敏感，適于用作熱源實驗。 7.兔是反射性排卵的動物，生育年齡5～6年。平均壽命8年。8.有特殊的血型和唾液型。染色體22對。,（二）在生物學中的應用1.免疫學研究： 生產(chǎn)抗體，制備高效價和特異性強的免疫血清。2.生殖生理和避孕藥研究：家兔屬刺激性排卵，可用于避孕藥和生殖生理研究。3.發(fā)熱、解熱和檢查致熱源研究：產(chǎn)生熱源反應，體溫反應靈敏而恒定。用于各類制劑的熱源質檢及發(fā)熱解熱機制研究。,4.眼科研究

18、：家兔眼球大，幾乎成圓形，便于進行手術操作和觀察，也常用于眼科藥物篩選和療效研究。5.皮膚反應試驗： 兔對刺激反應敏感，反應近似于人，常用兔作為毒物、藥物、化妝品等對皮膚局部作用的研究。6.膽固醇代謝和動脈粥樣硬化癥研究：兔對致病膽固醇的敏感性高，成型快。家兔模型的病變與人類基本相似。7.急性動物試驗常用兔做失血性休克、腸毒素引起的休克、微血管縫合、阻塞性黃疸等急性試驗。,8.其他方面：常利用兔進行各種寄生蟲病、畸形學

19、的研究，生理學課程常采用家兔作為實驗動物。9.不宜用兔作為動物模型的研究：（1）觀察嘔吐的試驗,因為兔對嘔吐反應不敏感（2）放射病試驗,因為兔對射線非常敏感，射線照射后，常發(fā)生休克或死亡；（3）咳嗽試驗,因為兔缺乏咳嗽反射；（4）甲狀旁腺切除術,因為兔的甲狀旁腺分布分散，位置不固定。,常用實驗器材及手術器械,一、常用實驗器材儀器換能器:即“傳感器”,是一種能將機械能、化學能、光能等非電信號轉換為電信號的器件或裝置。,換能器,

20、,常用的換能器有：1.機械—電換能器(張力換能器)：此換能器主要用于描 記肌肉、心臟活動、平滑肌活動、呼吸活動等位移和張力實驗。 2.電壓換能器(壓力換能器)：主要用于測定血壓左心室內壓的實驗。血壓換能器能將血壓的壓力變化轉換為電流。 3.呼吸換能器:可以測呼吸波(阻抗；熱敏電阻);也可測呼吸流量。,期前收縮和代償間隙,（二）刺激電極,⒈普通電極 刺激離體的組織時常用，電極的金屬絲裝嵌在絕緣的有機玻璃套內，前端裸露少許金屬絲，用

21、以接觸組織。⒉保護電極 刺激組織時，避免電流刺激周圍組織，需用保護電極。電極的金屬絲包埋在絕緣套內，前端有一凹槽露出電極絲用于刺激組織。⒊乏極化電極 常用的乏極化電極有銀－氯化銀電極、鋅－硫酸鋅電極和汞－氯化汞電極。,（三）其它儀器,腦立體定位儀 (Stereotaxic )精確定位腦組織和脊髓組織的部位,Morris 水迷宮 （Animal Behavior Monitor System ）,DSI植入式生理信號遙測系統(tǒng)：

22、檢測信號包括， 1. 壓力信號，2. 心電信號 3. 肌電信號 4. 神經(jīng)電信號 5. 呼吸信號 6. 體溫信號7. 生理活動,二、常用手術器械,,常用器械及操作,第三章 常用儀器和設備,第一節(jié)BL-420生物機能實驗系統(tǒng),,,（a）BL-420E+系統(tǒng) （b）BL-420F系統(tǒng)BL-420生物機能實驗系統(tǒng),第二節(jié) BI-2000微循環(huán)圖像分析系統(tǒng),第三節(jié) MedLab生物信號采集處

23、理系統(tǒng),,(一)按原始信號的性質分類1.電信號：心電、神經(jīng)放電、神經(jīng)干動作電位、腦電。,生物信號類型,2.非電信號：骨骼肌張力、血壓、 骨骼肌張力、血壓、呼吸道壓力、心肌收縮力、腸肌張力等。,（二）按信號快慢分類1.快信號：神經(jīng)干動作電位、心室肌動作電位、神經(jīng)放電等。2.慢信號：血壓、呼吸、心電、平滑肌張力等。,生物信號采集、處理結果,第四章 動物實驗基本操作技術,一、實驗動物的編號,,,二、注射器的使用,三、家兔的基本實驗操作,