hplc故障及排除方法

1、診狀診狀可能的原因可能的原因解決方法1.柱溫變化柱恒溫2.等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動相平衡柱3.緩沖液容量不夠用25mmolL的緩沖液4.柱污染每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件調(diào)節(jié)流動相(一)保留時(shí)間變化保留時(shí)間變化6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱1.流速增加檢查泵重新設(shè)定流速2.樣品超載降低樣品量3.鍵合相流失流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向4.流動相組成變化防止流動相蒸發(fā)或沉淀(二)保留時(shí)間縮短保留時(shí)間

2、縮短5.溫度增加柱恒溫1.流速下降管路泄漏更換泵密封圈排除泵內(nèi)氣泡2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動相改性劑如加三乙胺或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失同前(二)34.流動相組成變化同前(二)4(三)保留時(shí)間延長保留時(shí)間延長5.溫度降低同前(二)51.樣品體積過大用流動相配樣總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱采用較弱腐蝕性條件4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼加在線過濾器過濾樣品(

3、四)出現(xiàn)肩峰或分叉出現(xiàn)肩峰或分叉5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子1.進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥改進(jìn)閥和樣品的清洗2.樣品中未知物處理樣品3.柱未平衡重新平衡柱用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜)每天新配用抗氧化劑(五)鬼峰鬼峰5.水污染(反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水1.氣泡(尖銳峰)流動相脫氣加柱后背壓(六)2.污染(隨機(jī)噪聲)清洗柱凈化樣品用HPLC級試劑3.檢測器燈連續(xù)噪

4、聲更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源檢查干擾的來源(如水浴等)基線噪聲基線噪聲5.檢測器中有氣泡流動相脫氣加柱后背壓1.柱超載降低樣品量增加柱直徑采用較高容量的固定相2.峰干擾清潔樣品調(diào)整流動相3.硅羥基作用加三乙胺用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值鈍化樣品4.同前(四)4同前(四)45.同前(四)35.同前(四)36.死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至最低對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管(七)峰拖尾峰拖

5、尾7.柱效下降用較低腐蝕條件更換柱采用保護(hù)柱1.進(jìn)樣體積過大同(四)12.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)4.檢測器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動相粘度過高增加柱溫采用低粘度流動相6.檢測池體積過大用小體積池卸下熱交換器7.保留時(shí)間過長等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫8.柱外體積過大將連接管徑和連接管長度降至最小(八)峰展寬峰展寬9.樣品過載