參考教案-藻藍蛋白-血紅蛋白

1、1模塊I：生物大分子制備方案設計與實踐研究：生物大分子制備方案設計與實踐研究一、教學要求一、教學要求1掌握生物分離科學的進展、相關項單元操作技術的基本原理。2.掌握實驗方案設計的基本原則，學會實驗方案設計的基本方法。3熟練地實施設計方案，優(yōu)化實驗條件。4掌握所學技術、方法在生物學研究中的應用。5.掌握實驗數據的統(tǒng)計與處理，學會實驗圖表的制作方法以及實驗結果分析討論二、教學學時二、教學學時計劃課內64學時，其中講授8學時、實驗研究56學時

2、。計劃課外16學時，其中文獻綜述10學時、以小組為單位答疑2學時，集中論文交流4學時）三、講授的內容三、講授的內容1蛋白質研究在生物科學學習和研究中的地位，進展。2蛋白質制備的基本思路和原則。3各實驗的基本原理，操作步驟和注意事項。4.標準曲線的制作方法和要求，5在本模塊基礎上開展蛋白質研究的思路和常用技術、方法。6.實驗設計和實施的基本的基本要求、注意事項。四、研究課題四、研究課題1、蛋白質的提取純化與鑒定（藻藍蛋白、血紅蛋白）2、多

3、糖的提取與分析（酵母、紫色甘薯、南瓜）3、脂類的提取、純化與分析（胡蘿卜素）4、色素的分離純化與分析（花青素）5、自選課題（根據科研課題、實驗條件、自己的興趣）五、主要單元操作技術與設備五、主要單元操作技術與設備1、單元操作技術：細胞組織破碎術、離心分離技術、雙水相萃取技術、離子交換層析技術、凝膠層析技術、超濾技術、減壓蒸餾技術、冷凍干燥技術、分光光度技術、電泳技術等生物分離技術；2、主要設備：烘箱、真空干燥箱、分析天平、電子臺秤、超聲

4、波細胞破碎儀、粉碎機、超濾器（500ml～5000ml）、冷凍離心機（800010000rpm，300ml～2000ml）、普通離心機（5000rpm，2000ml）、臺式離心機（18000rpm5ml6）冷凍干燥機、80度冰箱、制冰機、酸度計、電熱恒溫水浴鍋、勻漿機、蛋白質色譜分離系統(tǒng)（核酸蛋白檢測儀、部分收集器、蠕動泵、梯度混合器、φ1025mmh300700mm層析柱）電泳儀及垂直板電泳槽、脫色搖床、紫外可見光分光光度計、熒光分光

5、光度計、高效液相色譜、氣相色譜、凝膠成像系統(tǒng)、250ml和500ml旋轉蒸發(fā)儀、微量凱氏定氮儀、常量凱氏定氮儀、5001000W電爐、超聲波清洗器、振動混合器、移夜槍（2005000ul）、層析缸、電吹風等。六、教學組織方式六、教學組織方式兩人一組，所有實驗由學生設計方案，獨立完成。七、教學的重點和難點七、教學的重點和難點1、學習的自主性加大，審核學生的實驗方案、提供必要的條件。2、講授部分的難點是進展、制備思路、原則和常用技術、方法的

6、學習。3、本模塊涉及的儀器特別多，技術方法多，學習難度較大，力求與理論課的對接、舉一反三。八、難點的解決辦法八、難點的解決辦法：1、認真?zhèn)湔n，該講的講深、講透，重點一對一答疑。2、做好設計報告的審核，提前一個月做好儀器檢修和藥品的準備。3、做好必要的單元操作示教和研究過程的現場指導。九、相關參考書九、相關參考書1、孫彥，生物分離工程；2、嚴?？?，生化分離技術；3、譚天偉，生物分離技術4、李建武，生物化學原理和方法；5、生物分離工程實驗指

7、導3淀物和絮狀物。適用范圍：適用范圍：該產品適用于氰化法測定人體血液血紅蛋白含量時稀釋血液用。操作步驟：操作步驟：標定過的吸管準確吸取20微升血液，放入盛有已50倍稀釋后的5ml文齊氏液的試管內，吸吸管內至無色，然后搖勻并放置5min，在校正過的血紅蛋白計或光電比色計上測定血紅蛋白濃度。1.2.31.2.3聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（試劑方法參考生物化學原理和方法）1.31.3血紅蛋白的提取分離血紅蛋白的提取分離提取分離實驗流

8、程：抗凝血100ml紅細胞粗提液鹽析透析離子交換凝膠過濾血紅蛋白結晶II血紅蛋白結晶II1.3.11.3.1動物血液的收集與處理動物血液的收集與處理①取動物血液80100ml，按1：1加入抗凝劑肝素（1250UmL）混勻備用。②將抗凝血液分裝在4支50ml離心管中，3000rmin，4℃，離心10min，棄去上清收集紅血球。③向壓積紅細胞中加35倍量預冷的生理鹽水，輕輕攪勻洗滌，3000rmin，4℃，離心10min，吸出上清液棄去。再

9、用生理鹽水如上洗滌3次、最后吸出上清液棄去，收集紅血球。1.3.21.3.2紅細胞的破碎和血紅蛋白原液的制備紅細胞的破碎和血紅蛋白原液的制備方法一：將洗滌后的紅細胞加2倍量的純水置4℃冰箱中過夜使其自然溶脹破碎，10000rmin，4℃，離心20min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）。方法二：將洗滌后的紅細胞加2倍量的純水置20℃冰箱中冰凍過夜次日將冰凍紅細胞放置室溫或37℃水浴使之融化，搖勻，10000rmin，4℃，離心20

10、min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）。方法三：將洗滌后的紅細胞加2倍量的純水超聲波破碎，破碎條件：功率500W，能量80%，室溫，開3秒停2秒，破碎時間30秒～X秒（180秒）。10000rmin，4℃，離心20min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）?！救?mL血紅蛋白粗提液留作血紅蛋白含量測定和純度分析】1.3.31.3.3鹽析沉淀鹽析沉淀取50ml血紅蛋白粗提液制作鹽析曲線，剩余部分（準確量體積）用于血紅蛋白的鹽析

11、制備。（1）血紅蛋白鹽析曲線的制作）血紅蛋白鹽析曲線的制作（需要粗酶液40～50ml）a.取7支干凈試管編號1～7，分別加入粗酶液5ml；b.分別向1～5號試管中加入飽和硫酸銨1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，然后再分別加入蒸餾水4ml、3ml、2ml、1ml、0ml；分別向6號、7號試管中加先入固體硫酸銨0.66g和1.37g，再加飽和硫酸銨5ml，充分搖晃溶解完全后，每管各取5ml2混勻的溶液裝入7ml2離心管中，對應編號1、