微生物常規(guī)鑒定技術

1、1微生物常規(guī)鑒定技術微生物常規(guī)鑒定技術一.形態(tài)結構和培養(yǎng)特性觀察形態(tài)結構和培養(yǎng)特性觀察1.微生物的形態(tài)結構觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結構（包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進行觀察，直觀地了解細菌在形態(tài)結構上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結構上的不同達到區(qū)別、鑒定微生物的目的。2.細菌細胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細胞群體叫菌落（colony）。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特

2、征有很大差異，而同一種的細菌在一定條件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。2.1細菌的培養(yǎng)特征包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。2.2霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征：

3、大多數(shù)酵母菌沒有絲狀體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細菌的很相似，只是比細菌菌落大且厚。液體培養(yǎng)也和細菌相似，有均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的絲狀體，菌絲粗長，在條件適宜的培養(yǎng)基里，菌絲無限伸長沿培養(yǎng)基表面蔓延。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正面和背面顏色常常不同，如青霉菌：孢子青綠色，氣生菌絲無色，基內(nèi)菌絲褐色。霉菌在固體培養(yǎng)表面形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。3不要到達底部，留底部

4、作變色對照。培養(yǎng)2，4和24h分別觀察結果，如陰性應繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定，變?yōu)榉奂t色為陽性。2.氧化酶（Oxidase）試驗氧化酶亦即細胞色素氧化酶，為細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細胞色素C氧化，然后此氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應。試驗方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或血瓊脂平板菌落上滴加試劑1~2滴，陽性者Kovacs氏試劑呈粉紅色~深紫色，Ewing氏改進試劑呈藍色。陰性者無顏色改變。應在數(shù)分鐘內(nèi)判定試

5、驗結果。注意事項：鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液容易氧化，溶液應裝在棕色瓶中，并在冰箱內(nèi)保存，如溶液變?yōu)榧t褐色，即不宜使用。鐵、鎳鉻絲等金屬可催化二甲基對苯撐二胺呈紅色反應，若用它來挑取菌苔，會出現(xiàn)假陽性，故必須用白金絲或玻璃棒（或牙簽）來挑取菌苔。在濾紙上滴加試劑，以剛剛打濕濾紙為宜，如濾紙過濕，會防礙空氣與菌苔接觸，從而延長了反應時間，造成假陰性。3.3.過氧化氫酶的測定過氧化氫酶的測定過氧化氫酶又稱接觸酶，能催化過氧化氫分解水和氧。試劑

6、：3－10％過氧化氫（H2O2）菌種培養(yǎng)：將測試菌種接種于合適的培養(yǎng)基斜面上，適溫培養(yǎng)18－24h。試驗方法：取一干凈的載波片，在上面滴1滴3－10％的H2O2，挑取1環(huán)培養(yǎng)18－24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有氣泡（氧氣）出現(xiàn)，則為過氧化氫酶陽性，無氣泡者為陰性。也可將過氧化氫溶液直接加入斜面上，觀察氣泡的產(chǎn)生。注意事項：過氧化氫酶是1種以正鐵血紅素作為輔基的酶，所以測試菌所生長的培養(yǎng)基不可含有血紅素或紅血球。4、甲基紅（、甲