最小抑菌濃度測(cè)定

1、幾種測(cè)定抗菌藥物最低抑菌濃度（MIC）方法1.1.常量肉湯稀釋法1.1.1.抗菌藥物貯存液制備抗菌藥物貯存液濃度不應(yīng)低于1000μgml(如1280μgml)或10倍于最高測(cè)定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度。抗菌藥物直接購(gòu)自廠商或相關(guān)機(jī)構(gòu)。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進(jìn)行計(jì)算。例如：需配制100ml濃度為1280μgml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750μgmg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為18

2、2.6mg。根據(jù)公式計(jì)算所需稀釋劑用量為：（182.6mg750μgml）1280μgml=107.0ml，然后將182.6mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的抗菌藥物貯存液應(yīng)貯存于60℃以下環(huán)境，保存期不超過6個(gè)月。1.1.2.藥敏試驗(yàn)用抗菌藥物濃度范圍根據(jù)NCCLS抗菌藥物敏感性試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)，藥物濃度范圍應(yīng)包含耐藥、中介和敏感分界點(diǎn)值，特殊情況例外。1.1.3.培養(yǎng)基NCC

3、LS推薦使用MuellerHinton（MH）肉湯，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。在測(cè)試葡萄球菌對(duì)苯唑西林的敏感性時(shí)，應(yīng)在肉湯中加入2%（WV）氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。1.1.4.接種物的制備有2種方法配制接種物，一是細(xì)菌生長(zhǎng)方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落35個(gè)，接種于45ml的水解酪蛋白（MH）

4、肉湯中，35℃孵育26h。增菌后的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，約含1~2108CFUml。二是直接菌落懸液配制法，對(duì)某些苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養(yǎng)18~24h的菌落調(diào)配成0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進(jìn)行1∶100稀釋后備用。注意應(yīng)在15分鐘內(nèi)接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養(yǎng)，以檢查接種物

5、純度。1.1.5.稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種取無(wú)菌試管（13100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉湯外，其余每管加入MH肉湯1ml，在第1管加入抗菌藥物原液（如1280μgml）0.4ml混勻，然后吸取1ml至第2管，混勻后再吸取1ml至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第11管，并從第11管中吸取1ml棄去，第12管為不含藥物的生長(zhǎng)對(duì)照。此時(shí)各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.

6、25μgml。然后在每管內(nèi)加入上述制備好的接種物各1ml，使每管最終菌液濃度約為5105CFUml。第1管至第11管藥物濃度分別為128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μgml。1.1.6.孵育將接種好的稀釋管塞好塞子，置35℃普通空氣孵箱中孵育16~20h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育20~24h；對(duì)可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬(wàn)古霉素腸球菌應(yīng)持續(xù)孵育滿24h。1.1.7.結(jié)果判斷與解釋在讀取和報(bào)

7、告所測(cè)試菌株的MIC前，應(yīng)檢查生長(zhǎng)對(duì)照管的細(xì)菌生長(zhǎng)情況是否良好，同時(shí)還應(yīng)檢查接種物的傳代培養(yǎng)情況以確定其是否污染，質(zhì)控菌株的MIC值是否處于質(zhì)控范圍。以肉眼觀察，藥物最低濃度管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)者，即為受試菌的MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點(diǎn)判斷，與陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照管比較抑制80%細(xì)菌生長(zhǎng)管藥物濃度為受試菌MIC。根據(jù)NCCLS推薦的分界點(diǎn)值標(biāo)準(zhǔn)，判斷耐藥（resistantR）、敏感(susceptibleS)或中介（interme

8、diateI）。S表示被測(cè)菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有3.E試驗(yàn)（Etest）E試驗(yàn)是指濃度梯度瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，其原理基本同擴(kuò)散法，即濃度呈連續(xù)梯度的抗菌藥物從塑料試條中向瓊脂中擴(kuò)散，在試條周圍抑菌濃度范圍內(nèi)受試菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成透明的抑菌圈。E試驗(yàn)綜合了稀釋法和擴(kuò)散法的原理和特點(diǎn)，同時(shí)還彌補(bǔ)了二者的一些不足，可以像稀釋法一樣直接定量測(cè)出抗菌藥物對(duì)受試菌的MIC。3.1.培養(yǎng)基、菌液制備和接種同紙片擴(kuò)散法。3.2