次抑菌濃度大環(huán)內酯類藥物誘導沙眼衣原體耐藥性的研究.pdf

1、研究背景:近年來，非淋菌性尿道炎(NGU)的發(fā)病率在西方國家已超過淋病，居性傳播疾病的首位，我國的患病率亦迅猛增加，日益引起人們的重視。在NGU中，沙眼衣原體(Chlamydia trachomatics，Ct)感染是最常見的。泌尿道的Ct感染可導致多種疾病，引起嚴重的并發(fā)癥、后遺癥。因此，治療Ct感染十分重要。Ct主要對大環(huán)內酯類、四環(huán)素類、喹諾酮類及利福平等抗生素敏感。而四環(huán)素類及喹諾酮類不能用于孕婦及嬰幼兒，臨床治療Ct時多使用大

2、環(huán)內酯類抗生素。隨著大環(huán)內酯類抗生素在臨床上廣泛的應用，Ct耐藥性的報道也陸續(xù)出現(xiàn)。細菌對大環(huán)內酯類藥物的耐藥機制主要是：①ermB基因引起的靶位改變。②主動外排。③50S核糖體突變：包括23S rRNAII區(qū)及V區(qū)以及L4、L22的突變。④鈍化酶的產生。近年國外對氟喹諾酮和利福平耐藥的Ct突變株已經(jīng)在體外被成功誘導，并發(fā)現(xiàn)喹諾酮類是QRDR基因突變，而利福平則是rpoB基因突變。體外誘導肺炎衣原體對阿奇霉素耐藥不成功，但誘導CtL2型

3、卻成功。目前國內對Ct耐藥情況的報道較少，更沒有關于誘導耐藥問題的文獻報道。本實驗擬在體外測定紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素對Ct的敏感性，并用次抑菌濃度的三種大環(huán)內酯類藥物誘導Ct耐藥突變，探討其誘導耐藥機制。
　　 目的:測定紅霉素、阿奇霉素、交沙霉素對Ct的MIC，再用次抑菌濃度的藥物誘導Ct的耐藥，通過基因分析，探討其耐藥的產生機制。
　　 資料與方法:
　　 1.標本的收集與培養(yǎng)
　　 臨床株13株

4、，標準株l株。用細胞培養(yǎng)法進行培養(yǎng)和傳代。
　　 2.藥物敏感實驗
　　 2.1設置藥物濃度(單位mg/L)。
　　 2.2確定能引起90％以上細胞感染的Ct的接種量。
　　 2.3最低抑菌濃度(MIC)測定。
　　 3.次抑菌濃度誘導耐藥
　　 在生長培養(yǎng)液中加入1/2MIC濃度的紅霉素、阿奇霉素和交沙霉素，進行Ct的接種與收集。連續(xù)傳代，每四代測定MIC，當測得MIC≥4倍誘導前MIC

5、，則誘導耐藥成功。
　　 4.耐藥機制的研究方法
　　 4.1 L4耐藥機制的研究：制備基因組DNA，PCR擴增L4，測序。
　　 4.22 3S rRNA耐藥機制的研究：提取總RNA，逆轉錄制備cDNA，PCR擴增23SrRNA，測序。
　　 結果:
　　 1.MIC:經(jīng)過對13株臨床Ct標本的測定，證實紅霉素、阿奇霉素及交沙霉素的MIC范圍分別為：0.5～1mg/L，0.5～1mg/L，0.0

6、4～0.16mg/L。
　　 2.13株臨床標本均成功誘導了對大環(huán)內酯類的耐藥性。
　　 3.基因分析顯示，L4的臨床株和標準株均有相同的突變，其突變與大環(huán)內酯類藥物耐藥無關。23SrRNA有A2059G、A2057G、T2611C、A2093T位點的突變，與耐藥性有關，而所產生的A2131T和C2452A位點突變可能為無義突變。沒有誘導出在細菌中常見的A2058突變。
　　 結論:
　　 1.就目前來說