分子診斷復習題舊

1、1分子診斷學復習題一、概念1.分子診斷學分子診斷學:分子診斷學是以分子生物學理論為基礎，利用基因和蛋白質分析技術和方法來研究人體內源性或外源性生物大分子體系的存在、結構或表達調控的變化，為疾病的監(jiān)測、診斷、療效判斷和預后評估、個體化治療等提供信息和決策依據(jù)的一門科學。2.酶聯(lián)免疫吸附測定（酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISAELISA）:是以抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記為基礎，反應完成后加入酶反應底物，底物被酶催化成為有色產物，產物的

2、量與標本中受檢物質的量直接相關，由此進行定性或定量分析。3.時間分辨熒光免疫分析技術（時間分辨熒光免疫分析技術（TRFIATRFIA）：是用鑭系稀土元素螯合物鑭系稀土元素螯合物標記抗體或抗原，檢測標本中相應的抗原或抗體，用時間分辨熒光免疫分析檢測儀測定反應產物中的熒光強度。根據(jù)產物熒光強度和相對熒光強度的比值，判斷反應體系中分析物的濃度，從而達到定量分析。定量分析。而時間分辨與酶免、放免相比，因為在激發(fā)光照射后，稀土元素激發(fā)光的最大吸收

3、波與發(fā)射光的最大發(fā)射波長之間stokes位移最大位移最大；發(fā)光的半衰期長半衰期長（102000us），避免了雜光的影響；激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄，不必擔心光譜重疊。4.金標免疫測定金標免疫測定:以微孔濾膜為載體，包被已知抗原或抗體，加入待檢標本后，經(jīng)濾膜的毛細管作用使標本中的抗體或抗原與膜上包被的抗原或抗體結合，再通過膠體金或超順磁性納米微粒結合物達到檢測目的。5.PCRRFLP(PCRRFLP(限制性片段長度多態(tài)性限制性片段長度多態(tài)性)

4、:聚合酶鏈式反應—限制性片段長度多態(tài)（PCR—RFLP）分析技術是在PCR技術基礎上發(fā)展起來的。DNA堿基置換正好發(fā)生在某種限制性內切酶識別位點上，使酶切位點增加或者消失，利用這一酶切性質的改變，PCR特異擴增包含堿基置換的這段DNA，經(jīng)某一限制酶切割，再利用瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產物，與正常比較來確定是否變異。應用PCR—RFLP，可檢測某一致病基因已知的點突變，進行直接基因診斷，也可以此為遺傳標記進行連鎖分析進行間接基因診斷。用特定

5、的限制性核酸內切酶對目的用特定的限制性核酸內切酶對目的DNADNA分子進行消化，得到的酶切片斷其大小分子進行消化，得到的酶切片斷其大小和數(shù)量可以在一定程度上反映出目的和數(shù)量可以在一定程度上反映出目的DNADNA分子的序列信息。分子的序列信息。診斷遺傳病和傳染病病原體基因分型診斷遺傳病和傳染病病原體基因分型6.PCRSSCP(單鏈構象多態(tài)性):聚合酶鏈反應單鏈構象多態(tài)性分析，是近年來發(fā)展起來的一種基因分析方法。PCRSSCP分析技術是一種

6、DNA單鏈凝膠電泳技術，它根據(jù)形成不同構象的等長DNA單鏈在中性聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率變化來檢測基因變異。不同構象的單鏈不同構象的單鏈DNADNA的遷移率不同，相同長度的的遷移率不同，相同長度的DNADNA單鏈由于其堿基順序不同單鏈由于其堿基順序不同而形成不同的構象，在電泳時表現(xiàn)出不同的遷移率?？梢詸z測出突變位點的存而形成不同的構象，在電泳時表現(xiàn)出不同的遷移率?？梢詸z測出突變位點的存在。在。用于分析癌基因和等位基因的突變，檢測遺傳

7、病、免疫性疾病、傳染性疾病的用于分析癌基因和等位基因的突變，檢測遺傳病、免疫性疾病、傳染性疾病的基因突變?；蛲蛔?。7.SouthernblotSouthernblot:將待檢測的DNA分子用不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠3二、思考題1.1.標記免疫分析技術的種類及常用標記物。標記免疫分析技術的種類及常用標記物。種類：酶聯(lián)免疫吸附分析，免疫熒光分析，放射免疫分析，化學發(fā)光免疫分析，電化學發(fā)光免疫分析，金標免疫分析，時間分辨熒光免

8、疫分析常見示蹤物:酶、放射性核素、鑭系稀土元素螯合物、發(fā)光劑2.2.ELISAELISA技術類型及應用。技術類型及應用。技術類型:雙抗體夾心法測抗原，雙抗原夾心法測抗體，間接法測抗體，競爭法測抗體，競爭法測抗原，捕獲包被法測抗體，BASELISA法應用:(1)在醫(yī)學檢測中的應用：病原體及其抗體的檢測蛋白質的檢測非肽類激素的檢測藥物的檢測毒品檢測(2)在食品檢測中的應用：食品微生物的檢測食品毒素的檢測食品中殘留農藥的檢測食品中殘留抗生素的

9、檢測轉基因食品的檢測3.3.雙脫氧終止法測序的原理。雙脫氧終止法測序的原理。利用DNA聚合酶，以單鏈DNA為模板，以dNTP(含標記的dNTP)為底物，在四組互相獨立的反應體系中分別加入不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNPT)作為鏈反應終止劑，根據(jù)堿基配對原則，在測序引物引導下，合成四組有序梯度的互補DNA鏈，然后通過高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測后直接識讀待測DNA的序列。4.4.PCRPCR的基本原理及應用。的基本

10、原理及應用。原理:是模擬體內DNA半保留復制過程，通過變性、退火、延伸三步反應的循環(huán)完成；靶基因的雙鏈DNA通過變性解鏈為單鏈，特異的引物通；過退火與單鏈DNA模板結合，在靶DNA的指導下引物的3’末端延伸靶DNA的互補鏈完成一個循環(huán)，重復這一過程，使目的DNA片段得到擴增。應用:目的基因的克??；基因的體外突變；DNA和RNA的微量分析；DNA序列測定；基因突變分析5.5.熒光定量熒光定量PCRPCR的原理。的原理。熒光定量PCR（FQ

11、PCR）基于熒光能量傳遞技術（fluescenceresonanceenergytransferFRET），通過受體發(fā)色團之間偶極偶極相互作用，能量從供體發(fā)色團轉移到受體發(fā)色團，轉移效率與兩個發(fā)色團之間距離的6次冪倒數(shù)成比例，受體熒光染料發(fā)射出的熒光訊號強度與DNA產量成正比，檢測PCR過程的熒光訊號便可得知靶序列初始濃度。6.6.熒光定量熒光定量PCRPCR技術（技術（FQPCRFQPCR）在）在HBVHBV檢測中的應用。檢測中的應用