分光光度計的使用方法

1、分光光度計的使用方法主體內(nèi)容：1使用儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理。以及各個操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應該對儀器的安全性進行檢查，電源線接線應牢固。通地要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再接通電源開關。儀器在使用前先檢查一下，放大器暗盒的硅膠干燥筒（在儀器的左側(cè)），如受潮變色，應更換干燥的藍色硅膠或者倒出原硅膠，烘干后再用。2將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔（放大倍率最?。?。3開啟電源，指示燈亮，選擇開關置于“

2、T”，波長調(diào)至測試用波長。儀器預熱20分鐘。4打開試樣室蓋（光門自動關閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上試樣室蓋，將比色皿架置與蒸餾水校正位置，使光電管受光，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。5如果顯示不到“100.0”，則可適當增加微電流放大器的倍率檔數(shù)，但盡可能置低倍率檔使用，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。但改變倍率后必須按(4)重新校正“0”和“100%”。6預熱后，按(4)連續(xù)幾次調(diào)整“0”和

3、“100%”，儀器即可進行測定工作。7吸光度A的測量按(4)調(diào)整儀器的“00.0”和“100%”，將選擇開關置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使得數(shù)字顯示為“.000”，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。8濃度C的測量：選擇開關由“A”旋置“C”，將已標定濃度的樣品放入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標定值，將被測樣品放入光路，即可讀出被測樣品的濃度值。9如果大幅度改變測試波長時，在調(diào)整“0”和“100%”后稍等片刻

4、，（因光能量變化急劇，光電管受光后響應緩慢，需一段光響應平衡時間），當穩(wěn)定后，重新調(diào)整“0”和“100%”即可工作。10每臺儀器所配套的比色皿，不能與其它儀器上的比色皿單個調(diào)換。11本儀器數(shù)字表后蓋，有信號輸出0～1000MV，插座1腳為正，2腳為負接地線。吸收池（即比色杯）使用注意事項：①要徹底清洗，尤其是盛過蛋白質(zhì)等溶液，干后形成一層膜，不易洗去，通常杯子不用時可放在1％洗潔凈液中浸泡，去污效果好，使用時用水沖洗干凈，要求杯壁不掛水

5、珠，還可以用綢布絲線或軟塑料制作一個小刷子清洗杯子。2.2.2物質(zhì)的吸收光譜(1)如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜它出現(xiàn)了幾條暗線即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).2.2.2物質(zhì)的吸收光譜(2)當光線通過某種物質(zhì)的溶液時透過的光的強度減弱.因為有一部分光在溶液的表面反射

6、或分散一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有一部分光可透過溶液.入射光=反射光分散光吸收光透過光如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白“去校正反射分散等因素造成的入射光的損失則:入射光=吸收光十透過光2.2.3物質(zhì)吸光度(A)與透射比(T)的關系設I0為經(jīng)過空白校正后入射光的強度I為透過光的強度.根據(jù)實驗得知I=I010εcl式中c表示吸收物質(zhì)的摩爾濃度l表示吸收物質(zhì)的光徑用cm表示ε表示吸收物質(zhì)的摩爾消光系數(shù)它表示物質(zhì)對光的吸

7、收特性不同物質(zhì)的ε數(shù)值不同.所以II0=10εcl令T(透射比)=II0T=10εcl若以T對吸收物質(zhì)的濃度作圖則得圖152中的曲線.由上式可得1g(1T)=εcllg(lT)為物質(zhì)的吸光度(A)A=1g(1T)2.2.4LambertBeer定律(E=εcl)上式說明了物質(zhì)的吸光度與吸收物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比這就是光吸收的基本定律LambertBeer(朗伯比耳)定律.2.3分光光度計的基本結(jié)構(gòu)無論哪一類分光光度計都包括:光源單