植物乳桿菌培養(yǎng)基的優(yōu)化

1、植物乳桿菌培養(yǎng)基的優(yōu)化李達(dá)發(fā)酵劑是影響發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素它的制備需要有良好的增菌培養(yǎng)基使植物乳桿菌得以大量增殖從而使其在經(jīng)過(guò)噴霧干燥、冷凍、凍干等處理后有足夠的活菌數(shù)存活。因此優(yōu)化植物乳桿菌增菌培養(yǎng)基是一項(xiàng)十分重要的基礎(chǔ)研究工作。植物乳桿菌是泡菜、發(fā)酵谷物、發(fā)酵肉制品等重要發(fā)酵劑的組成菌之一。植物乳桿菌K25分離于西藏靈菇中在對(duì)其進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)用MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌時(shí)菌落總數(shù)僅能達(dá)到6.7107cfumL1左右。菌液中活菌數(shù)的增加可

2、以通過(guò)培養(yǎng)基的優(yōu)化設(shè)計(jì)來(lái)實(shí)現(xiàn)因此需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化提高菌液中活菌數(shù)的含量。本文旨在通過(guò)對(duì)植物乳桿菌的培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化從而獲得活菌數(shù)較高的菌液為研制高活力的冷凍干燥發(fā)酵劑及其產(chǎn)品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。1材料與方法材料與方法1.1試驗(yàn)菌種試驗(yàn)菌種L.plantarumK25分離于西藏靈菇。1.2材料與設(shè)備材料與設(shè)備胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏為生化試劑K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4和各種糖類均為分析純。722型

3、分光光度計(jì)、立式壓力蒸汽滅菌器、超凈工作臺(tái)、分析天平、DNG9240型恒溫鼓風(fēng)干燥箱。1.3培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件活化和計(jì)數(shù)培養(yǎng)采用MRS培養(yǎng)基蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、KH2PO42g、檸檬酸三鈉2g、乙酸鈉2g、葡萄糖20g、Tween801mL、MgSO47H2O0.58g、MnSO44H2O0.25g用蒸餾水定容至1L調(diào)pH6.2~6.4121℃滅菌15min。以MRS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加不同生長(zhǎng)

4、因子接種量0.5%接入150mL液體培養(yǎng)基中37℃靜置培養(yǎng)24h1.4方法方法1.4.1不同碳源、氮源、磷源的選擇不同碳源、氮源、磷源的選擇在MRS液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上分別添加2%(wv)乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖作為不同碳源選擇胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、牛肉膏分別加入2.5%(wv)作為的不同氮源分別加入0.2%(wv)K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4作為不同磷源其他組分均為蛋白胨、牛肉膏、酵母膏由表3可以看

5、出植物乳桿菌的生長(zhǎng)在以酵母膏為單一氮源時(shí)OD值略高于對(duì)照明顯高于植物乳桿菌在其它氮源中的生長(zhǎng)可能是由于植物乳桿菌K25分離于西藏靈菇中所利用的氮源與酵母膏中所含有的氨基酸同源或是氨基酸組成相似植物乳桿菌在以胰蛋白胨和大豆蛋白胨為氮源時(shí)生長(zhǎng)效果較差OD值僅為0.328和0.338牛肉膏是MRS培養(yǎng)基中的氮源單獨(dú)添加時(shí)不利于植物乳桿菌的生長(zhǎng)不能很好的促進(jìn)菌種生長(zhǎng)菌液的OD值最低。表3不同氮源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影響不同氮源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影

6、響種類對(duì)照胰蛋白胨大豆蛋白胨酵母膏牛肉膏吸光度（OD）0.390.3280.3380.470.3162.3磷源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影響磷源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影響磷源采用K2HPO4、KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4由表4可以看出在K2HPO4為磷源時(shí)植物乳桿菌的OD值是最小值0.256可能是因?yàn)镵2HPO4的添加改變了培養(yǎng)基的pH不利于植物乳桿菌的生長(zhǎng)而以KH2PO4、Na2HPO4、NaH2PO4為磷源時(shí)OD值相差不多都在0

7、.3左右原基本培養(yǎng)基中磷源即為KH2PO4作為生長(zhǎng)因子能夠很好的促進(jìn)植物乳桿菌的生長(zhǎng)OD值為0.38因此確定采用原培養(yǎng)基中的KH2PO4。表4不同氮源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影響不同氮源對(duì)植物乳桿菌生長(zhǎng)的影響種類對(duì)照磷酸氫二鉀K2HPO4磷酸二氫鉀KH2PO4磷酸氫二鈉Na2HPO4磷酸二氫鈉NaH2PO4吸光度（OD）0.390.2560.310.280.382.4植物乳桿菌培養(yǎng)基的優(yōu)化植物乳桿菌培養(yǎng)基的優(yōu)化根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)