膠體金的性質

1、膠體金的性質、制備及其在醫(yī)學中的應用膠體金的性質、制備及其在醫(yī)學中的應用膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色膠體金作為標記物用于免疫組織化學始于1971年Faulk等應用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌此后他們把膠體金與多種蛋白質結合.1974年Romano等將膠體金標記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金

2、標記物在光鏡水平的應用。膠體金在免疫化學中的這種應用，又被稱為免疫金之后，許多學者進一步證實膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質，而蛋白質的生物活性無明顯改變它可以作為探針進行細胞表面和細胞內多糖、蛋白質、多膚、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位也可以用于日常的免疫診斷，進行免疫組織化學定位，因而在臨床診斷及藥物檢測等方面的應用已受到廣泛的重視目前電鏡水平的免疫金染色(IGS)，光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑點免疫金

3、染色技術日益成為科學研究和臨床診斷的有力工具1.1.免疫膠體金技術的基本原理免疫膠體金技術的基本原理氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金顆粒由一個基礎金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層構成，緊連在金核表面的是內層負離子（AuC12－），外層離子層H則分散在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)。膠體金顆粒的基礎金核并非是

4、理想的圓球核，較小的膠體金顆?；臼菆A球形的，較大的膠體金顆粒（一般指大于30nm以上的）多呈橢圓形。在電子顯微鏡下可觀察膠體金的顆粒形態(tài)。膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素

5、、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。免疫金標記技術(Immunogoldlabellingtechique)主要利用了金顆粒具有高電子3.3.膠體金的制備膠體金的制備膠體金有多種制備方法，常用的有：檸檬酸三鈉還原法、檸檬酸三鈉－鞣酸混合還原法、白磷還原法、抗壞血酸還原法、乙醇超聲波還原法等。但制備中的一些細節(jié)問題極大的影響著膠體金的質量，應予以注意:（1）氯金酸易

6、潮解，應干燥、避光保存。（2）氯金酸對金屬有強烈的腐蝕性，因此在配制氯金酸水溶液時，不應使用金屬藥匙稱量氯金酸。（3）用于制備膠體金的蒸餾水應是雙蒸餾水或三蒸餾水，或者是高質量的去離子水。（4）是以制備膠體金的玻璃容器必須是絕對清潔的，用前應先經酸洗并用蒸餾水沖凈。最好是經硅化處理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡數(shù)分鐘，用蒸餾水沖凈后干燥備用。4.4.膠體金的鑒定膠體金的鑒定膠體金的制備并不難，但要制好高質量的膠體金卻也并非

7、易事。因此對每次制好的膠體金應加以檢定，主要檢查指標有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無凝集顆粒等。肉眼觀察是最基本也是最簡單和方便的檢定方法，但需要一定的經驗。良好的膠體金應該是清亮透明的，若制備的膠體金混濁或液體表面有漂浮物，提示此次制備的膠體金有較多的凝集顆粒。在日光下仔細觀察比較膠體金的顏色，可以粗略估計制得的金顆粒的大小。當然也可用分光光度計掃描λmax來估計金顆粒的粒徑。結制備的膠體金最好作電鏡觀察，并選一些代表性的作顯微攝影，

8、可以比較精確地測定膠體金的平均粒徑。5.5.膠體金的穩(wěn)定性及免疫膠體金的貯存膠體金的穩(wěn)定性及免疫膠體金的貯存膠體金具有很高的動力學穩(wěn)定性，在穩(wěn)定因素不受破壞時自身凝聚極慢，可放置數(shù)年不發(fā)生凝聚。影響穩(wěn)定的因素主要有電解質、溶膠濃度、溫度、非電解質等。金溶膠必須有少量電解質作穩(wěn)定劑，但濃度不宜過高。高濃度親水性非電解質能剝去膠粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物質促使溶膠凝聚，但一定量的高分子物質反而可增加溶膠穩(wěn)定性，如蛋白質、葡萄糖、