免疫膠體金技術

1、膠體金免疫技術 colloidal gold Immune technique,許贇興 2018年3月,膠體金標記技術的相關定義,膠體金免疫技術 是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體反應的一種新型的免疫標記技術。膠體金 是指金鹽在還原劑作用下還原成金原子，聚合成一定大?。ǔ噬煌┑慕痤w粒，形成帶負電的疏水膠溶液。免疫金 實質上是膠體金與抗原或抗體等大分子物質的結合物。,膠體金顆粒帶電情況 

2、      抗體和金顆粒的耦聯（圖出處：IVD Technology）,Synthesis and properties of different particle size,Adjust the gold colloid to the proper pH,膠體金與蛋白質的結合成功與否，取決于pH值，一般只有在蛋白質等電點(PI)略偏堿的條件下二者才能牢固地結合，因此，標記

3、之前須將膠體金溶液的pH值調至待標記蛋白質的等電點略偏堿。,膠體金技術的種類及優(yōu)點,快速免疫金滲濾法(immuogold filtration assay ,IGFA) ——斑點金免疫滲濾試驗 即穿流式(flow through)的固相膜免疫測定。 主要由兩部分組成：膜滲濾裝置和標記結合物。前者為一塑料小盒，其中填滿吸水性物質，面上緊貼放置一片吸附有抗體(以雙抗體夾心法測抗原為例)的硝

4、酸纖維膜，標記結合物為免疫金。,,A：金標記抗體B：標本中的抗原C：包被抗體D：NC膜E：吸水材料F：塑料盒,順序：標本——免疫金——洗滌液陽性：紅色斑點間接法：包被抗原，少用,,,免疫層析法( immunochromatogra-phy，ICA) 是繼IGFA之后發(fā)展起來的另一種固相膜免疫測定，與IGFA利用微局限性膜的過濾性能不同，免疫層析法中滴加在膜一端的樣品溶

5、液受膜的毛細管作用(基于層析作用的橫流 （lateral flow） )向另一端移動。移動過程中被分析物 與固定在膜上某一區(qū)域的受體(抗原或者抗體)結合而被固相化，無關物質則越過該區(qū)域而被分離，然后通過標記物顯色來判定試驗結果，以膠體金為標記物的實驗稱為膠體金免疫層析試驗。,雙抗體夾心法、競爭法、間接法,,膠體金免疫層析法試劑的組成,樣品墊(Sample pad)： 玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙、無紡布等多種材質，多種規(guī)

6、格，批間穩(wěn)定。 樣品墊的作用： 減緩樣品滲透速度，有利于樣品在結合墊上均勻分布； 去除樣品中雜質顆粒； 調節(jié)樣品液pH值或粘度等。,結合墊(Conjugate pad)： 玻璃纖維、聚酯膜、纖維素濾紙、無紡布等多種材質，多種規(guī)格，批間穩(wěn)定。 結合墊的作用主要為：　 　-　吸附一定量的金標結合物顆粒；　　-　吸附并持續(xù)不斷的將樣品轉移到NC膜上；　　-　保持金標結合物顆粒的穩(wěn)定性；　　-

7、　保證金標結合物顆粒定量完全釋放等。,硝酸纖維素膜( Nitrocellulose)： 推薦使用Millipore，MDI，S&S，whatman 等國外公司的硝酸纖維素膜。 NC膜的作用：     - 在檢測線和對照線條帶區(qū)域固定抗體；　　-　樣品在NC膜上流動并與試劑混合發(fā)生免疫反應；　　-　反應在NC膜上顯色，讀檢測結果 NC膜的重

8、要參數： 孔徑、對稱性、層析速度、表面活性劑、蛋白結合力、強度、表面質量、厚度、批間均一性等。,片材： 不干膠塑料襯底，片材的質量很大程度上影響了產品的貨架期。,吸收墊(Absorbent Pad)： 提供高吸收率、高容量以及相對穩(wěn)定吸收率的吸收紙； 吸收紙的作用： 主要表現在控制樣品的流速，促進虹吸作用以及使試劑跨過膜而不僅僅移到膜上。,免疫膠體金技術的特點,優(yōu)點：檢測方法

9、簡單而快速，數分鐘即可得出結果；不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練；試劑穩(wěn)定，適用于單份測定；無污染。GICA的特點是單一試劑，一步操作。小型實驗室即有條件開發(fā)生產。干燥包裝的試劑可在室溫保存一年以上。,成為目前“床旁檢驗”（point-of-care testing，POCT）中廣為應用的方法。,不足： 金免疫測定中應用的是單份試劑，難于進行質量控制。即使是同一批生產的試劑，也很難保證每個試劑的同一性。因此金免疫測