雞新城疫免疫膠體金診斷技術(shù)的研究.pdf

1、雞新城疫是雞的一種高度感染和致死性疾病,是由一種侵害呼吸道、胃腸道以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的新城疫病毒(NDV)所引起的.病毒存在于病雞的血液、腦、內(nèi)臟、糞便和口鼻中,國(guó)內(nèi)外對(duì)本病的控制仍沒(méi)有完全解決,雞新城疫對(duì)養(yǎng)雞業(yè)有著巨大的威脅.所以有必要建立一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的膠體金免疫層析法(GICA)用于雞新城疫的診斷.膠體金技術(shù)最早是Faulk等于1971年報(bào)道的應(yīng)用于電鏡檢查技術(shù)的一種示蹤技術(shù).與傳統(tǒng)方法比較,由于膠體金具有肉眼可觀察的紅色,所

2、以以這種技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的檢測(cè)試劑盒有快捷、準(zhǔn)確、高特異性、高敏感性的特點(diǎn),靈敏度可達(dá)0.5~1ng/mL,適用于各級(jí)醫(yī)院、衛(wèi)生所、家庭個(gè)人診斷、保健、體檢.目前以此方法為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)試劑盒涉及范圍相當(dāng)廣泛,包括HCG等激素、腫瘤標(biāo)志物、心血管標(biāo)志物、傳染病的抗原與抗體的檢測(cè)等.采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金顆粒,標(biāo)記純化的雞新城疫抗體,并包被在玻璃纖維素膜上,另外將純化的雞新城疫抗體和純化的兔抗雞抗體包被在硝酸纖維素膜上,組裝成雞新

3、城疫快速診斷試紙條.當(dāng)檢樣中含有雞新城疫病毒抗原時(shí),試紙條上出現(xiàn)兩條紅線,為陽(yáng)性;當(dāng)檢樣中不含有雞新城疫病毒抗原時(shí),試紙條出現(xiàn)一條紅線,為陰性.用本試驗(yàn)研制的雞新城疫快速診斷試紙條檢測(cè)收集的20份樣品,其結(jié)果與HA結(jié)果相對(duì)應(yīng),符合率100％.當(dāng)病毒HA效價(jià)在1:32以上時(shí),試紙條均能檢測(cè)為陽(yáng)性.雞新城疫快速診斷試紙條與已知的禽流感病料和雞傳染性支氣管炎病料的上清夜無(wú)交叉反應(yīng)出現(xiàn).進(jìn)行熱穩(wěn)定性試驗(yàn)穩(wěn)定性好.試驗(yàn)證明,該研究建立的膠體金免疫