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1、質(zhì)譜定量的原則質(zhì)譜定量的原則內(nèi)標(biāo)的選擇內(nèi)標(biāo)的選擇LCMS2009110119:44:11閱讀178評論2字號:大中小訂閱質(zhì)譜定量的原則04——系列講座內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)在做MS定量時(shí)應(yīng)該使用內(nèi)標(biāo)。選擇一個(gè)合適的內(nèi)標(biāo),將能減少因?yàn)闃悠诽崛?、HPLC進(jìn)樣和離子化的多樣性造成的差異。在復(fù)雜基質(zhì)的分析中,在SRM積分圖上,在標(biāo)準(zhǔn)曲線的低端,常會(huì)見到:兩個(gè)不同的濃度水平,會(huì)給出近乎一致的響應(yīng)。只有當(dāng)使用一種內(nèi)標(biāo)時(shí),這兩個(gè)點(diǎn)才能被區(qū)分。一些研究者試圖在實(shí)驗(yàn)中
2、不用內(nèi)標(biāo)去做標(biāo)準(zhǔn)曲線,但成功率不高。我們在標(biāo)準(zhǔn)曲線上每個(gè)濃度水平都重復(fù)進(jìn)樣3次。沒有內(nèi)標(biāo)的情況下,重現(xiàn)性%RSD常常會(huì)高于20%;而當(dāng)使用內(nèi)標(biāo)時(shí),%RSD能降低到近2%。我要如何選擇一個(gè)內(nèi)標(biāo)我要如何選擇一個(gè)內(nèi)標(biāo)最好的內(nèi)標(biāo)是待定量的化合物的同位素內(nèi)標(biāo)。同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)將和待測物有相似的回收率、ESI離子化響應(yīng),和相似的色譜保留時(shí)間。如果你運(yùn)行的不是臨床藥代動(dòng)力學(xué)定量,可能很難判斷上述說法,因?yàn)樘厥獾暮铣梢粋€(gè)同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo),是非常昂貴和耗
3、時(shí)的。通常,如果你和一個(gè)醫(yī)學(xué)的化學(xué)家工作,他們會(huì)有一個(gè)化合物相似物庫,可以被用作內(nèi)標(biāo)。這些類似物,在化合物合成中被測試,和該化合物性質(zhì)相似可以被用戶定量內(nèi)標(biāo),而且更重要的是,這些類似物和內(nèi)標(biāo).gif圖1內(nèi)標(biāo)的量大規(guī)模質(zhì)譜法簡介目前,研究人員們正在通過各種方法使大規(guī)模質(zhì)譜法變得更有效,而且將這一技術(shù)工具縮小化。大規(guī)模質(zhì)譜法對于藥物的發(fā)現(xiàn)來說是一個(gè)無法比擬的有力工具,而且它在定性與定量分析的應(yīng)用中有著很大的價(jià)值。雖然大規(guī)模質(zhì)譜法的應(yīng)用能力和
4、敏感性被不斷的改進(jìn),但是在藥物發(fā)現(xiàn)研究里面的技術(shù)改革只是出現(xiàn)在專門的工具和應(yīng)用中。這一技術(shù)工具的發(fā)展有著三大趨勢:減少樣品處理與準(zhǔn)備工作,輔以數(shù)據(jù)分析,促進(jìn)可攜帶性和多功能性。樣品處理樣品處理和準(zhǔn)備是質(zhì)譜技術(shù)分析中最耗體力的步驟。通常,要獲得一個(gè)足夠純度的樣品需要兩個(gè)或更多的分離步驟。市場上的許多儀器通過整合一個(gè)化學(xué)分離步驟來減少這些勞動(dòng)量。市場上最新的能大幅減輕勞動(dòng)量的技術(shù)是由日本Shimadzu公司的科學(xué)家改進(jìn)的,這一技術(shù)通過機(jī)械化
5、樣品處理和化學(xué)噴墨打印機(jī),被用于直接分析Westernblot實(shí)驗(yàn)中的蛋白。Shimadzu科學(xué)家用化學(xué)打印法在Westernblot薄膜上點(diǎn)上胰島素來消化蛋白質(zhì),然后應(yīng)用基質(zhì)溶液和基質(zhì)輔助激光解吸離子化快速質(zhì)譜技術(shù)(MALDITOF)對膜上的樣品進(jìn)行直接質(zhì)譜分析。通過以上分析,研究員能夠從一次免疫印跡實(shí)驗(yàn)中的任意多個(gè)點(diǎn)得到蛋白質(zhì)質(zhì)譜印記,PMF數(shù)據(jù),或整個(gè)蛋白質(zhì)情況。Shimadzu科學(xué)家約瑟夫.福克斯博士說:“你能通過一個(gè)blot分
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