實(shí)驗(yàn)三__紙色譜

1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三紙色譜紙色譜一、實(shí)驗(yàn)原理、方法、注意事項(xiàng)一、實(shí)驗(yàn)原理、方法、注意事項(xiàng)1、原理、原理紙層色譜為在紙上將混合物進(jìn)行分離的色譜方法，分為分析型和制備型紙層色譜。多數(shù)情況下，紙層色譜的原理屬于分配色譜原理，色譜濾紙為支持劑，濾紙纖維可以吸附25%～30%的水分，其中6～7%的水分和濾紙結(jié)構(gòu)中的羥基以氫鍵結(jié)合，為固定相。其他溶劑可自由通過(guò)，為流動(dòng)相。流動(dòng)相流經(jīng)支持物時(shí)，與固定相之間連續(xù)抽提，使物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。物質(zhì)被分離

2、后在紙色譜圖譜上的位置用Rf值（比移值）來(lái)表示：Rf值=原點(diǎn)到色譜點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離在一定條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)，其大小受物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)物質(zhì)組成與比例、pH值、選用濾紙質(zhì)地和溫度等多種因素影響。此外，樣品中的鹽分、其他雜質(zhì)以及點(diǎn)樣過(guò)多均會(huì)影響的有效分離。但由于影響比移值的因素較多，因而一般采用在相同實(shí)驗(yàn)條件下與對(duì)照物質(zhì)對(duì)比以確定其異同。作為藥品的鑒別時(shí)，供試品在色譜中所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置，應(yīng)與

3、對(duì)照品在色譜中所顯的主斑點(diǎn)相同。作為藥品的純度檢查時(shí)，可取一定量的供試品，經(jīng)展開(kāi)后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定，檢視其所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)的個(gè)數(shù)或呈色（或熒光）的強(qiáng)度。作為藥品的含量測(cè)定時(shí)，將主色譜斑點(diǎn)剪下洗脫后，再用適宜的方法測(cè)定。無(wú)色物質(zhì)的紙色譜圖譜可用光譜法（紫外光照射）或顯色法鑒定，氨基酸紙色譜圖譜常用茚三酮顯色法鑒定。紙層色譜適用于極性較大的親水性化合物或極性差別較小的化合物的分離。2、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)方法(1)下行法將供試品溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲?/p>

4、制成一定濃度的溶液。用微量吸管或微量注射器吸取溶液，點(diǎn)于點(diǎn)樣基線上，溶液宜分次點(diǎn)加，每次點(diǎn)加后，俟其自然干燥、低溫烘干或經(jīng)溫?zé)釟饬鞔蹈桑瑯狱c(diǎn)直徑為2～4mm，點(diǎn)間距離約為1.5～2.0cm，樣點(diǎn)通常應(yīng)為圓形。將點(diǎn)樣后的色譜濾紙上端放在溶劑槽內(nèi)并用玻棒壓住，使色譜紙通過(guò)槽側(cè)玻璃支持棒自然下垂，點(diǎn)樣基線在支持棒下數(shù)厘米處。展開(kāi)前，展開(kāi)室內(nèi)用各品種項(xiàng)下規(guī)定的溶劑的蒸（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬?shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)對(duì)氨基酸的分離，學(xué)習(xí)運(yùn)用紙色譜法分離混合物的基

5、本原理，掌握紙色譜的操作方法。（二）藥品和儀器（二）藥品和儀器1儀器層析缸毛細(xì)管(內(nèi)徑為0.5mm)層析紙噴霧器7.5cm15cm標(biāo)本缸新華1號(hào)(514cm。)直尺、鉛筆2試劑0.1％甘氨酸水溶液0.1％亮氨酸水溶液0.1％茚三酮乙醇溶液正丁醇甲酸未知液（三）實(shí)驗(yàn)原理（三）實(shí)驗(yàn)原理（參見(jiàn)本節(jié)一、1、）（四）實(shí)驗(yàn)步驟（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、層析紙的準(zhǔn)備：將活化[1]的一張514厘米的層析紙條，在離底邊1.5厘米處用鉛筆[2]畫一直線作為始線，在

6、起始線上點(diǎn)A、B、C三個(gè)點(diǎn)，各點(diǎn)之間的距離為1.5厘米，A、C兩點(diǎn)分別離層析紙邊為1厘米，在起始線7厘米處畫一直線作為溶劑前沿線[3]。見(jiàn)圖5。2、點(diǎn)樣。取內(nèi)徑約0.5mm的毛細(xì)管三小段，分別插入試樣溶液中，借毛細(xì)虹吸現(xiàn)象吸取溶液少許，在A上點(diǎn)甘氨酸溶液，B上點(diǎn)未知液，C上點(diǎn)亮氨酸溶液，樣點(diǎn)的直徑約2～3mm，如溶液太稀，第一次點(diǎn)樣，吹干后，再點(diǎn)第二、第三次，每次都要點(diǎn)在同一位置上。3、展開(kāi)：將30毫升展開(kāi)劑（正丁醇：甲酸：水5：3：2

7、）倒入層析缸中，蓋上蓋子，飽和20分鐘后[4]，再將點(diǎn)好樣品的層析紙上端用回形針別住，把層析紙懸掛在層析缸蓋的鉤上，使層析紙的底邊浸入展開(kāi)劑0.5厘米，如圖9所示。展開(kāi)劑到達(dá)前沿線后，展開(kāi)完畢，取出層析紙，晾干或紅外燈下烘干。4、顯色：將烘干的層析紙，用噴霧器噴灑顯色劑(茚三酮溶液)，再到紅外燈下烘到顯色為止[5]。5、計(jì)算各氨基酸的Rf值：用筆畫出斑點(diǎn)，找出斑點(diǎn)的中心距離，并量出起始線至斑點(diǎn)中心的距離，如圖6所示。根據(jù)下列公式計(jì)算各氨