卵細(xì)胞質(zhì)量評(píng)估

1、卵子質(zhì)量的評(píng)估卵子質(zhì)量的評(píng)估姬萌霞孫正怡卵母細(xì)胞是決定IVFET妊娠率的關(guān)鍵因素。卵母細(xì)胞的質(zhì)量可影響受精率、早期胚胎發(fā)育、妊娠維持和胎兒發(fā)育。因此，要達(dá)到較高的臨床妊娠率和出生率，獲得發(fā)育潛能高、質(zhì)量好的卵母細(xì)胞就成為關(guān)鍵。目前評(píng)估卵母細(xì)胞質(zhì)量的通常有兩方面的手段：形態(tài)學(xué)評(píng)估和代謝學(xué)評(píng)估。形態(tài)學(xué)評(píng)估形態(tài)學(xué)評(píng)估：1.卵丘卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體卵母細(xì)胞復(fù)合體(Cumulusoocytecomplex，COC)主要通過光學(xué)顯微鏡觀察。有學(xué)者根據(jù)

2、鏡下COC形態(tài)將其分為5級(jí)，1級(jí)為成熟卵泡或排卵前卵泡，卵丘與放射冠擴(kuò)張程度好，疏松化，透明帶與胞漿清晰，膜顆粒細(xì)胞呈擴(kuò)張狀態(tài)，充分聚集；2級(jí)（卵母細(xì)胞接近成熟）卵丘擴(kuò)張，放射冠稍致密，膜顆粒細(xì)胞聚集好；3級(jí)（未成熟卵母細(xì)胞）卵丘與放射冠致密，胞漿可見生殖泡，膜顆粒細(xì)胞致密，呈分散狀態(tài)；4級(jí)（過熟卵母細(xì)胞）卵丘過度擴(kuò)張，含碎片，放射冠呈放射狀態(tài)，但常有碎片或呈不規(guī)則狀，可見透明帶，胞漿色暗或呈顆粒化，膜顆粒細(xì)胞小，呈分散狀態(tài)；5級(jí)（閉鎖

3、卵母細(xì)胞）卵母細(xì)胞幾乎無卵丘，胞漿色暗，不規(guī)則狀，透明帶清晰，膜顆粒細(xì)胞呈小塊聚集狀。研究發(fā)現(xiàn)，1級(jí)卵母細(xì)胞形成囊胚及優(yōu)質(zhì)囊胚率顯著高于25級(jí)細(xì)胞，提示這種形態(tài)學(xué)分級(jí)在一定程度上可以預(yù)測(cè)卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能及囊胚質(zhì)量。但也有學(xué)者認(rèn)為這種形態(tài)學(xué)分級(jí)并不能作為評(píng)估卵母細(xì)胞質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。Rattanachaiyanont根據(jù)顆粒細(xì)胞和放射冠的擴(kuò)張程度將COC分為4級(jí)（1級(jí)為擴(kuò)張最差，4級(jí)為擴(kuò)張最好）。但是，不同分級(jí)的卵母細(xì)胞的成熟程度、受精率、卵

4、裂率及妊娠率無顯著差異。Ebner等得出了類似的結(jié)論，還發(fā)現(xiàn)COC中存在血塊與卵母細(xì)胞胞漿中心顆?；嚓P(guān)，對(duì)受精率及囊胚形成率有負(fù)面影響；放射冠致密化越致密，卵母細(xì)胞成熟度越低。2.胞漿情況胞漿情況剝除顆粒細(xì)胞（拆卵）后，可進(jìn)一步觀察卵母細(xì)胞胞漿的情況，如顏色、顆粒化情況（包括顆粒大小、是否均質(zhì)、分布情況等），細(xì)胞器分布（如空泡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）從而評(píng)估其質(zhì)量。Nagano等發(fā)現(xiàn)，暗色胞漿意味著脂質(zhì)蓄積，體外受精后發(fā)育潛能高，而淺色胞漿細(xì)胞器密

5、度低，發(fā)育潛能差，黑色胞漿則意味著老化，發(fā)育潛能也很差。但Ten和Loutradis認(rèn)為暗色胞漿的卵母細(xì)胞形成的胚胎質(zhì)量差，還有一些學(xué)者認(rèn)為胞漿顏色不能單獨(dú)作為卵母細(xì)胞質(zhì)量的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Wilding等認(rèn)為胞漿顆?；穆涯讣?xì)胞比胞漿內(nèi)完全沒有顆粒的卵母細(xì)胞受精率高，而其他一些學(xué)者認(rèn)為胞漿散在分布顆粒的卵母細(xì)胞形成的胚胎質(zhì)量差。一些學(xué)者認(rèn)為，胞漿中央出現(xiàn)顆粒化的卵母細(xì)胞在受精后形成原核和胚胎的質(zhì)量下降，冷凍復(fù)蘇存活率低。Kahraman等認(rèn)

6、為這類卵母細(xì)胞的受精率、胚胎發(fā)育潛能和妊娠率不受影響，但繼續(xù)妊娠率降低。Wilding等則認(rèn)為這類卵母細(xì)胞與無顆粒的卵母細(xì)胞受精率無顯著差異。卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)有時(shí)會(huì)含有空泡（多為高爾基體和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)），和一些內(nèi)容物（折光小體、碎片、斑塊樣物、致密顆粒、致密顆粒、脂滴等），這些物質(zhì)是否會(huì)影響卵母細(xì)胞質(zhì)量？Ten、Balaban等認(rèn)為胞漿內(nèi)存在空泡不影響卵母細(xì)胞的受精率和形成胚胎的質(zhì)量，但對(duì)胚胎的發(fā)育潛能和冷凍復(fù)蘇存活率有負(fù)面影響。Otsuk

7、i發(fā)現(xiàn)有空泡的卵母細(xì)胞發(fā)育成胚胎后，生化妊娠率上升，臨床妊娠率下降。DeSutter和Balaban均認(rèn)為胞漿內(nèi)容物的存在并不影響受精率、胚胎質(zhì)量和種植率，但也有一些學(xué)者認(rèn)為有內(nèi)容物的卵母細(xì)胞受精率和體可位于極體附近，也可距極體較遠(yuǎn)。有些學(xué)者認(rèn)為紡錘體靠近極體的卵母細(xì)胞受精率、卵裂率、胚胎質(zhì)量均較高，但也有學(xué)者認(rèn)為紡錘體的位置與卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能無關(guān)。Battaglia等發(fā)現(xiàn)40歲以上的婦女出現(xiàn)異常紡錘體（即微管蛋白異常排列）的卵母細(xì)胞

8、增加。異常紡錘體可導(dǎo)致第二次有絲分裂時(shí)染色體的錯(cuò)誤分離，是造成非整倍體胚胎的原因。綜上所述，從形態(tài)學(xué)方面評(píng)估卵母細(xì)胞雖然簡(jiǎn)單、直觀，但主觀性強(qiáng)，缺乏公認(rèn)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)。近年來，從代謝學(xué)方面評(píng)估卵母細(xì)胞質(zhì)量逐漸興起，這種方法較為客觀，不損傷卵母細(xì)胞同時(shí)又能從分子層面對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，是形態(tài)學(xué)評(píng)估的重要補(bǔ)充。卵泡液是卵母細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，包含通過血液卵泡屏障血液成分和膜顆粒細(xì)胞的分泌成分，因此，卵泡液中的某些成分可能在評(píng)估卵母細(xì)胞質(zhì)量和發(fā)育潛能上也

9、起重要作用。代謝學(xué)評(píng)估代謝學(xué)評(píng)估1.糖類物質(zhì)糖類物質(zhì)卵丘細(xì)胞外基質(zhì)中含透明質(zhì)酸。排卵前，透明質(zhì)酸使卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體分離出來，漂浮在卵泡液中。卵泡液中透明質(zhì)酸的濃度與顆粒細(xì)胞的凋亡程度呈正相關(guān)，因此在不受精的卵母細(xì)胞中含量較高。但是，透明質(zhì)酸濃度與卵母細(xì)胞成熟度之間是否相關(guān)還需進(jìn)一步研究。2.蛋白質(zhì)、多肽及氨基酸類物質(zhì)蛋白質(zhì)、多肽及氨基酸類物質(zhì)卵泡液中含有一些血清及膜顆粒細(xì)胞分泌的蛋白，其中有一些蛋白有望作為卵母細(xì)胞質(zhì)量的標(biāo)記物。瘦素（

10、leptin）是由肥胖基因編碼的一種蛋白，在子宮內(nèi)膜異位癥和不孕的病理發(fā)生機(jī)制中起一定作用。在卵泡液中也存在瘦素。一些研究發(fā)現(xiàn)，卵泡液中的瘦素與胚胎質(zhì)量、臨床妊娠率呈負(fù)相關(guān)；瘦素與卵泡中氧分壓呈負(fù)相關(guān)，可能作為卵泡低氧、發(fā)育潛能欠佳的標(biāo)記物。Anifis等認(rèn)為瘦素可能與雌二醇共同作用影響IVF結(jié)局。最近的研究發(fā)現(xiàn)，瘦素與受精率呈正相關(guān)，與胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分呈弱相關(guān)，但不影響IVF結(jié)局。綜合目前研究來看，瘦素尚不能作為評(píng)估卵母細(xì)胞的標(biāo)記物。內(nèi)

11、皮素2（edothelin2）的濃度在受精和卵裂卵母細(xì)胞的卵泡液中顯著升高，并且與IGF1的濃度顯著相關(guān)，可能與IGF1在促進(jìn)FSH作用方面有協(xié)同作用。Plonowski等認(rèn)為edothelin2可通過抑制顆粒細(xì)胞黃素化和孕激素合成影響卵母細(xì)胞質(zhì)量，因此，edothelin2可作為評(píng)估卵母細(xì)胞適時(shí)成熟的標(biāo)記物。在牛模型中，卵泡液中丙氨酸和甘氨酸濃度能很好的預(yù)測(cè)卵母細(xì)胞質(zhì)量。在人卵母細(xì)胞中，卵泡液中D天門冬氨酸濃度與MII卵數(shù)、受精率直接

12、相關(guān)。3.活性氧（活性氧（ReactiveOxygenSpecies，ROS）與抗氧化劑）與抗氧化劑卵泡中的氧含量和線粒體活動(dòng)都可影響卵母細(xì)胞發(fā)育。氧化應(yīng)激可損傷DNA，誘發(fā)細(xì)胞凋亡。嚴(yán)重缺氧的卵泡中，其卵母細(xì)胞出現(xiàn)紡錘體異常、胞質(zhì)異常和非整倍體胚胎的幾率明顯增高。由此可見，氧化應(yīng)激嚴(yán)重影響卵母細(xì)胞的成熟。但是，一些研究卻發(fā)現(xiàn)，卵泡液中ROS的水平與卵母細(xì)胞成熟度呈正相關(guān)。有報(bào)道稱，在體外成熟培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞中，ROS可改善其發(fā)育潛能；