高效石油降解細(xì)菌的篩選鑒定和菌群構(gòu)建.pdf

1、石油開(kāi)采及其加工品的大量使用，在世界范圍里造成土壤環(huán)境石油污染日益嚴(yán)重，對(duì)生態(tài)環(huán)境及人類健康造成嚴(yán)重危害。石油是一種碳?xì)浠旌衔铮梢宰鳛樽匀画h(huán)境中部分微生物的碳源和能源分解利用，因此從自然環(huán)境篩選高效石油降解菌并構(gòu)建高效菌群，對(duì)于石油污染土壤生物修復(fù)有重要意義。 本文從高效石油降解菌的篩選及菌群構(gòu)建的目的出發(fā)，開(kāi)展了一系列研究工作，主要研究結(jié)果為： (1)采用三種培養(yǎng)條件對(duì)不同來(lái)源石油污染土壤細(xì)進(jìn)行富集培養(yǎng)，運(yùn)用傳統(tǒng)

2、的微生物分離技術(shù)對(duì)富集菌群進(jìn)行了分離純化，根據(jù)菌落特征，篩選獲得了40株純菌株。根據(jù)純菌株變性梯度凝膠電泳法(DGGE)圖譜中的遷移率，將40個(gè)純菌株初步劃分為17個(gè)種類，對(duì)17個(gè)代表菌株石油降解能力的測(cè)定結(jié)果表明：不同菌株石油降解率范圍在17.6％～77.9％，其中有10個(gè)株降解率高于40％，有3個(gè)菌株降解率高于70％。 (2)對(duì)分離得到的石油高效降解菌16S rDNA擴(kuò)增、測(cè)序，并進(jìn)行同源性分析，其中有7個(gè)菌株與芽孢桿菌、

3、短波單胞菌、銅綠假單胞菌、食堿桿菌、假單胞菌、類產(chǎn)堿假單胞菌、無(wú)色桿菌相似性為100％。 (3)對(duì)石油高效降解菌株與石油降解能力有關(guān)的脫氫酶和鄰苯二酚2，3-雙加氧酶活性進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，7個(gè)株菌脫氫酶活性范圍在7.0～119.0mg·L-1·h-1，鄰苯二酚2，3-雙加氧酶活性范圍在0.22～0.87U，添加誘導(dǎo)物柴油提高了供試菌株鄰苯二酚2，3-雙加氧酶活性，范圍為3.34～8.98U，不同菌株之間酶活性存在不同程度的

4、差異，其中無(wú)色桿菌S-51脫氫酶活性最高，單胞菌S-17鄰苯二酚2，3-雙加氧酶活性(C23Oase)活性最高。同一培養(yǎng)條件下供試菌株細(xì)胞裂解液和培養(yǎng)液上清中C23Oase活性有顯著的差異，暗示C23Oase為胞內(nèi)酶。 (4)采用3種培養(yǎng)基，對(duì)4個(gè)不同取樣來(lái)源的石油污染土壤細(xì)菌進(jìn)行富集馴化，獲得12個(gè)混合菌群，其對(duì)石油降解率范圍在44％～86.8％之間，不同菌群降解能力存在明顯差異。利用PCR-DGGE技術(shù)對(duì)混合菌群優(yōu)勢(shì)菌多樣