半知菌優(yōu)勢(shì)種與海洋環(huán)境污染之間的關(guān)系和檢測(cè).pdf

1、本文測(cè)試研究了膠州灣近岸李村河、海泊河入?？诔练e物中氮、磷及重金屬含量，以石老人近岸沉積物作為對(duì)照，對(duì)其污染狀況與該生境半知菌種群數(shù)量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，李村河入?？诰C合污染最為嚴(yán)重。沉積物中可培養(yǎng)半知菌數(shù)量隨著污染程度增加而減少，這種變化與重金屬污染的相關(guān)性較強(qiáng)。 從膠州灣污染區(qū)域的沉積物樣品中，篩選獲得1株對(duì)重金屬元素反應(yīng)敏感的菌株，經(jīng)鑒定為灰黃青霉(Penicilliumgriseofulvum)，對(duì)該菌株在重金屬

2、脅迫下的生物學(xué)特征及酶活變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，一定量的重金屬銅、鋅離子對(duì)菌株產(chǎn)生顯著的影響，并通過形態(tài)與色素變化的方式表現(xiàn)出來。當(dāng)培養(yǎng)基中Cu2+為125mg/L，Zn2+濃度為800mg/L時(shí)，孢子萌發(fā)會(huì)完全受到抑制，同時(shí)菌絲也發(fā)生嚴(yán)重變異。菌株色素隨著Cu2+的增加呈現(xiàn)從灰綠色到淺黃色的顏色變化，隨著Zn2+的增加呈現(xiàn)從灰綠色到白色的顏色變化。在菌株生長(zhǎng)的離子濃度范圍內(nèi)，少量的Cu2+能提高CAT、GOD酶和金屬硫蛋白的活性作用

3、，25mg/LCu2+時(shí)活性作用最強(qiáng)。在25mg/L至75mg/L，隨著Cu2+濃度的增加，活性作用逐漸減弱，濃度增加至100mg/L時(shí)菌株不能生長(zhǎng)。而在Zn2+濃度為100mg/L至400mg/L的培養(yǎng)基中，CAT、GOD酶和金屬硫蛋白的活性作用隨著Zn2+濃度的增加逐漸增強(qiáng)，400mg/LZn2+時(shí)酶活作用最強(qiáng)。Zn2+濃度增加至600mg/L時(shí)菌株不能生長(zhǎng)。 根據(jù)GeneBank中青霉屬不同種和相近屬種的ITS序列差異和

4、特有的IAO序列，設(shè)計(jì)了灰黃青霉的特異性引物AS1/RS4和IAO1/IAO2，由此建立的PCR檢測(cè)體系可以從灰黃青霉菌株中擴(kuò)增到目的特異性片段，而擴(kuò)增其他近似或相關(guān)菌株時(shí)沒有相應(yīng)的特異性片段。利用引物AS1/RS4，通過套式：PCR將菌株基因組DNA的檢測(cè)靈敏度至少提高了103倍。當(dāng)沉積物中菌株的分生孢子達(dá)到102個(gè)數(shù)量級(jí)孢子/0.25g土?xí)r可檢測(cè)出。進(jìn)一步利用此檢測(cè)體系對(duì)膠州灣近海沉積物DNA樣品進(jìn)行檢測(cè)，均能快速穩(wěn)定的檢測(cè)出目的片