壓電石英晶體免疫傳感器檢測(cè)尿液白蛋白的實(shí)驗(yàn)研究

1、1表面等離子體免疫傳感器同步定量尿液中多種微量蛋白的研究羅陽(yáng)1，張波1，高維寅1，陳鳴2，蔣天倫3，劉星1，王玨1，府偉靈1?（1第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶400038；2第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶4000403第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科，重慶400038；）[摘要摘要]目的目的探討并建立表面等離子體免疫傳感器芯片同步定量尿液中多種微量蛋白的方法。方法方法采用EDCNHS方法將微量白蛋白(MA)、α1微球蛋白（A1M）、β2

2、微球蛋白(B2M)、尿IgG的單克隆抗體固定于免疫傳感器芯片之上，并用表面等離子體共振傳感器（SPR）檢測(cè)樣本中微量蛋白的含量。首先利用4種微量蛋白的標(biāo)準(zhǔn)血清建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后對(duì)其進(jìn)行靈敏度、特異性等指標(biāo)的方法學(xué)評(píng)價(jià)。并以免疫散射比濁方法為參考方法，檢測(cè)125例臨床患者24h尿液樣本的微量蛋白濃度，并比較兩種方法檢測(cè)相同樣本時(shí)的結(jié)果差異。結(jié)果結(jié)果該表面等離子體共振免疫傳感器芯片具有良好的操作性能和檢測(cè)特異性。其標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2均在0.99

3、5以上。其檢測(cè)靈敏度分別是A1M為5μgL，B2M為7.3μgL，MA為11.5μgL，IgG為22μgL。所有4項(xiàng)指標(biāo)可在20分鐘之內(nèi)同步完成。與微量蛋白檢測(cè)的經(jīng)典方法免疫散射比濁相比，兩者的相關(guān)性和一致性較高，且本檢測(cè)方法所需時(shí)間更短，檢測(cè)成本更低。結(jié)論結(jié)論表面等離子體免疫傳感器芯片可實(shí)現(xiàn)尿液中多種微量蛋白的快速、準(zhǔn)確、同步定量，為臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)尿液中微量蛋白提供了可靠的技術(shù)補(bǔ)充。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]表面等離子體共振；免疫傳感器芯片；微

4、量蛋白；檢測(cè)[中圖分類號(hào)]R446.12[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]ASimultaneousdeterminationofmultipletraceproteinsinurinebySPRbiosensLuoYang1，ZhangBo1，GaoWeiyin1，ChenMing2JiangTianlun3LiuXing1，WangJue1FuWeiling1(1DepartmentofLabatyMedicine，3BloodBank，Southwe

5、sthospital，2Daping[基金項(xiàng)目]國(guó)家“863”項(xiàng)目（2007AA02Z416），國(guó)家自然科學(xué)基金（3092700230900348），全軍科技成果推廣擴(kuò)試項(xiàng)目（08JKS01），軍隊(duì)科技攻關(guān)（08G089），重慶市科技攻關(guān)項(xiàng)目（CSTC2010AA5042）[通訊作者]府偉靈，電話:(023)68754429，Email:weilingfu@；Commented[U1]:英文全稱3無(wú)法對(duì)特種微量蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量；放免法具

6、有靈敏度高、檢出限低的優(yōu)點(diǎn)，但需用125I或32P等放射性核素標(biāo)記，極易導(dǎo)致人體的放射性暴露。因此，臨床上迫切需要建立一種準(zhǔn)確、快速、無(wú)需標(biāo)記、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的檢測(cè)方法[2]。近年來(lái)，生物傳感器在抗原抗體復(fù)合物的快速檢測(cè)方面已經(jīng)獲得大量研究進(jìn)展，相繼出現(xiàn)了利用表面等離子體共振（SPR）、壓電石英晶體微天平(QCM)、漏聲表面波(LSW)等能進(jìn)行蛋白質(zhì)快速檢測(cè)的傳感器[39]。SPR因其具有無(wú)需標(biāo)記，準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)在傳感器領(lǐng)域取得了較快發(fā)展

7、[1011]。同時(shí)，采用光線反射原理的SPR傳感器可避免樣本中干擾物的影響，因而可實(shí)現(xiàn)渾濁樣本的檢測(cè)，此特點(diǎn)在尿液、漏出液等較渾濁樣本的臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中具有極其重要的意義[12]。常規(guī)的SPR傳感器采用單通道技術(shù)，每次僅能檢測(cè)單個(gè)指標(biāo)，故使其在臨床的應(yīng)用受到限制[13]。本實(shí)驗(yàn)即在現(xiàn)有單通道SPR傳感器的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)出適合于多蛋白指標(biāo)檢測(cè)的SPR免疫傳感器芯片，以應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室中對(duì)于渾濁樣本尤其是尿液中A1M、B2M、MA、IgG的同

8、步檢測(cè)，以期為臨床實(shí)驗(yàn)室診斷渾濁樣本提供一種新的技術(shù)方案。1材料與方法材料與方法1.1儀器與試劑人微量白蛋白(MicroalbuminALB)標(biāo)準(zhǔn)血清及其單克隆抗體、人α1微球蛋白(α1microglobulinA1M)標(biāo)準(zhǔn)血清及其單克隆抗體、人β2微球蛋白(β2microglobulin，B2M)標(biāo)準(zhǔn)血清及其單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)SigmaAldrich公司；人免疫球蛋白(ImmunoglobulinGIgG)及其單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Be

9、ckman公司。PBS緩沖液：0.05M，pH7.2，自行配制。所用其它試劑均為AR級(jí)。EDC、N羥基琥珀酸亞胺(NHS)、牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖均購(gòu)自Sigma公司。1.2方法1.2.1金膜表面的預(yù)處理將芯片浸入1molL的NaOH溶液中浸泡10分鐘，用三蒸水清洗后，浸入1molL的鹽酸(Hcl)溶液中浸泡10分鐘，三蒸水及95%乙醇清洗后，常溫氮?dú)獯蹈蓚溆谩?.2.2抗體包被抗體分子的固定按照課題組前期建立的方法進(jìn)行[9]。