細菌簡單染色和革蘭染色

1、實驗二細菌的簡單染色和革蘭染色一、實驗?zāi)康囊弧嶒災(zāi)康?、學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)，掌握細菌涂片的制作方法。2、掌握細菌簡單染色法和革蘭染色法的原理及操作步驟，識別細菌的革蘭染色結(jié)果。3、鞏固顯微鏡油鏡的使用方法。二、實驗原理二、實驗原理細菌生長于酸性、中性和堿性溶液時常帶負電荷，所以通常采用帶正電荷的堿性染料（如美藍、甲紫、堿性復(fù)紅或孔雀綠等）使其著色。當細菌分解糖類產(chǎn)酸時，細菌所帶正電荷增加易被帶負電荷的酸性染料（如伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅）

2、著色。簡單染色法就是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態(tài)的方法。革蘭氏染色法（GramStaining）由丹麥病理學(xué)家ChristianGram于1884年創(chuàng)立，是細菌學(xué)中很重要的鑒別染色法，因為通過此法染色，可將細菌鑒別分類為革蘭氏陽性菌（G）和革蘭氏陰性菌（G）這兩種類型。革蘭氏染色法之所以能夠?qū)⒓毦鷧^(qū)分為革蘭氏陽性菌（G）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類，是因為這兩類菌的細胞壁結(jié)構(gòu)和成分不同。一般認為革蘭陰性細菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高

3、，經(jīng)乙醇處理后部份細胞壁可能被溶解并改變其組織狀態(tài)，細胞壁孔徑大，不能阻止溶劑透入，因而將結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物洗去而被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染就染成了紅色；革蘭陽性細菌的肽聚糖層較厚，經(jīng)乙醇處理后使之發(fā)生脫水作用而使孔徑縮小，結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物保留在細胞內(nèi)而不被脫色。雖然如此，革蘭染色的差異并不能完全認為是化學(xué)的差別，也有物理結(jié)構(gòu)不同的結(jié)果，因為酵母菌細胞壁的成份完全和細菌不同，但具有革蘭染色陽性反應(yīng)。三、實驗器材三、實驗器材1、菌種：大腸桿菌

4、、枯草芽孢桿菌、葡萄球菌、酵母菌、待鑒定的未知菌S1和S3。2、儀器及其他用品：顯微鏡、酒精燈、打火機、接種環(huán)、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、擦鏡液、吸水紙、鏡油、無菌牙簽。3、簡單染液：草酸銨甲紫染液、番紅染液。4、革蘭染液：草酸銨甲紫染液、革氏碘液、95%乙醇溶液、番紅染液四、實驗步驟四、實驗步驟（一）簡單染色（一）簡單染色1、載玻片的處理：從乙醇溶液中取出洗干凈的載玻片，用吸水紙擦干，將要涂菌的部位在酒精燈火焰上烤一下，去除油脂，冷卻待

5、用。2、涂片:左手持菌液試管，右手持接種環(huán)在火焰上灼燒待冷卻后，用接種環(huán)從試管枯草芽孢桿菌培養(yǎng)液中取一環(huán)菌，于載玻片中央涂成薄層（事先在背面做好標記圓圈）即可，或先滴一小滴無菌水于載玻片中央，用接種環(huán)從斜面上挑出少許，與載玻片上的水滴混合均勻，涂成一薄層。注意在拔或塞試管塞時，應(yīng)將試管口在火焰處略加燒灼，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。圖1枯草桿菌革蘭氏染色結(jié)果，枯草桿菌革蘭氏染色結(jié)果，10100如上圖所示，枯草桿菌染色結(jié)果為紫色，是革蘭