生物技術(shù)題庫

1、一、名詞解釋1.生物技術(shù)：生物技術(shù)：也稱生物工程（bioengingineering），是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的。2.植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)：是指在無菌條件下，把離體的植物器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等材料接種在人工培養(yǎng)基中，使其發(fā)育成完整植株的過程。3、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性：任何一個(gè)擁有完整細(xì)胞核的植

2、物細(xì)胞都具有形成一個(gè)完整植株所必需的全部遺傳信息，在特定條件下表達(dá)可產(chǎn)生獨(dú)立的個(gè)體。4..脫分化脫分化：也叫去分化，已經(jīng)停止分化的細(xì)胞、組織、器官在離體培養(yǎng)條件下，逐漸失去其原來的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)其分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)的過程。5.再分化再分化：由脫分化產(chǎn)生的無組織結(jié)構(gòu)的細(xì)胞團(tuán)在離體培養(yǎng)條件的剌激下重新分化成具有不同結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞、組織、器官的過程，即再分化。6.培養(yǎng)基培養(yǎng)基：是植物組織培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。其成分是植物生長發(fā)育所

3、必需的各種物質(zhì)的來源，主要包括營養(yǎng)元素、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、維生素、有機(jī)添加物等。7.外植體外植體：在植物組織培養(yǎng)中，用來進(jìn)行培養(yǎng)的植物材料常稱外植體(explant)，包括植物器官、組織、細(xì)胞等。7.重組重組DNA技術(shù)技術(shù)：是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進(jìn)行拼接重組，然后轉(zhuǎn)入另一種生物體（受體）內(nèi)，使之按照人們的意愿穩(wěn)定遺傳并表達(dá)出新產(chǎn)物或新性狀的DNA體外操作程序，也稱為分子克隆技術(shù)。8.基因工程基因工程：就是將目的基

4、因插入到載體（質(zhì)粒，病毒）中，再把攜帶目的基因的載體轉(zhuǎn)入受體材料細(xì)胞中，使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)。進(jìn)而使受體生物表現(xiàn)出目的基因的性狀。⑴限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識(shí)別雙鏈DNA中的特定核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)切割雙鏈DNA的內(nèi)切酶。⑵平齊末端平齊末端：當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處將DNA的兩條鏈切開時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。⑶粘性末端粘性末端：當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開時(shí)，產(chǎn)生的就是黏

5、性末端。⑷同裂酶同裂酶：能識(shí)別同一序列（切割位點(diǎn)可同或不同）但來源不同的兩種酶。⑸同尾酶同尾酶：有些限制性內(nèi)切酶雖然識(shí)別序列不完全相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的黏端，這樣的酶彼此互稱為同尾酶。9.限制性內(nèi)切酶的活性限制性內(nèi)切酶的活性：在適當(dāng)反應(yīng)條件下，1小時(shí)內(nèi)完全酶解1g特定DNA底物，所需要的限制性內(nèi)切酶的量，為一個(gè)活性單位。10.限制性物理圖譜限制性物理圖譜：DNA上某些限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的圖譜，可作為DNA片段的特殊標(biāo)記。也稱

6、DNA物理圖譜。11.限制性內(nèi)切核酸酶的切割頻率限制性內(nèi)切核酸酶的切割頻率：切割頻率是指限制性內(nèi)切核酸酶在DNA分子中的預(yù)測切點(diǎn)數(shù)。12.回文序列回文序列：雙鏈DNA中的一段倒置重復(fù)序列，當(dāng)該序列的雙鏈被打開后，可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。這段序列被稱為回文序列。13.克隆載體克隆載體:將外源基因攜帶入宿主細(xì)胞，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)行DNA擴(kuò)增和使外源基因得以高效表達(dá)。14.表達(dá)載體表達(dá)載體:在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動(dòng)子、RBS、終

7、止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。15.目的基因目的基因:把需要研究的基因稱為目的基因（靶基因或者插入基因）。要分離、改造、擴(kuò)為擴(kuò)增反應(yīng)的模板，用含有選擇性堿基的引物對模板DNA進(jìn)行擴(kuò)增，選擇性堿基的種類數(shù)目和順序決定了擴(kuò)增片段的特殊性，所以只有那些限制性位點(diǎn)側(cè)翼的核苷酸與引物的選擇性堿基相匹配的限制性片段才可被擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)放射性同位素標(biāo)記聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，根據(jù)凝膠上DNA指紋的有無來檢出多態(tài)性。2.Nthern雜交原理雜交

8、原理：外源基因如果正常表達(dá)，在轉(zhuǎn)化植株的細(xì)胞有其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物特異mRNA生成，提取總RNA或mRNA并進(jìn)行凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜并與標(biāo)記好的探針雜交形成DNARNA雜合體，通過探針上的標(biāo)記可檢測出目的mRNA。Nthern雜交程序：探針制備探針選擇：檢測外源基因轉(zhuǎn)錄的mRNA應(yīng)使用同源的DNA探針，雜交后形成DNARNA雜合體；也可使用cDNA探針。探針序列的獲得人工合成PCR方法質(zhì)粒酶切法探針標(biāo)記切口平移法②轉(zhuǎn)化植株總RNA的提取。RNA純度的分

9、析：A260A280=1.7—2.02.0若《2表明有異硫氰酸污染，有異丙醇重新沉淀，RNA濃度計(jì)算:RNA(ugml)=A260稀釋倍數(shù)40ugml分離柱層析法④電泳甲醛變性電泳單鏈?zhǔn)筊NA，其鏈內(nèi)堿基易于氫鍵形成二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)，而甲醛與堿基結(jié)合后形成保持線性，電泳時(shí)才與分子量標(biāo)記成正比。⑤轉(zhuǎn)膜烘膜雜交信號(hào)檢測分析結(jié)。3.wetern雜交原理雜交原理：若目的基因表達(dá)正常，則在轉(zhuǎn)基因植物中含有一定量的目的蛋白。從轉(zhuǎn)基因植物中提取總蛋白質(zhì)

10、，兩蛋白質(zhì)樣品溶于去污劑和還原劑的溶液中，經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳使蛋白質(zhì)按分子發(fā)小分離，將分離的各蛋白條帶原位轉(zhuǎn)印到固相膜上。膜在高濃度的蛋白質(zhì)中溫育，以封閉非特異位點(diǎn)，加入特異抗體，印記上的目的的蛋白與一抗結(jié)合后，再加入能與一抗專一結(jié)合的標(biāo)記好的二抗，最后痛過二抗上的標(biāo)記化合物的性質(zhì)進(jìn)行檢出。4.可被利用的遺傳標(biāo)記應(yīng)具備以下幾個(gè)條件可被利用的遺傳標(biāo)記應(yīng)具備以下幾個(gè)條件：多態(tài)性高；表現(xiàn)為共顯性；對農(nóng)藝性狀影響?。唤?jīng)濟(jì)方便，容易觀察記

11、載。5.基因組文庫基因組文庫：是將目標(biāo)生物的全部基因組DNA切割成一定長度的DNA片段并克隆到某種載體上而形成的集合。根據(jù)所用載體不同，基因組文庫分為以下幾種。質(zhì)粒文庫，噬菌體文庫，黏粒文庫，人工染色體文庫。6.基因組文庫的構(gòu)建步驟基因組文庫的構(gòu)建步驟：1目標(biāo)植物基因組DNA提取及片段化2載體的選擇與制備3DNA片段與載體連接，噬菌體進(jìn)行離體包裝4重組體感染宿主細(xì)胞（大腸桿菌）5轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選放射性標(biāo)記探針進(jìn)行文庫雜交篩選7.mRNA差

12、異顯示技術(shù)分離差異表達(dá)的基因差異顯示技術(shù)分離差異表達(dá)的基因：其基本原型：利用真核生物成熟mRNA的3“polyA結(jié)構(gòu)，用oligo(dT)12MN（其中M為錨定堿基，起增大引物Tm值得作用，M為ACGT中的任意一種）作為描定引物與mRNA的PLOYA結(jié)合，再反轉(zhuǎn)錄酶的作用下將MRNA反轉(zhuǎn)錄成mRNAcDNA的雜交分子，這一過程即差異顯示反轉(zhuǎn)錄，然后在用10BP的隨機(jī)引物與OLIHO(DT)12MN組成的引物對，以MRNACDNA為模板進(jìn)

13、行PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰氨凝膠電泳，通過放射自顯影或顯色反應(yīng)即可獲得差異表達(dá)基因的擴(kuò)增條帶。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：在有DNA單鏈，引物，DNTPS、DNA聚合酶等條件下，DNA聚合酶即可從引物開始沿單鏈DNA的5”3“合成其互補(bǔ)鏈，而PCR儀可以使這一反應(yīng)不斷進(jìn)行下去，直到條件不復(fù)存在。8.PCR反應(yīng)原理反應(yīng)原理：RTPCR即反轉(zhuǎn)錄PCR，以MRNA為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成CDNA第一鏈的過程。在已知目的基因