大學(xué)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)及思考題

1、實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌涂片的制備及革蘭氏染色1、制備細(xì)菌染色標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意什么？涂片不要太厚，要均勻，固定的時(shí)候一定按照要求，快速，染色脫色時(shí)間要控制好2涂片2、固定的意義何在？固定時(shí)應(yīng)注意什么問題？固定目的是殺死細(xì)菌并使細(xì)菌粘附在玻片上，便于染料著色，常用加熱法，即將細(xì)菌涂片膜向上，通過(guò)火焰3次，以熱而不燙為宜，防止菌體燒焦、變形。此制片可用于染色。3、革蘭氏染色的原理及染色成敗的關(guān)鍵？機(jī)制：結(jié)果為陽(yáng)性（紫色）和陰性（紅色）兩大類，與細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)

2、構(gòu)組成有關(guān)。細(xì)菌經(jīng)結(jié)晶紫初染和碘液媒染之后，所有細(xì)菌都染上不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，呈深紫色；陰菌的細(xì)胞壁含脂類較多，當(dāng)以95%乙醇脫色時(shí)，脂類被乙醇溶去，而肽聚糖少，且交聯(lián)疏松，不易收縮，在細(xì)胞壁中形成的孔隙較大，復(fù)合物極易被乙醇溶解洗脫，最后被紅色的染料復(fù)染成紅色；陽(yáng)菌與陰菌相反，復(fù)合物不能脫出，經(jīng)紅色染料復(fù)染后仍為紫色。｛（堿）結(jié)晶染色→碘媒染→酒精脫色→①可脫為G②不脫為G—｝關(guān)鍵：革蘭氏染色四大基本步驟：?結(jié)晶紫初染?碘液

3、媒染?乙醇脫色?沙黃復(fù)染?其中乙醇脫色是關(guān)鍵?因?yàn)槿绻撋^(guò)度，有可能會(huì)使革蘭氏陽(yáng)性菌呈假陰性?如果脫色不夠，有可能使革蘭氏陰性菌呈假陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備1、為什么在校正培養(yǎng)基pH時(shí)少量培養(yǎng)基時(shí)用0.1摩爾每升氫氧化鈉而大量時(shí)用1摩爾每升氫氧化鈉少量培養(yǎng)基在校正時(shí)，需要的氫氧化鈉少，所以用濃度底的校正的結(jié)果會(huì)更準(zhǔn)確。而大量的就需要大量的，如果還用濃度低得話，結(jié)果會(huì)準(zhǔn)確，但是工作量極大，而換1molL的話，結(jié)果誤差不會(huì)很大，綜合考慮：在

4、校正大量的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)使用濃度高的。2、為什么肉湯培養(yǎng)基在高壓滅菌之前ph要略調(diào)高些？牛肉膏中有些物質(zhì)在加熱后會(huì)分解出酸性物質(zhì)導(dǎo)致pH下降。因此初始pH應(yīng)比需要值高0.2左右。3、試述普通肉湯和瓊脂培養(yǎng)基的主要用途？瓊脂培養(yǎng)基是在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)時(shí)專門配置的，一般植物源瓊脂培養(yǎng)基適用于培養(yǎng)真菌一類的微生物；動(dòng)物源瓊脂培養(yǎng)基適用于細(xì)菌類微生物培養(yǎng)。動(dòng)物源瓊脂培養(yǎng)基主要成分與肉湯差不多，只是培養(yǎng)基可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求進(jìn)行調(diào)整營(yíng)養(yǎng)成分，以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)要

5、求。瓊脂培養(yǎng)基一定會(huì)成“凍”，肉湯不一定。實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌分離培養(yǎng)、移植及培養(yǎng)特性觀察注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、接種環(huán)必須做得圓整平滑，使用前后須燒灼滅菌。2、接種培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，要盡一切可能防止外界微生物的進(jìn)入。3、選擇適宜的培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基選擇不當(dāng)，則材料中的細(xì)菌就可能難以分離。（5）有機(jī)酸鹽及氨鹽利用試驗(yàn)檸檬酸鹽利用試驗(yàn)檸檬酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中檸檬酸鈉為碳的唯一來(lái)源。而磷酸二氫按是氮的唯一來(lái)源。有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用

6、檸檬酸鈉為碳源，因此能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。此時(shí)培養(yǎng)基中的溟廖香草酚藍(lán)指示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細(xì)菌，在該培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色。2、生化試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中的作用和意義生化實(shí)驗(yàn)在細(xì)菌的鑒定中意義很大因?yàn)橐氪_定一種菌具體屬于哪一種就要通過(guò)一系列的生化實(shí)驗(yàn)幾菌落形態(tài)和顯微觀察來(lái)確定生化實(shí)驗(yàn)是非常重要的一部分.但其實(shí)意義不是很大，一般是根據(jù)《伯氏細(xì)菌手冊(cè)》看的，不過(guò)現(xiàn)

7、在基本上都是用16SRNA來(lái)鑒定，要精確一些。實(shí)驗(yàn)五藥物敏感試驗(yàn)1、圓紙片藥物敏感試驗(yàn)操作注意事項(xiàng)藥物不能靠的太近，應(yīng)盡量均勻分布在紙片上。2、試述藥物敏感試驗(yàn)的意義藥物敏感試驗(yàn)是為了對(duì)臨床標(biāo)本中分離的菌株選擇何種藥物進(jìn)行治療有效而進(jìn)行的一種試驗(yàn)。常用的有紙片擴(kuò)散法和微量稀釋法。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可以判斷何種藥物對(duì)該菌株治療有效（即敏感），何種藥物對(duì)該菌株治療無(wú)效（即耐藥）。實(shí)驗(yàn)六血凝及血凝抑制試驗(yàn)1、病毒凝集紅細(xì)胞是不是一種特異的抗原體反應(yīng)

8、？為什么？不是，?有些病毒具有凝集紅細(xì)胞的能力，不需要與抗體結(jié)合即可以凝集血細(xì)胞，是非特異性的。?還有一些病毒，當(dāng)與抗體結(jié)合后，可以引起紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，稱為血凝試驗(yàn)，可用于特異性檢查抗原或抗體。2、HI試驗(yàn)是不是特異的抗原抗體反應(yīng)？為什么？是，因?yàn)镠I實(shí)驗(yàn)本身就是一種測(cè)定抗原或抗體的技術(shù)，抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)即可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行?？乖贵w反應(yīng)的過(guò)程是經(jīng)過(guò)一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特

9、異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化實(shí)驗(yàn)七凝集試驗(yàn)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、每次試驗(yàn)應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清和生理鹽水對(duì)照。2、抗原保存在2～8℃，用前置室溫30～60min，使用前搖勻，如出現(xiàn)搖不散的凝塊，不得使用。3、被檢血清必須新鮮，無(wú)明顯的溶血和腐敗現(xiàn)象。4、平板凝集反應(yīng)溫度最好在3～5min內(nèi)記錄結(jié)果，如反應(yīng)溫度偏低，可于5～8min內(nèi)判定。5、平板凝集反應(yīng)適用于普查初篩，篩選出的陽(yáng)性反應(yīng)血清，需