黃酮2溶劑提取法

1、三 黃酮的提取與分離,黃酮的提取與分離,提取,,分離,,pH梯度萃取法,溶劑萃取法,柱色譜法,HPLC色譜法,溶劑提取法,檢識,理化檢識,色譜檢識,,知識鏈接與拓展,溶劑提取法,基本原理,,操作形式,影響因素,,浸漬法,煎煮法,滲漉法,回流法,連續(xù)回流法,基本原理,,根據中藥化學成分與溶劑間“極性相似相溶”的原理，依據各類成分溶解度的差異，選擇對所提成分溶解度大、對雜質溶解度小的溶劑，依據“濃度差”原理，將所提成分從藥材中溶解出來的方法

2、。,影響因素---溶劑、方法、粉碎度、溫度、時間等,1 藥材粉碎度：藥粉越細、表面積越大，提取效率越高。但太細，藥粉對成分的吸附也越強。因此水提取宜用粗粉；用有機溶劑可細些,以20目為好。2 提取溫度：一般熱提效率高，但要考慮有些成分溫度高易破壞，應選擇適宜溫度。3 提取時間：一般提取時間長提出量大。但被提成分在細胞內外溶解一旦平衡，時間長即無意義。一般熱水提以1/2hr為宜，乙醇提1hr為宜。4 提取溶劑的選擇: 遵循“相

3、似者相溶”規(guī)律，選擇對有效成分溶解度大，對無效成分溶解度小的溶劑做為提取溶劑;溶劑沸點要適中、低毒安全、環(huán)保。5 提取方法的選擇:見后面,,（一）化學成分的極性：被提取成分的極性是選擇提取溶劑最重要的依據。1、影響化合物極性的因素： (1) 化合物分子母核大小（碳數多少）：分子大、碳數多，極性??；分子小、碳數少，極性大。 (2) 取代基極性大小：在化合物母核相同或相近情況下，化合物極性大小主要取決于取代基極性大

4、小。,,常見基團極性大小順序如下：酸＞酚＞醇＞胺＞醛＞酮＞酯＞醚＞烯＞烷。 舉例：判斷下列各組化合物極性大小。 A B C,,常見中藥化學成分類型的極性： 極性較大的：苷類、生物堿鹽、糖類、蛋白質、氨基酸、鞣質、小分子有機酸、親水性色素。 極性小的：游離生物堿、苷元、揮發(fā)油、樹脂、脂肪、大分子有機酸、親脂性色素。,溶劑的選擇

5、,1、溶劑的分類水：極性大，滲透力強，介電常數大；親水性溶劑：極性較大，介電常數較大，常用的有甲醇、乙醇、丙酮；與水任何比例互溶；親脂性溶劑：極性較小，介電常數小，常用的有乙酸乙酯、氯仿、乙醚、苯、石油醚。不溶或微溶于水。,2、極性大小 水(H2O) 甲醇(MeOH ) 乙醇(EtOH)

6、 丙酮（Me2CO） 正丁醇(n-BuOH) 乙酸乙酯(EtOAc) 乙醚(Et2O) 氯仿(CHCl3 ) 苯（C6H6) 四氯化碳(CCl4) 正己烷≈石油醚(Pet.et)。,,,,親水

7、性溶劑,親脂性溶劑,,問題：1、比水重的有？2、不溶于水的有？3、不溶于水極性最大的是？4、與水互溶的有？5、極性最大的有機溶劑是？6、極性最小的有機溶劑是？7、溶解范圍最廣的是？8、是混合物的有？9、不同濃度乙醇極性大小比較？,,（1）水：最常用。可溶解苷類、生物堿鹽、糖類、蛋白質、氨基酸、鞣質、小分子有機酸、有機酸鹽、親水性色素、無機鹽。其中蛋白質不溶于熱水。 缺點：用水提取易酶解苷類成分，且易

8、霉壞變質。某些含果膠、粘液質類成分的中草藥，其水提取液常常很難過濾。沸水提取時，中草藥中的淀粉可被糊化，而增加過濾的困難。故含淀粉量多的中草藥，不宜磨成細粉后加水煎煮。,,（2）親水性的有機溶劑：以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好。親水性的成分除蛋白質、粘液質、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。 優(yōu)點：應用范圍廣，易過濾，不霉變，易濃縮回收。 缺點：價高、不安全，需回流設備。,,如：不同濃度乙醇能最大

9、限度溶出的成分20％～30％　　　生物堿鹽、蒽醌及其苷40％～50％　　　強心苷、鞣質60％～70％　　　皂苷、黃酮苷80％～95％　　　游離生物堿、揮發(fā)油,,（3）親脂性的有機溶劑：這些溶劑的選擇性能強，用于親脂性成分的提取，如游離生物堿、苷元、揮發(fā)油等。 優(yōu)點：提取專屬性強，易回收濃縮。 缺點：價高、易燃、有毒，穿透性差；對設備要求高。,提取溶劑的選擇原則： （1）要對所提取成分溶解度大；對雜質

10、溶 解度小。 （2）要與所提取成分不起意外的化學變化。 （3）要廉價、易得、安全。,溶劑提取過程,提取過程：指溶劑進入藥材組織，溶解其中的化學成 分，并將其提出的過程。 通過擴散、滲透、細胞內外的濃度差，使細胞內的濃溶液不斷向外擴散，細胞外的溶劑不斷滲透進入細胞內，如此反復。,（三）常用的提取方法,,浸漬法,滲漉法,煎煮法,回流提取法,連續(xù)回流提取法

11、,1. 浸漬法：,常用溶劑：水、乙醇 儀器裝置：有蓋的容器 操作過程： 將藥材粗粉置容器中 加入適量的溶劑 常溫或加熱（40~80 ℃）浸泡（浸泡時應將容器蓋嚴，并經常攪拌振搖），一般浸泡3—5日或按規(guī)定時間傾取上清液過濾得提取液。（藥材可重復浸泡2-3次）。,,,藥材粗粉,,置于有蓋的容器中，,,加入適量溶劑（水或有機溶劑）,每次浸泡一日以上， 提取2-3次使有效成分大部分浸出,,,傾取上清液，過濾,藥

12、液,提取范圍： 適宜含淀粉、樹膠等成分較多的藥材以及含揮發(fā)性成分，或遇熱不穩(wěn)定易分解或被破壞成分的提取。提取優(yōu)缺點：操作簡便。缺點：提取時間長、溶劑用量大，提取效率不高， 水為溶劑易發(fā)霉、變質，必要時加適量防腐劑。,2. 滲漉法,常用溶劑：水，乙醇。儀器裝置：滲漉裝置提取范圍：適宜對熱不穩(wěn)定且易分解的成分的提取。提取優(yōu)點：由于有較大的濃度差，提取效率較高。 缺點：溶劑用

13、量大，操作較繁。,藥材粗粉,,加入適量溶劑，裝入滲漉筒內,,在滲漉筒上端不斷添加溶劑，在滲漉筒的上端不斷添加溶劑，使其滲過藥粉，溶出可溶性成分,,提取液,滲漉法（1）溶劑：水、乙醇（2）儀器裝置及操作：滲漉裝置（3）適于：成分易揮發(fā)或受熱不穩(wěn)定藥材。 不適于： 無組織結構的藥材：乳香、沒藥、兒茶等。（4）特點： 溶劑用量大，提取時間長，但提取效率較浸漬法高。,裝筒時注意：①先用脫脂棉墊底部防藥粉泄漏

14、②分次裝筒，層層壓平，約2/3容積③上部覆蓋濾紙或紗布加重物壓住防藥粉浮沖④開活塞加溶劑至流出，排除筒內空氣再關活塞，加溶劑至高出藥粉數cm,操作：藥材粉碎→潤濕→裝筒→排氣→浸漬→滲漉。,工業(yè)生產滲漉器示意圖：,3. 煎煮法,常用溶劑：水儀器裝置：砂鍋、鋁鍋等。操作范圍： 對含揮發(fā)性即遇熱不穩(wěn)定的成分的藥材不宜用此法。提取優(yōu)缺點： 本法簡便易行，提取效率比冷浸法高，但水溶性雜質多，易發(fā)霉。,步驟： 將中藥

15、飲片或粗粉置適當容器中，加水浸過藥面，直火加熱2~3次，每次煎煮的時間可根據藥材量而定。 注意：煎煮中要不斷攪拌。少量藥材可用砂鍋、搪瓷器具，忌用鐵鍋或鐵器。,工業(yè)上常用多功能提取罐：,多功能提取罐生產操作注意事項：a、多功能提取罐開車前應全面檢查電氣線路及控制系統是否正 常，為避免出渣門開啟時自重而產生的沖力使活塞桿受損， 控制箱中針形閥開度必須合適，應使出渣門緩緩平穩(wěn)打開。b、當設備帶壓操作或壓力沒

16、有恢復常壓之前，嚴禁開啟投料們 及出渣門。當關閉加料門時，必須是定位銷進入溝槽內。罐 內加料加液后必須檢查出渣門保險氣缸是否處于鎖定保險狀態(tài)。c、使用乙醇提取時，要采用真空操作，或經冷卻器后流入提取 罐內，不能采用水泵強制循環(huán)。d、通蒸汽進入夾套時，緩慢開啟蒸汽閥門，蒸汽壓力不能超過 2.0 Mpa，安裝時必須設有減壓閥、安全閥、壓力表。,4. 回流提取法,常用溶劑：有機溶劑。儀

17、器裝置：回流加熱裝置。提取范圍：不適用于對熱不穩(wěn)定及易分解的 成分。提取優(yōu)缺點：提取效率比冷浸法高。但裝置 較復雜。,操作過程：將藥材粗粉裝于園底燒瓶中 加入適量溶劑 水浴中加熱回流提取 1 h 過濾（殘渣重復提取兩次，合并提取液） 提取液。,,,,回流提取裝置圖

18、,常用溶劑：有機溶劑。儀器裝置：連續(xù)回流提取裝置提取范圍：不適于對熱不穩(wěn)定成分的提取。提取優(yōu)缺點：溶劑用量少，提取效率高。但 裝置設備要求高。,5. 連續(xù)回流提取法,操作過程： 將藥材置于鋁紙袋中，放入提取器內 連接裝置 水浴加熱回流提取適當時間 提取液。,,,,,提取器,,冷凝管,,虹吸管,,冷凝管,,提取器,,燒瓶,,電熱套,操作形式,,黃酮類成分提

19、取方法—溶劑法,,,溶劑法 關鍵 溶劑的選擇 選擇依據 黃酮類成分的存在狀態(tài)（游離、苷）及溶解性,,溶劑的溶解性能 提取方法（煎煮法、滲漉法、回流法等）的選擇,溶劑 提取原理 游離黃酮 黃酮苷 備 注,乙醇 溶解范圍廣

20、 + + （甲醇） 苷、苷元均可溶 （90~95%） ( 60%） 甲醇毒性大,沸水 多糖苷易于水 + 成本低、安全,水溶性雜質多,堿性水或

21、 稀氫氧化鈉溶出能力強,堿性乙醇 酚羥基的酸性 + + 石灰水除雜質效果好,,,,,,,,堿溶酸沉法注意：,（1）堿性不宜過強，尤其在加熱時易破壞黃酮。（2）酸沉淀時，酸性不宜過強，否則，黃酮形 成烊鹽而損失。（3）用Ca(OH)2

22、,可沉淀雜質，有利于純化。,,稀NaOH：浸出能力強，雜質多，酸化后需迅速過濾除雜石灰水：浸出能力中，能形成鈣鹽沉淀除去鞣質、羧基多 糖等雜質（如：蘆丁的提?。?%NaOH/EtOH：浸出效果好，但收率降低濃堿：破壞母核。具鄰二酚羥基加硼酸保護,課堂活動,播放錄像 回流法