GDNF通過N-cadherin-Src提高C6細(xì)胞內(nèi)β-catenin磷酸化水平的研究.pdf

1、目的：有研究表明，膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)在膠質(zhì)瘤中高表達(dá)，并且與膠質(zhì)瘤的惡性程度成正相關(guān)，但是GDNF對(duì)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制尚不清楚；另外，有研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)型鈣粘蛋白(N－cadherin，N-cad)能夠作為GDNF的功能性受體，我們認(rèn)為GDNF能夠與N-cadherin與相互作用，激活N-Cadherin/Src信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞內(nèi)β-catenin磷酸化水平的提高及核轉(zhuǎn)位，從而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)研

2、究目的主要是為證明上述假說，進(jìn)一步探討這一信號(hào)通路的的具體可能機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的C6細(xì)胞為研究對(duì)象，使用外源性的GDNF作用30min后，提取細(xì)胞膜及細(xì)胞漿蛋白后，應(yīng)用免疫共沉淀方法檢測(cè)細(xì)胞膜及細(xì)胞漿中β-catenin的磷酸化水平，以及Src家族接頭蛋白與上述兩者的共結(jié)合情況。
　　結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞在外源性GDNF作用下，β-Catenin與細(xì)胞膜上的跨膜蛋白N-Cadherin能

3、夠特異性的結(jié)合增多，并且能夠使胞膜內(nèi)表面β-catenin在Ser33位點(diǎn)發(fā)生磷酸化。Phospho-β-catenin(Ser33)從N-cad/β-catenin復(fù)合體上分離，經(jīng)胞漿向胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位。免疫印跡和免疫組化進(jìn)一步證實(shí)，大鼠C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿和胞核內(nèi)Phospho-β-catenin(Ser33)蛋白表達(dá)明顯升高。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)，非受體型蛋白激酶Src與N-cad在胞膜上的結(jié)合增多，表明GDNF有可能具有招募Src蛋白結(jié)合N-