17p13.3高雜合缺失區(qū)所含的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的候選基因c63r的功能及其蛋白伴侶的研究

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文17p13.3高雜合缺失區(qū)所含的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的候選基因C63R的功能及其蛋白伴侶的研究姓名：藍(lán)斐申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：朱景德2002.5.131 7 p 1 3 3r 膏雜合缺失區(qū)所禽的細(xì)胞生K 抑制的f | 睫選坫㈨C 6 3 R 的功能及兒出[ J 伴f H 的研究A b s t r a c tC 6 3 R ( A c c e s s i o nN o ．：A F 2 4 6 2 8 7

2、) w a si d e n t i f i e d a n dc l o n e db ys c r e e n i n g an o r m a lh u m a n l i v e rc D N A l i b r a r yw i t hP A C 5 7 9 D N A ，t h e1 0 9k bi n s e r to f w h i c hi sl o c a t e d a t t h e h e p a t o m

3、a a s s o c i a t e d L O H h o t —s p o t w i t h i n t h e h u m a nc h r o m o s o m e1 7 p 1 3 ．3 ．I th a s 1 8 e x o n sa n ds p a n sa n a p p r o x i m a t e l y3 0 0k br e g i o n ．T h eC 6 3 Rm R N A i s 2 ，0 7

4、8 n u c l e o t i d e i n l e n g t h ，a n dh a s a2 0 2 2b po p e nr e a d i n gf r a m et h a te n c o d e sa 6 7 3a m i n o a c i dl o n g p r o t e i n ．I n a d d i t i o n t o t h ep o s i t i o n i n gc l o n i n g

5、 ，t h e f u n c t i o n a l s c r e e n i n go ft h e c D N Al i b r a r y f o r t h e g e n ea f f e c t i n gt h e c e l l g r o w t hi n a c o l o n yf o r m a t i o na s s a yu s i n gah e p a t o m ac e l ll i n e ，

6、S M M C 一7 7 2 1 ，h a sl e a dt h ei d e n t i f i c a t i o no ft h eC 6 3 R g e n ea s ap o t e n tc e l l —g r o w t h i n h i b i t o r y g e n e ．T h ee f f o r t s h a v e b e e nm a d et o i d e n t i f y t h ec r

7、 u c i a lr e g i o nw i t h i n ， f o rt h i sf u n c t i o nb yc o m p a r i n gt h ep o t e n c yo fas e to ft h eC 6 3 Rc l o n e st h a tc o n t a i ni t s v a r i o u sp a r t s ．I th a sb e e nf o u n d t h a t ar

8、 e g i o nf r o m1 5 9 a at o 3 0 7 a ai s a b s o l u t e l ye s s e n t i a l t o C 6 3 R ’sc a p a c i t yo fr e p r e s s i n g7 7 2 1 c e l lg r o w t h ．C o i n c i d e n t l y ，t h i sr e g i o ni s e n r i c h e

9、dw i t ht h es u b s t r a t es e q u e n c e sf o r t h ef o l l o w i n g p r o t e i nk i n a s e s ：p 8 5S H 2 a n dC a l m o d u l i n d e p e n d e n t K i n a s e 2 ( C h a p t e r I ) ．P r e d i c t e db yt h eb

10、i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i so ft h eC 6 3 R g e n ew i t hr e g a r d i n gt o i t se v o l u t i o n a lc o n s e r v a t i o n ，t h e r es h o u l db et w oa d d i t i o n a lv a r i a n t st h a tm a y r e

11、 s u l tf r o ma l t e r n a t i v es p l i c i n go ft h ep r e v i o u su n k n o w nt r a n s c r i p t sf r o mt h e r e g i o ne x t e n d i n gf r o mt h e3 ’e n do fe x o n1 8 ，a n dh a v i n g4a d d i t i o n a l

12、p r e d i c t e de x o n s ．O u rr e s u l t sf r o mt h eR T —P C Rh a v ec o n f i r m e d t h ec o r r e c t n e s so ft h i sp r e d i c t i o nb yi d e n t i f y i n gt h e s et w os p l i c i n gv a r i a n t s ( f

13、 o rC 6 3 R v 3 t h eN o ．1 9e x o n ，f o rC 6 3 R v 4 t h eN o ．1 9 - 2 2e x o n s ) ( C h a p t e r1 )B yt h ey e a s tt w o —h y b r i ds c r e e n i n g ，t h ea t t e m p t sh a v eb e e nm a d e t oi d e n t i f y t

14、 h ei n t e r a c t i o n p a r t n e r s f o r t h e C 6 3 R g e n e ，w h i c h r e v e a l e d t w o c a n d i d a t e s ：t h eo n c o —t r a n s c r i p t i o n f a c t o r L M 0 2 a n da n a n t i —a p o p t o s i sp

15、 r o t e i n ，B c l 一2 ．( S e c t i o n I ，C h a p t e rI I ) U n f o r t u n a t e l y ，t h e s ei n t e r a c t i o n sh a v en o tb e e nv e r i f i e db yt h e ／nV i t r oP u l l - D o w na s s a y ( S e c t i o n I

16、I ，C h a p t e rI I ) ．W e h a v e a l s os e a r c h e d f o rt h ei n t e r a c t i n gp a r t n e r so ft h ey e a s tC 6 3 R g e n e ，b ya d o p t i n gt h et a n d e ma f f i n i t yp u r i f i c a t i o n ( T A P )

17、m e t h o di nt h ey e a s ts y s t e m ．H o w e v e r ，o u rc u r r e n tt r i e st ot a gt h ee n d o g e n o u sy e a s tC 6 3 R h o m o l o g u e b yt h eh o m o l o g o u s r e c o m b i n a t i o n h a v e n o t b

18、e e n s u c c e s s f u l f S e c I i o nI l l ，C h a p t e r i i ) ．．T h e r e s u l t so b t a i n e da n dt h et e c h n o l o g i e se s t a b l i s h e dt h a tw e r ed e s c r i b e di n t h e蔓旦大學(xué)匱學(xué)院 上海市腫瘤研克所 碩士論文一