肝癌特異性染色體17p13.3雜合性缺失區(qū)中新基因hc63r轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制

1、V 0 5 3 3 6 8上後旦大擎碩士學(xué)位論文學(xué)校代啡1 0 2 4 6學(xué) 垮：0 2 2 1 1 3 2 0肝癌特異性染色體1 7 p 1 3 ．3 雜合性缺失區(qū)中新基因H C 6 3 R 轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制院 系：專 業(yè)：姓 名：指導(dǎo)教師：完成日期：上海市腫瘤研究所病原生物學(xué)王鵬朱景德研究員2 0 0 5 年5 月1 8 日! ：! ! 里! ! 竺! ! ! ! ! ! 堡塵! ! ! 型￡壘鎏￡! ! ! 壘墮塑! ! !A b s

2、 t r a c tH C 6 3 R 艙c c e s s i o nN o ．：A F 2 4 6 2 8 7 ) w a si d e n t i f i e d a n dc l o n e db ys c r e e n i n gan o r m a lh u m a n l i v e rc D N A l i b r a r y w i t hP A C 5 7 9D N 九t h e 1 0 9k bi n s e r

3、 t o fw h i c hi sl o c a t e da t t h e h e p a t o m a a s s o c i a t e d L O H h o t —s p o t w i t h i n t h e h u m a nc h r o m o s o m e1 7 p 1 3 ．3 ．I t c o n t a i n s 1 8 e x o n sa n ds p a n s a n a p p r o

4、x i m a t e l y3 0 0k b r e g i o n ．T h eH C 6 3 R m R N A i s2 ，0 7 8 n u c l e o t i d e si n l e n g t h ，a n dh a sa2 0 2 2b po p e nr e a d i n g f r a m et h a te n c o d e s a6 7 3 a m i n o a c i dp r o t e i n

5、．I no u r p r e v i o u s w o r k s ，t h ef u n c t i o n a ls c r e e n i n go ft h ec D N A l i b r a r y f o rt h eg e n e a f f e c t i n gt h ec e l lg r o w t hi n ac o l o n yf o r m a t i o na s s a yu s i n ga h

6、 e p a t o m ac e l l l i n e ，S M M C 一7 7 2 1 ，h a sl e a dt h e i d e n t i f i c a t i o n o f t h eH C 6 3 Rg e n ea sap o t e n t c e l l —g r o w t h i n h i b i t o r yg e n e ．T o u n v e i l t h e m o l e c u l

7、 a rm e c h a n i s m su n d e r l y i n g t r a n s c r i p t i o nc o n t r o l so f t h eH C 6 3 Rg e n e ，w e u s e d a l i s t o f m o l e c u l a rg e n e t i c a p p r o a c h e s b e l o w ：1 ，U s i n gb i o i n

8、f o r m a t i c sa n a l y s i st op r e d i c tt h ep o t e n t i a lt r a n s c r i p t i o n a lf a c t o r si n v o l v e di nt h et r a n s c r i p t i o n a l r e g u l a t i o n o f t h e H C 6 3 Rg e n e ；2 ，U s

9、i n g a t r a n s i e n t t r a n s f e c t i o n ／D u a l ·L u c i f e r a s e r e p o r t e r a s s a y s y s t e m t o d e t e r m i n e t h e i m p a c t o f t h e p o t e n t i a lt r a n s c r i p t i o n a lf

10、 a c t o r s o nt h e H C 6 3 R g e n ep r o m o t e r ；3 ，U s i n ge l e c t r o p h o r e s i sm o b i l i t ys h i f ta s s a y ( E M S A ) a n d s u p e r s h i f t t od e t e r m i n et h ep r o t e i n sb i n d i n

11、 gs p e c i f i c l yt o t h ec i s - e l e m e n t s w i t h i n t h e k e y r e g i o n ( + 1 葉4 0 b p ) w i t h s i g n i f i c a n t f u n c t i o n a lc o n s e q u e n c e．W e g o t t h e f o l l o w i n g r e s u

12、l t s ：／，b i o i n f o r m a t i c s a n a l y s i s i n d i c t e d t h a t t h e+ 1 - + 4 0 b p r e g i o no ft h eH C 6 3 R g e n ep r o m o t e rc o n t a i n e dt h eo v e r l a p p e d b i n d i n gs i t e sf o r t

13、 h eE T S f a m i l y , N F - K Bf a m i l ya n dp 5 3 p r o t e i n ；2 ，C o —t r a n s f e c t i o ns t u d i e sw i t ht h ee x o g e n o u st r a n s c r i p t i o n a l f a c t o r sE T S - 1 ，E T S - 2 ，E l f - 1 ，N

14、 E R F 2 ，p 5 0 ，p 6 5 a n dp 5 3 ，r e s p e c t i v e l y ，r e v e a l e dt h ed e t e c t a b l eu p r e g u l a t i o ne f f e c t so fE T S - 1 ，E T S - 2a n dE l f 一1o nt h em i n i m a l p r o m o t e r o ft h eH C

15、 6 3 R g e n e ，a n dd o w n r e g u l a t i o n e f f e c to fP 5 3 ，w h i l ep 5 0 a n dp 6 5 h a d n os i g n i f i c a n te f f e c to nt h em i n i m a l p r o m o t e ro ft h eH C 6 3 R g e n e ．3 ，t h e p r e l i

16、m i n a r y c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e p r o t e i n - D N A i n t e r a c t i o n s o n t h e D N Af r a g m e n t s ( + l - + 4 0 b p ) s u g g e s t e d t h a t E T S 一2 a m o n gt h r e e c a t e g o r

17、 y t r a n s c r i p t i o n a lf a c t o rf a m i l yb o u n d d i r e c t l yt ot h em i n i m a l p r o m o t e r o ft h eH C 6 3 R g e n e ．K e y w o r d s ：T r a n s c r i p t i o n a l R e g u l a t i o n ；T r a n

18、s c r i p t i o n a l F a c t o r ；T r a n s i e n tT r a n s f e c t i o n ／D u a l —L u c i f e r a s eR e p o r t e rA s s a yS y s t e m ；C o —t r a n s f e c t i o n ；E l e c t r o p h o r e t i cM o b i l i t yS h