app轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中4.1蛋白的表達及意義

1、授 予單位代 碼學號或 申請 號1 0 4 5 92 0 0 6 1 2 0 2 61 0 0 1 0 4 0 0 2級 公 開文學 論 大 位 州 學 鄭 士碩(科 學 學位 )A P P 轉(zhuǎn) 基 因小 鼠腦 組 織 中 4.1 蛋 白的表 達 及 意 義院 系 名 稱 : 鄭 州 大 學基 礎(chǔ) 醫(yī)學 院學 科 門 類 : 醫(yī)學專 業(yè) 名 稱 : 病 理 學 與病 理 生 理 學作 者 姓 名 : 李 岳 美導(dǎo) 師 姓 名 、職 稱

2、: 郡 文 海 教 授2009 年 05 月 25 日鄭州 大 學 2009 屆碩 士學位 論 文 中文摘 要生 成 過 量 聚 集 態(tài) 具有 神 經(jīng) 毒 性 的 A p 。有 研 究 表 明 A D 患者 腦 內(nèi) 4 .1 蛋 白與 N FTs共 定位 ，并 可 與 妙 P 的竣 基 端 序 列 (Y 687KF F E Q M QN )相 結(jié) 合 ，這 一 區(qū)域 非 常 接近 p一 分 泌 酶 的水 解 位 (M et67 1一 s

3、P672 ) 及 A P P 錨 定 的必 需 片 段 (爾 653 一 664 )，而 p一 分 泌 酶 被 認 為 是 A p 產(chǎn) 生 的 限速 酶 ，因此 ，4 .1 蛋 白很 可 能影 響 A PP 的代 謝及 A p 的生 成 ，A D 患 者 腦 內(nèi)有 可 能存 在 4 .1 家 族 基 因突 變 或 蛋 白表 達 異 常 。本 實 驗 研 究 A P P 轉(zhuǎn) 基 因 小 鼠腦 組 織 中 4.1 家 族 成 員 在 細 胞

4、 定位 、蛋 白及m R N A 水平 的表 達 特 性 ， 探 索 A PP 蛋 白及 其 代 謝 物 A p 與 4.1 蛋 白家 族 之 間 的關(guān)系 ，進 一 步探 討 A D 的發(fā) 病 機 制 ，為 尋 找 更 有 效 防 治 A D 和 其 他 A p 毒 性 相 關(guān) 疾病 的方 法 奠 定 理 論 依 據(jù) 。方 法采用 Pc R 技術(shù)對提取 的新生 A PP 轉(zhuǎn)基 因(人 A PP695/770)/ J“ 鼠鼠尾 D N A

5、 進行 A P P 基 因 的檢 測 ，根 據(jù) A P P 轉(zhuǎn) 基 因 鼠是 否 攜 帶 A P P 基 因 ，將 其 分 為 A P P( + )組 和 A P P( 一 )組 。取 12 月 齡 A P P 轉(zhuǎn) 基 因 小 鼠腦 組 織 ，采 用 免 疫 組 織 化 學 染 色 和剛 果 紅 染 色 分 別 對 A P P 蛋 白 、 A p 多 膚 及 sPs 檢 測 。 采 用 免 疫 組 織 化 學 、We st em 一 b

6、lot 及 RT - P C R 等 技 術(shù) ， 分 別 從 細 胞 定 位 、 蛋 白及 m RN A 水 平 檢 測 妙 P( 十)組 和 A PP( 一 )組 小 鼠的海 馬 、皮 層 及 小 腦 神 經(jīng) 細 胞 中 4.1 蛋 白家 族 成 員 的表 達 ，采 用 獨 立 樣 本 t 檢 驗 統(tǒng) 計 學 方 法 分 析 各 腦 區(qū) 兩 組 之 間 的差 異 ，尸< 0. 05 表 示 有 統(tǒng)計 學 意 義 。結(jié) 果1. 對

7、 新 生 A P P 轉(zhuǎn) 基 因 小 鼠的 A P PD N A 進 行 P C R 檢 測 ，將 A P PD N A 高 表達 組 稱 為 A P P 陽性 鼠 ，A P PD N A 無 表 達 組 稱 為 A P P 陰性 鼠 。2. 免 疫 組織 化 學 染 色 結(jié)果 顯 示 ，12 月齡 A P P 轉(zhuǎn) 基 因 陽性 小 鼠海 馬和 皮 層 神經(jīng) 細 胞 胞 漿 高表 達 A P P 蛋 白，神 經(jīng) 細 胞 胞 漿及 細 胞

8、 間質(zhì) 高表 達 A p ，而 陰性 小 鼠無 表 達 ; 剛 果 紅 染 色 結(jié) 果 顯 示 A P P 轉(zhuǎn) 基 因 陽性 小 鼠皮 層 間質(zhì) 及 海 馬 齒 狀 回 內(nèi)可見 大 小 不 一 的 淡 紅 色 著 色 團塊 狀 同質(zhì) 性 無 定 形 物 質(zhì) ，而 陰 性 小 鼠未 見 。3. 免 疫 組 織 化 學 法 對 A P P( ‘ )組 和 AP P( 一 )組 小 鼠腦 切 片 染 色 ，D A B 染 色結(jié) 果 : 顯 示