mapksap1信號通路在二氧化硅誘導(dǎo)raw264.7細胞tnfα、tgfβ1表達中機制的研究

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文MAPKs/AP-1信號通路在二氧化硅誘導(dǎo)RAW264.7細胞TNF-α、TGF-β1表達中機制的研究姓名：李翔申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：文繼舫20071001博- J ：學(xué)位論文 摘要致下游核轉(zhuǎn)錄因子如N F ．K B 、A P 一1 、E r g ．1 等的活化，從而引起下游因子表達的改變。已有文獻報道S i 0 2 能誘導(dǎo)肺纖維化效應(yīng)細胞的M A P K 和A P ．1 的活化，因此我

2、們假設(shè)M A P K s ／A P ．1 信號通路在S i 0 2誘導(dǎo)R A W 2 6 4 ．7 細胞T N F ．0 【和T G F ．1 3 1 表達中發(fā)揮作用，此研究尚未見文獻報道。目的：探討M A P K s ／A P ．1 信號傳導(dǎo)通路在S i 0 2 誘導(dǎo)R A W 2 6 4 ．7細胞T N F ．I D c 和T G F ．p 1 表達中的作用。方法：小鼠巨噬細胞( R A W 2 6 4 ．7 ) 培養(yǎng)后用1 0 0

3、 } t g ／m l 的S i 0 2 刺激至預(yù)定的時間。我4 1 “ J N 用w e s t e r n b l o t t i n g 檢測p - p 3 8 激酶，p - E r k ，p - J N K 以及核蛋白中A P ．1 ( c - j u n ／c —l o s ) 表達；不同濃度的S B 2 0 3 5 8 0和P D 9 8 0 5 9 預(yù)處理細胞分別阻斷p 3 8 激酶和E r k 活性，不同濃度的C u r

4、 c u m i n ( A P ．1 的阻斷劑) 預(yù)孵育細胞來阻斷A P ．1 活性，C ．J u n 顯性負性突變體( T A M 6 7 ) 被轉(zhuǎn)染進細胞阻斷A P ．1 的活性，A P ．1 D N A． 結(jié)合活性用E M S A 檢測；T N F 一0 【和T G F ．1 3 1 的m R N A 和蛋白表達用R T - P C R 和E L I S A 檢測。結(jié)果：( 1 ) 在R A W 2 6 4 ．7 細胞中，S i

5、 0 2 誘導(dǎo)磷酸化的p 3 8 激酶和E r k 活性增高，均于1 2 0 m i n 到達高峰，但磷酸化的J N K 沒有表達。( 2 ) S B 2 0 3 5 8 0 和P D 9 8 0 5 9 能分別阻斷p - p 3 8 激酶和p - E r k 的活性，并呈劑量依賴性，5 0 l a M P D 9 8 0 5 9 能明顯抑制S i 0 2 誘導(dǎo)的T N F —Q 和T G F ．p 1 的表達，但2 0 uM S B