pm2.5對(duì)角膜上皮細(xì)胞的dna損傷和細(xì)胞移行能力影響及其機(jī)制研究

1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文 題名（中英對(duì)照） ： PM2.5 對(duì)角膜上皮細(xì)胞的 DNA 損傷和細(xì)胞移行能力影響及其機(jī)制研究 Assessment of DNA damage, cell senescence and migration in corneal epithelial cells exposed to airborne particulate matter(PM2.5) 作者姓名：高梓勛 指導(dǎo)教師姓名 潘紅衛(wèi) 及學(xué)位、職

2、稱(chēng)： 博士 副教授 學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：細(xì)胞生物學(xué) 再生醫(yī)學(xué) 學(xué)位類(lèi)型：學(xué)術(shù)學(xué)位 術(shù)學(xué)位 論文提交日期： 論文答辯日期：2016 年 5 月 30 日 答辯委員會(huì)主席： 論文評(píng)閱人： 學(xué)位授予單位和日期： I PM2.5 對(duì)角膜上皮細(xì)胞的 角膜上皮細(xì)胞的 DNA 損傷 損傷和細(xì)胞移行能力 細(xì)胞移行能力影響 影響及其機(jī)制 機(jī)制研究 研究 中文 中文摘要 摘要 PM2.5 指大氣環(huán)境中空氣動(dòng)力學(xué)當(dāng)量直徑小于等于 2.5 微米的顆粒物，主要來(lái)源于

3、自然界物質(zhì)變化（如灰塵、物質(zhì)氧化、火山噴發(fā)等）和人類(lèi)活動(dòng)（如煤炭、木材、汽油、柴油和其它化石能源的燃燒）這兩大途徑[1]。PM2.5 由于粒徑小，能較長(zhǎng)時(shí)間懸浮于空氣中，且活性強(qiáng)（容易粘附如重金屬、微生物等有毒、有害物質(zhì)） ，因而對(duì)人體健康影響很大。最近幾十年，隨著人類(lèi)工業(yè)發(fā)展，因工廠(chǎng)燃煤鍋爐廢氣、 機(jī)動(dòng)車(chē)尾氣等途徑排放到大氣環(huán)境中的顆粒污染物增多， 罹患各種角膜疾病的人數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)， 其病情也隨之加劇。 本研究通過(guò)收集大氣中的PM2.

4、5 顆粒，以人角膜上皮細(xì)胞株（HCEC）為主要實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，再以原代牛角膜上皮?xì)胞（BCEC）為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探?PM2.5 短期暴露對(duì)角膜上皮細(xì)胞的DNA 氧化損傷影響、細(xì)胞移行能力影響及其中的機(jī)制，為角膜病的預(yù)防、治療和術(shù)后恢復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分 第一部分 PM2.5 對(duì)角膜上皮細(xì)胞的 角膜上皮細(xì)胞的 DNA 氧化 氧化損傷 損傷及其機(jī)制探究 及其機(jī)制探究 目的 目的：評(píng)估空氣中的微小顆粒 PM2.5 對(duì)角膜上皮細(xì)胞的遺傳毒性

5、和探究在此過(guò)程中細(xì)胞形成 ROS 的作用。 方法 方法：在廣州挑選霧霾嚴(yán)重時(shí)期采集大氣中的微小顆粒，再以人角膜上皮細(xì)胞（HCEC）置于含有此微粒的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 24 小時(shí)后，通過(guò) CCK-8 測(cè)試和 LDH釋放檢驗(yàn)來(lái)測(cè)定細(xì)胞活力與毒性強(qiáng)度；通過(guò)堿性彗星實(shí)驗(yàn)和磷酸化組蛋白變體H2AX（γH2AX）免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè) HCEC 的 DNA 片段斷裂以及 DNA修復(fù)情況；通過(guò)特異性免疫探針 CM-H2DCFDA 來(lái)探究 ROS 的產(chǎn)生；細(xì)