亞洲棉gossypiumarboreuml.石系亞1號(hào)耐旱相關(guān)基因的克隆

1、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文亞洲棉（Gossypium arboreum L.）石系亞1號(hào)耐旱相關(guān)基因的克隆姓名：張雪妍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：李付廣20070601A b s t r a c tD m u g h t i s o u e o fm o s ti m p o f f a n t f a c t o r sw h i c he f f e c tt h ee x p r e s s i o no

2、 fg Q c dt r a i t so f p l a n t si na d v e r s ec i r c u m s t a n c e l ⅡC h i n a ．t h e m a j o n t yo fr e g i o n s w h e r ec 1 3 U o nw c ∞g r o w nm s h o r to fw a t e r , ∞．i ti s n e c e s s a r yc U e s t

3、 a b l l s has i m p l e , f a s ta n d e a s yo p e r a t e dm e t h o d 舒e v a l u a t et h e & o u S t t o l e F a n c eo fc o t t o n b e c a u s ei t i s e x t r e m e l y u r g e n t i n e o l I o u b r e e d i

4、 n g ．T h i se x p c r i m o u tw a sc o n d u c t e ds e p a r a t e l y w i t h 8u p l o a de n t t o n s ．2P i m aC O l t o f l s a n d3A s i a nc o ∞∞a st h e m a m d s i t o e s l a b l i s h t h e P E Ge v a l u a

5、t i o n t h e f a s t c o t t o n s e e d l i n g d r o u g h tr e s i s t a n c ee v a l u a t i o n s y s t o n x T h e3 ～6 - 1 e n fs t a g e s e e d l i n g sw i t h 1 7 ％( w P oP 】美撕0 0 0 t r e a t m e n t , a f t e

6、 r1 2 ．t h er e s u l t s s u g g e s t e d t h a t o s m o t i ca d j u s t m e n l s o f P E Gc o u l d b eu s e d t o e v a l u a t e s i m p l y t h e d r o u g h tt o l e r a n c e o f g o t t o n ．t h o u g h t i m

7、 c o t t o na f t e r P E G —t r e a t o dd 胡砌s l i g h t l y i np h y s i o l o g y w i t h c o t t o n a f t e rd r o u g h t - t r e a t e d - - f i n em e t h o d w i t h o s n l o l l ea d j u s t m e n t so fP E G

8、i s s i m p l e , f a s ta n de a s yq * r a l e d ，c o u l db eu s e d t oe v a l u a t et h ed r o u g h tt o l e r a n c eo fc o R o n h p r i n c i p l e ．a(chǎn) n d w i l le s t a b l i s hf o u n d a t i o n sf o rt h e

9、s 佃d y 0 4 1P A t t id r n n g h t - t o l t e c m o l e c u l a r b i o l o g y ．h d r o u g h t r e s i s t a n c e l e v e l t e s t , t h e e v a l u a t i o n r e s u l t o f A s i a n e o f f ／2 1 1 g h i x i y a I

10、 i s i n t h ed r o u g h t - r e s i s t a n tl e v e l ( s u r v i v a tr a t e > 8 0 ％1 ．I n1 ～5h o u r sb yi n d u c i n gt h ed r o u e ．h tr e s i s t a n c eg o n e t h ee x p r e s s i o nw i t h1 7 ％6 V N ) P

11、 E G 6 0 0 0 t r e a t m e n t ，w es e p a r a t e st h r e ed r o u g h tr e s i s t a n tg e n e s ’c o n s e r v e df r a g m e n t , w h i c h i s 彤C S 、c y t o s d i i e C u ／Z n - S O D a n d e h l o i n p l a s t

12、C u f Z n - S O D h y R T - P C I L F a r t h e r m v r e ,w og o tf u l l - l a n g t hs e q u e n c e o ft w o g e n e sb y R A C E a n ds u b m i t t e dt oC , o n e B a n k ，u a l l l e dG a c y t s o d a n dG a e h

13、I s o d ．I n o r d e rt o s t u d y t h e e x p m s s i v eq u a n t i t y i n d r o u g h tp r e s s , a f t e r t h eb l a s ta n d a n a l y s i s t o t h es Ⅸl u e n c e s o f n u c l e i ca c i da n d p r o t e i n

14、．3 ～6 l e a v e ss t a g es e e d l i n g o f S h i x i y a l w i t h1 7 ％( W ／V ) P E G 6 0 0 0t r e a t m e n tf o r0 ，I ，2 。3 ，4 ，5h w m g a t h e r e d ．T h ee D N A o ft h e mw e l to b t a i n e d e n d W e r eu s

15、e df o rs c m i - q u a n r i t a t i v eR T - P C R ，i n n e rr e f e r e _ a c o dp ^ m e f sW e l “ ed e s i g n e df r o m t h e U n Q 7 p a r t i a l s e q u e n c e( 1 9 8 b p ) ．T h er e s u l 擔(dān)∞嘲n t h a t ：e x p

16、r e s s i v eq u a n t i t y 橫那c sr a i s e d e n n g m n f l y ；e x p r e s s i v eq u a n t i t y o fG a c h 正竄o dk e p ts l e a d yw i t ha l m o s t n D i l cv h a n g e s ；b u tG a c g , t a o dw a n td o w na tm 咄a

17、 n d t h e n ，a f a r 2h o u r s ∞刪u p b y h o u r s ，T h ed y n a m i c d i v e r s i f i c a t i o no f G a c h l s o d ' se x p r e s s i v eq u a n t i t yi s a c c o r d a n lt o t h e a c t i v i t y c h a n g

18、e s o f S O D e n z y m ea f t e r t h eg a l l l e1 7 ％( W ／V ) P E G 6 0 0 0 R ' e n 咖t ·T h ep l a n tt r a n s f o r m a t i o n v 。c c o 略o ft h uG a c y u o d g e n e 、Ⅳe 陀b I l m ——p B I S O Da n dp B I R

19、 D S O D ，w h i c h w e f e p r o m o t e d b y 3 5 s a n dr d 2 9 A p r o m o t e r ．T h er e s u l t s h a v e b e e n t e 出f i 。d b y t w oe n z y m e c u t t i n ga n dP C R a m p l i f i c a t i o n ．T h e r i g h t

20、c l o u e sW e r e t m a s f e t r e di nt o A g r o b a c t e r i u mt o m e f a c i a n sL B A 4 4 0 4 f o rt h e s u c e e d e n t p l a n t t r a n s l a t i o n t o v a l i o a t e t h e 如n o t i o n o f G a c y t s