兼性胞內(nèi)寄生菌hlk139;t對人宿主細(xì)胞的感染和持續(xù)性寄生的研究

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文兼性胞內(nèi)寄生菌HLK1對人宿主細(xì)胞的感染和持續(xù)性寄生的研究姓名：張昆申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：胡汛20060401浙江大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文H L K l 7 菌株并對其進(jìn)行了系統(tǒng)鑒定。方法： K 5 6 2 細(xì)胞涂哥倫比亞瓊脂基礎(chǔ)血平板( 5 ％綿羊血) ，分離獲得H L K l 7 菌株，用透射和掃描電鏡觀察H L K l o 的形態(tài)特征，A P I 一2 0 E 試條進(jìn)行生理生化特性

2、鑒定，用A T B 藥敏試條檢測H L K l 7 的藥敏，m ，L c 法分析H L K l l 菌株的全基因組D N A 的( G + c ) m 0 1 ％，克隆并測序1 6 S r R N A 和g ”B 基因，用M E G A 2 軟件對H L K l T 進(jìn)行系統(tǒng)分類。結(jié)果：H L K l l 為革蘭氏陰性桿菌，長0 ．5 —2 u m ，寬O ．3 —0 ，5 u m ，無孢子形成，能運(yùn)動，極性單鞭毛。無發(fā)酵能力，需氧，氧

3、化酶和過氧化氫酶陽性?；蚪M( G+ C ) m 0 1 ％含量為7 1 ．2 ±O ．2 m 0 1 ％。1 6 S r R N A 序列與肋e ，u 0 D 幻c f 盯』刪屬的P ，f 池扣M P F a i l 3 菌株的1 6 sr R N A 序列同源性為9 8 ％，g y r B 基因序列的同源性為8 9 ％。結(jié)論：成功地從人紅白血病K 5 6 2 細(xì)胞中分離獲得H L K l l 菌株；H l 。K 1 1 為

4、a —P r o t e o b a c t e r i a 綱P ^ g 砂脅6 口c 耙r m 用屬的一個(gè)新菌種，命名為P ^ 朗y f 0 6 d c f e r m Ⅲz “c f H e “m ．s p ．n o v ，H L K l T 0 從H L K l l 的人宿主細(xì)胞來源以及a —P r o t e o b a c t e r i a細(xì)菌屬性顯示，H L K l l 與人類存在某種密切的關(guān)系。第二部分：H L K l

5、 1 對人宿主細(xì)胞的侵襲和建立胞內(nèi)寄生的研究目的：胞內(nèi)寄生菌對宿主細(xì)胞的侵襲方式主要有“拉鏈?zhǔn)健焙汀坝|發(fā)式”兩種，并能主動劫持宿主細(xì)胞的功能建立胞內(nèi)寄生環(huán)境。從H L K l 7 的K 5 6 2 細(xì)胞來源以及菌種鑒定結(jié)果顯示，H L K l 1 具有潛在的人宿主細(xì)胞胞內(nèi)寄生性。本研究探討了尸脅坦∥0 6 日c f e ，f “腳z “c f ”B “mH L K l 1 對不同來源的人宿主細(xì)胞s w 4 8 0 、L 0 2 和J u

6、 r k a t 細(xì)胞的侵襲和胞內(nèi)寄生的機(jī)理。方法：掃描和透射電子顯微鏡檢測H L K l ’。侵襲宿主細(xì)胞的方式，以及胞內(nèi)寄生方式；激光共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞骨架蛋白對H L K l 7 侵襲和胞內(nèi)運(yùn)動能力的影響；細(xì)胞免疫化學(xué)和c F u 計(jì)數(shù)檢測H L K l 7 侵入s w 4 8 0 和J u r k a t 細(xì)胞的時(shí)間和濃度關(guān)系；H L K l l 基因組測序由北京華大基因研究中心完成；H L K l ’基因組的生物信息學(xué)分析，