采后番茄寄生菌的分離、鑒定及E-2-己烯醛的抑菌機(jī)理研究.pdf

1、本研究從采后腐爛番茄表面分離、純化獲得番茄的寄生菌，并對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定和生理生化特性的研究。利用GC-MS技術(shù)分析番茄不同時(shí)期葉片中揮發(fā)性物質(zhì)的主要成分，并測(cè)定了番茄葉片揮發(fā)性物質(zhì)合成途徑的關(guān)鍵性酶脂肪氧合酶（LOX），苯丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（PAL）的酶活。GC-MS分析得知，揮發(fā)性物質(zhì)中的主要成分中有E-2-己烯醛，利用其對(duì)番茄寄生菌進(jìn)行抑菌研究，并通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)探討可能的抑菌機(jī)理。最后，研究E-2-己烯醛對(duì)儲(chǔ)存期番茄感染病菌的抑制情

2、況及番茄品質(zhì)的影響。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴從成熟腐爛的番茄表面分離、純化獲得一株寄生菌：圓弧青霉。利用掃描電鏡對(duì)其進(jìn)行形態(tài)特征觀(guān)察、生理生化特性分析。最后，提取其rDNA，根據(jù)保守序列ITS設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,所得產(chǎn)物送上海生工測(cè)序，序列經(jīng)NCBI序列比對(duì)分析，得知其為圓弧青霉。選用其作為研究材料，根據(jù)生理生化特性分析，得知其最適生長(zhǎng)溫度為25℃，pH值為5時(shí)，菌落長(zhǎng)勢(shì)旺盛，孢子的致死溫度為70℃。⑵通過(guò)頂空固相微萃取

3、法收集品種“A57”番茄營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期的葉片揮發(fā)性物質(zhì)，并通過(guò)GC和GC-MS技術(shù)對(duì)其揮發(fā)性物質(zhì)組分進(jìn)行分析。結(jié)果表明，番茄葉片中主要揮發(fā)性成分以醛類(lèi)物質(zhì)含量為最多，達(dá)到47.41％，烯萜類(lèi)物質(zhì)含量也很高，所占比例為46.51%，其它物質(zhì)含量都很少，包括烷烴類(lèi)，酮類(lèi)，醇類(lèi)等。同時(shí)分別采集二葉期，十葉期，開(kāi)花期的“A57”，“克萊斯頓”，“中蔬5號(hào)”番茄品種的葉片，測(cè)定其影響揮發(fā)性物質(zhì)的關(guān)鍵性酶LOX，PAL的酶活性。⑶ 經(jīng)GC-MS技術(shù)分析

4、，發(fā)現(xiàn)E-2-己烯醛是所有揮發(fā)性物質(zhì)中含量最高的成分之一。初步抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，E-2-己烯醛具有明顯的抑菌效果，E-2-己烯醛的MIC（最低抑菌濃度）為160μl/L，MFC（最低殺菌濃度）為320μl/L。經(jīng)掃描電鏡觀(guān)察，發(fā)現(xiàn)的菌絲及分子孢子的形態(tài)發(fā)生了很大改變。核酸泄漏的結(jié)果顯示，在MFC濃度時(shí)，細(xì)胞內(nèi)溶物大量釋放，而對(duì)照組的OD值幾乎未發(fā)生變化。E-2-己烯醛處理后的真菌培養(yǎng)液電導(dǎo)率和pH值測(cè)定結(jié)果顯示，MIC濃度時(shí)，電導(dǎo)率從開(kāi)

5、始的85.3μs/cm到120min的115.1μs/cm，MFC濃度處理的菌液電導(dǎo)率由開(kāi)始的99.1μs/cm增至128.4μs/cm，120min時(shí)，濃度為MIC，MFC的E-2-己烯醛處理的pH分別為6.74和6.41，明顯的低于對(duì)照組（7.13）。經(jīng)原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定，K+離子的含量隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)而呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)。120min時(shí)對(duì)照組的鉀離子濃度為2.40mg/L， MIC濃度下，鉀離子的濃度為2.56mg/L，當(dāng)濃

6、度為MFC時(shí)，測(cè)得的鉀離子的濃度為2.76mg/L。實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)E-2-己烯醛120min處理，對(duì)脂質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，MIC濃度下，與對(duì)照組相比，減幅為26.9mg/g，而MFC濃度下，同一時(shí)間段，其減幅達(dá)43.8mg/g。⑷選取大小均一，無(wú)損傷，品種為―中蘇5號(hào)的番茄進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，研究E-2-己烯醛對(duì)圓弧青霉感染的抑制效果，5d后統(tǒng)計(jì)番茄果實(shí)的感染率情況。從整體上講， E-2-己烯醛的抑菌效果隨抑菌濃度的升高越明顯，當(dāng)其濃度為1280μl/

7、L時(shí)，明顯的抑制了番茄的發(fā)病率。E-2-己烯醛對(duì)番茄品質(zhì)的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在儲(chǔ)存期320μl/L的E-2-己烯醛處理后可溶性固形物（TSS）、可滴定酸（TA）的下降速度和對(duì)照組相比，有所變緩，處理第5天時(shí)，TSS的含量差異較大，9d后，對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組分別為3.2%，3.1%，變化幅度不大。而TA含量在貯藏第9天時(shí)，對(duì)照組番茄由最初0.517%下降至0.382%，320μg/mL E-2-己烯醛處理后番茄中TA下降至0.392%（P＜