核醫(yī)學(xué)習(xí)題集6章-體外放射分析技術(shù)

1、第六章 體外放射分析技術(shù)【學(xué)習(xí)目標(biāo) 學(xué)習(xí)目標(biāo)】了解體外分析技術(shù)的發(fā)展和現(xiàn)狀。掌握放射免疫分析的基本原理、基本方法及質(zhì)量控制。掌握免疫放射分析的基本原理及與放射免疫分析法的主要區(qū)別。了解非放射免疫分析技術(shù)的幾種類型，特別是時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)的基本原理及特點(diǎn)。【內(nèi)容要點(diǎn) 內(nèi)容要點(diǎn)】一、體外分析的發(fā)展和現(xiàn)狀核醫(yī)學(xué)體外分析技術(shù)主要是利用放射分析方法或其派生的相關(guān)技術(shù)在體外進(jìn)行機(jī)體內(nèi)物質(zhì)種類和含量的檢測。主要用來測定患者血清或體液中的激素

2、、生物活性物質(zhì)和藥物濃度等。它最早是在 60 年代由 Yalow 和 Berson 等偶然觀察到 125I 標(biāo)記的胰島素與胰島素抗體的結(jié)合與體系中存在的非標(biāo)記胰島素的量呈一定的相關(guān)性。從而建立了放射免疫分析法。放射免疫分析具有其它方法所不能比擬的特點(diǎn)：①靈敏度高；②操作簡便，成本低。免疫放射分析屬于放射性非競爭結(jié)合分析，是在放射免疫分析理論的基礎(chǔ)上，隨著單克隆抗體技術(shù)的進(jìn)步，不斷發(fā)展而來。非放射性標(biāo)記的免疫分析從上世紀(jì) 80 年代以來得

3、到快速發(fā)展。如熒光酶免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析以及時(shí)間分辯熒光免疫分析等方法。二、放射免疫分析（一）基本原理放射免疫分析的基本原理是利用放射性標(biāo)記的抗原和非標(biāo)記抗原同時(shí)與限量的特異性抗體進(jìn)行競爭性免疫結(jié)合反應(yīng)。這種競爭結(jié)合反應(yīng)可用下式表示： *Ag+Ab *Ag-Ab+*Ag+AgAg-Ab+Ag*Ag：標(biāo)記抗原； Ag：非標(biāo)記抗原； Ab：特異性抗體；示：Ag+*Ab Ag??*Ab+*AbAg:待測抗原

4、 *Ab：標(biāo)記抗體原理是以 125I 標(biāo)記抗體，用過量的標(biāo)記抗體與待測抗原（或標(biāo)準(zhǔn)品）結(jié)合。形成標(biāo)記抗體-抗原復(fù)合物和剩余的標(biāo)記抗體。待反應(yīng)平衡后，分離出多余的游離抗體，測上清液中的放射性，將待測抗原的結(jié)合率與標(biāo)準(zhǔn)抗原的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，即得所測樣品的含量。目前常用實(shí)驗(yàn)方法有抗體夾心法、標(biāo)記第三抗體法、雙標(biāo)記抗體法。免疫放射分析具有反應(yīng)速度快、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。但目前還主要限于蛋白質(zhì)和多肽抗原，很多小分子半抗原和短

5、肽還不能應(yīng)用。四、非放射免疫分析1、酶標(biāo)記免疫分析 典型的酶標(biāo)記免疫分析是酶聯(lián)免疫吸附法。2、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) 主要有：化學(xué)發(fā)光免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)、電化學(xué)發(fā)光免疫測定。3、時(shí)間分辯熒光免疫分析 TRFIA 是一種特殊的熒光分析法，其原理是用具有長熒光壽命的物質(zhì)作為熒光標(biāo)記物（常用的是稀土元素，即鑭系元素）標(biāo)記抗原或抗體，通過測定熒光量，定性或定量分析抗原或抗體。該方法具有特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、適用范圍寬、樣品用量少