小麥triticumaestivuml.苗期水分脅迫誘導表達差異cdna的研究

1、河北師范大學碩士學位論文小麥（Triticum aestivum L.）苗期水分脅迫誘導表達差異cDNA的研究姓名：郭賓會申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：王剛;景蕊蓮20030601河北師范人學碩上研究生學位論文摘 要干旱是導致植物發(fā)生水分脅迫的一種最重要的環(huán)境岡子，極人限度地制約著作物的生長和產(chǎn)量。因此，研究作物的抗旱機制、培育抗旱新品種已成為當前許多科研工作者的迫切需要。差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應，簡稱D D R T -

2、P C R 。因其操作簡單、快速、靈敏性高、易重復等優(yōu)點，自1 9 9 2 年由L i a n g P e n g 和D t P a r d e e 發(fā)明以來，已成為分子生物學領域一種強有力的工具，被廣泛地用來分離差異表達的基因。本研究以小麥早選1 0 號為材料，用1 6 ％( 1 l F 一0 ，5 M P a ) P E G ．6 0 0 0 溶液處理其幼苗，采用m R N A 差異顯示技術和銀染技術，對經(jīng)過不同脅迫時間誘導表達的小

3、麥基因進行分離，共得到差異表達的c D N A 片段5 2 條。方法是：用1 6 ％( v = 一O ．5 M P a ) P E G - 6 0 0 0 溶液處理小麥幼苗，用去離子水培育幼苗做對照；分別提取處理和對照幼苗的總R N A ，反轉(zhuǎn)錄后進行P C R 擴增，P C R 產(chǎn)物經(jīng)6 ％的變一l 生聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染顯色屙可觀察到清晰的條帶。差異顯示的P C R 產(chǎn)物長度絕大部分在1 5 0 b p 到7 5 0 b p

4、 之間。所回收的5 2 條差異帶，經(jīng)R e v e r s eN o r t h e r n ．驗證后，得到陽性表達的c D N A 片段1 5 個，其中包括4 個“上調(diào)”基因和1 1 個“下凋”基因。崩單個隨機引物對上述f 5 個片段進行再次擴增，全部表現(xiàn)為陰性。對1 5 個陽性c D N A片段克隆并測序，通過與G e n B a n k 中的E S T 數(shù)據(jù)庫比對，結果發(fā)現(xiàn)——1 1個c D N A 片段與已知序列有較高的同源性，

5、4 個為未知基因序列。其中，受水分脅迫處理誘導表達信號增強的c D N A 片段W S l 7 3 2 與高粱苗期病菌感染誘導的e D N Ac l o n e 同源性為8 6 ％，g S l 4 8 3 與小麥休眠期胚乳、A B A 處理的小麥胚c D N Ac l o n e 、小麥苗期干旱脅迫處理的c D N A c l o n e 同源性為1 0 0 ％，與鹽脅迫處理的大麥根c D N Ac l o n e 同源性為9 9 ％，