應用cDNa-AFLP技術分析銅脅迫下水稻根系基因差異表達.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)的發(fā)展，重金屬污染已經(jīng)成為日益嚴重的社會問題。許多重金屬是植物生理過程必需的微量元素，如鋅、銅是許多酶的組成成分，但這些必需金屬和非必需金屬一旦超過最適濃度，就會對植物產(chǎn)生很強的毒害作用。植物在適應環(huán)境的過程中逐漸形成了一系列對重金屬的耐性機制，如螯合、區(qū)室化和排斥等。水稻（OryzasativeL.）是世界上許多國家的糧食作物，也是單子葉模式植物。本論文以本實驗室篩選和鑒定的耐銅水稻品種B1139和敏銅水稻品種B1195為

2、試驗材料，采用水培方式，運用利用cDNA-AFLP（cDNA擴增長度片段多態(tài)性）方法，研究了銅脅迫對水稻幼苗根系基因表達的差異，為進一步闡明植物的重金屬耐性機制提供理論基礎。
　　cDNA-AFLP是一種常用的基因差異表達分析技術。本實驗利用限制性內(nèi)切酶AseI和TaqI對水稻根系cDNA進行雙酶切后，連接多核苷酸接頭，利用有兩個選擇性堿基的引物進行PCR擴增。結(jié)果顯示，在所用電泳條件及PCR反應體系相同的情況下，不同的引物組合有

3、不同的電泳圖譜，同一引物組合可以得到相同的條帶。而且在克隆得到的DNA片段序列中含有特定的接頭和選擇性堿基序列（選擇性引物序列），表明cDNA-AFLP方法具有較高的可靠性和重復性。
　　本研究選用8個A-NN和4個T-N引物，共32對引物組合進行選擇性擴增，每個引物組合擴增的條帶數(shù)可達20條以上，條帶清晰，共擴增得到大約700條條帶，獲得的22個差異性片段，測序后在GenBank核酸數(shù)據(jù)庫中利用BLAST進行同源搜索，可大致將其