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文檔簡介
1、基因工程: 基因工程:按照預(yù)先設(shè)計好的藍圖,利用現(xiàn)代分子生物學技術(shù),特別是酶學技術(shù),對遺傳物質(zhì) DNA 直接進行體外重組操作與改造,將一種生物(供體)的基因轉(zhuǎn)移到另外一種生物(受體)中去,從而實現(xiàn)受體生物的定向改造與改良。遺傳工程: 遺傳工程:廣義:指以改變生物有機體性狀為目標,采用類似工程技術(shù)手段而進行的對遺傳物質(zhì)的操作,以改良品質(zhì)或創(chuàng)造新品種。包括細胞工程、染色體工程、細胞器工程和基因工程等不同的技術(shù)層次。狹義:基因工程。限制性核酸
2、內(nèi)切酶: 限制性核酸內(nèi)切酶:是可以識別 DNA 的特異序列,并在識別位點或其周圍切割雙鏈 DNA 的一類內(nèi)切酶,簡稱限制酶回文結(jié)構(gòu): 回文結(jié)構(gòu):每條單鏈以任一方向閱讀時都與另一條鏈以相同方向閱讀時的序列是一致的,例如 5'GGTACC3' 3'CCATGG5'.同裂酶 同裂酶(isoschizomer) (isoschizomer)或異源同工酶 或異源同工酶:不同來源的限制酶可切割同一靶序列(BamH I
3、 和 Bst I 具有相同的識別序列 G↓GATGC)同尾酶 同尾酶(isocaudiners) (isocaudiners):來源不同、識別序列不同,但產(chǎn)生相同粘性末端的酶。兩個同尾酶形成的黏性末端連接之后,一般情況下連接處不能夠再被其任何一種同尾酶識別。BamH I 識別序列: G?GATCCBgl II 識別序列: A?GATCT黏性末端 黏性末端 (cohesive (cohesive terminus/sticky t
4、erminus/sticky ends) ends):DNA 末端一條鏈突出的幾個核苷酸能與另一個具有突出單鏈的 DNA 末端通過互補配對粘合,這樣的 DNA 末端,稱為黏性末端。平末端( 平末端(blunt blunt ends ends): DNA 片段的末端是平齊的。星活性( 星活性(star star activity activity): ):指限制性內(nèi)切酶在非標準條件下,對與識別序列相似的其它序列也進行切割反應(yīng),導致出現(xiàn)非特
5、異性的 DNA 片段的現(xiàn)象。易產(chǎn)生星活性的內(nèi)切酶用*標記。如:EcoR I*底物位點優(yōu)勢效應(yīng) 底物位點優(yōu)勢效應(yīng): 酶對同一個 DNA 底物上的不同酶切位點的切割速率不同。連桿 連桿/銜接物( 銜接物(linker linker): ):化學合成的 8~12 個核苷酸組成的寡核苷酸片段。以中線為軸兩邊對稱,其上有一種或幾種限制性核酸內(nèi)切酶的識別序列,酶切后可產(chǎn)生一定的粘性末端,便于與具有相同粘性末端的另一 DNA 片段連接。銜接頭 銜接頭
6、/接頭( 接頭(adaptor adaptor): ):化學合成的寡核苷酸,含有一種以上的限制性核酸基因在受體細胞內(nèi)的高效表達探針質(zhì)粒: 探針質(zhì)粒:篩選克隆或?qū)ふ一蛟?,通常裝有一個可以定量測定其表達的標記基因,如抗性基因。溶菌生長 溶菌生長:噬菌體感染宿主細胞后,大量增殖子代噬菌體顆粒,使宿主細胞裂解,釋放出來的病毒顆粒又再感染其它細胞,這種周而復始的生命過程(生活周期)稱溶菌生長。烈性噬菌體: 烈性噬菌體:噬菌體感染宿主細胞后,D
7、NA 不整合到宿主染色體,只進行溶菌生長,這樣的噬菌體稱烈性噬菌體。溶原生長: 溶原生長:噬菌體感染細菌,DNA 整合到寄主染色體中,隨寄主細胞染色體的復制而復制,寄主細胞仍然正常分裂,并不死亡,這種生命過程叫作溶原生長。溫和噬菌體( 溫和噬菌體(temperate temperate phage phage): ):病毒感染宿主細胞后 DNA 整合到寄主染色體中,無感染其它細胞的能力,這樣的病毒,稱溫和噬菌體。溶原性細菌( 溶原性細菌
8、(lysogen lysogen): ):細菌染色體中整合有噬菌體基因組的細菌。對同種噬菌體具有免疫性。溶原化( 溶原化(lysogenization lysogenization): ):用溫和噬菌體感染細菌使之成為溶原性細菌的過程。原噬菌體( 原噬菌體(prophage prophage): ):在溶原性細菌內(nèi)存在的整合噬菌體 DNA ,稱原噬菌體。cos cos 位點 位點(cohesive (cohesive end end
9、site) site) :指在連接酶的作用下,連接上述黏性末端結(jié)合形成的雙鏈 DNA 區(qū)段。又稱黏性末端位點??滤官|(zhì)粒載體或稱粘粒 柯斯質(zhì)粒載體或稱粘粒(cosmid) (cosmid):是一類人工構(gòu)建的含有入 DNA cos 位點、噬菌體包裝有關(guān)的 DNA 短序列(具有噬菌體的高感染性) 、質(zhì)粒 DNA 復制子、抗生素標記基因等元件的特殊質(zhì)粒載體。在宿主細胞中可以作為正常噬菌體進行復制,但不表達噬菌體的任何功能。人工染色體 人工染色體
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