中度嗜熱菌中PprⅠ同源蛋白DG0395的研究.pdf

1、耐輻射奇球菌(Deinococcus radiodurans)以具有極強的DNA損傷修復能力而著稱，是研究DNA損傷修復的理想模式生物。pprI是耐輻射球菌體內的一個重要的DNA修復開關基因，通過直接或間接的調控一系列通路來加強DNA修復能力。研究表明，pprI能夠調控氧化應激、能量代謝、轉錄調控、信號轉導、蛋白折疊和組裝等途徑相關基因的轉錄表達，使細胞生存。在此基礎上，本文對PprI蛋白在中度嗜熱菌（Deinococcus geoth

2、ermalis）中的同源物DG0395進行了研究，實驗結果如下所示:
　　1.從中度嗜熱菌中克隆dg0395基因，構建了表達質粒，轉化到大腸桿菌表達菌株中。
　　2.優(yōu)化DG0395蛋白誘導表達的條件，并通過AKTA純化系統(tǒng)純化得到了該蛋白。
　　3.體外活性實驗發(fā)現DG0395具有與PprI相同的金屬酶活性，底物同樣為DdrO;最適酶切溫度為55℃，而PprI的最適酶切溫度45℃;PprI與DG0395酶切的最適合P

3、H都為8.0;之前研究發(fā)現Mn2+能激活PprI的酶切活性，本實驗發(fā)現DG0395的酶切活性同樣能被Mn2+激活。
　　4.在pprI缺失株YR1的基礎上構建了pprI補償株YR1-PprI和dg0395補償pprI功能株YR1-DG0395。與野生株R1相比，PprI缺失突變株YR1在電離輻射照射，紫外照射，過氧化氫處理下，生存率大大下降，而PprI補償株YR1-PprI和DG0395補償PprI功能株YR1-DG0395與野生

4、型差別不大，說明DG0395在體內具有PprI相似作用，能補償Ppr的功能。
　　5.分別測定了野生型菌株R1和PprI突變株YR1以及PprI補償株YR1-PprI與DG0395補償株YR1-DG0395的生長速度，并通過菌斑實驗比較了四個菌株在不同溫度下生長速度的差異。根據實驗結果推測，PprI在耐輻射球菌體內行使與生長有關的功能，DG0395能補償其功能，但DG0395補償株YR1-DG0395更適合在45℃高溫下生長。