大腸桿菌生產(chǎn)制備重組人胰島素工藝

1、1. 提取目的基因:既從人的 DNA 中提取胰島素基因,可使用限制性內(nèi)切酶將目的基因從原 DNA 中分離.2.提取質(zhì)粒:使用細胞工程,培養(yǎng)大腸桿菌,從大腸桿菌的細胞質(zhì)中提取質(zhì)粒,質(zhì)粒為環(huán)狀 DNA.3.基因重組:取出目的基因與質(zhì)粒,先利用同種限制性內(nèi)切酶將質(zhì)粒切開,再使用 DNA 連接酶將目的基因與質(zhì)粒“縫合“,形成一個能表達出胰島素的 DNA 質(zhì)粒.4.將質(zhì)粒送回大腸桿菌:再大腸桿菌的培養(yǎng)液中加入含有 Ca+的物質(zhì),如 CaCl2,這

2、使細胞會吸收外源基因.此時將重組的質(zhì)粒也放入培養(yǎng)液中,大腸桿菌便會將重組質(zhì)粒吸收.5.胰島素的產(chǎn)生:再大腸桿菌內(nèi) ,質(zhì)粒通過表達轉(zhuǎn)錄與翻譯后 ,便產(chǎn)生出胰島素蛋白質(zhì) .通過大腸桿菌的大量繁衍,便可大量生產(chǎn)出胰島素!〖學習要求〗 知道 DNA 的粗提取與鑒定的原理； 掌握并能分析 DNA 粗提取的技術(shù)方法和要求；學會 DNA 分子的鑒定方法【預(yù)習指導(dǎo)】在課前時間通過閱讀教材、同學交流和討論，完成下列問題，并 【預(yù)習指導(dǎo)】在課前時間通過閱讀

3、教材、同學交流和討論，完成下列問題，并初步鞏固。 初步鞏固。一、基礎(chǔ)知識【活動 【活動 1】閱讀教材 】閱讀教材 P54 P54“基礎(chǔ)知識”，討論并回答下列問題： “基礎(chǔ)知識”，討論并回答下列問題：【活動 【活動 2】閱讀教材 】閱讀教材 P55 P55“實驗設(shè)計”，討論并回答下列問題： “實驗設(shè)計”，討論并回答下列問題：1．（記憶） （記憶）實驗材料的選取：選取材料時應(yīng)本著 DNA 含量高、材料易得、便于提取的原則?！舅伎?3】你認為

4、教材提供的材料中哺乳動物的血液不適合提取 DNA。2．（記憶） （記憶）破碎細胞，獲取含 DNA 的濾液：雞血：向雞血細胞液中加入一定量蒸餾水并玻棒攪拌，用紗布過濾后，收集濾液。洋蔥：向研缽中加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，用紗布過濾后，收集濾液。【思考 4】在以上實驗中，蒸餾水的作用是使血細胞大量吸水而脹裂，洗滌劑的作用是瓦解細胞膜，食鹽的作用是溶解 DNA 物質(zhì)。3．（學會） （學會）去除濾液中的雜質(zhì)：方案一：30mL 濾液→加