大腸桿菌生產(chǎn)制備重組人胰島素工藝

1、1. 提取目的基因:既從人的 DNA 中提取胰島素基因,可使用限制性?xún)?nèi)切酶將目的基因從原 DNA 中分離.2.提取質(zhì)粒:使用細(xì)胞工程,培養(yǎng)大腸桿菌,從大腸桿菌的細(xì)胞質(zhì)中提取質(zhì)粒,質(zhì)粒為環(huán)狀 DNA.3.基因重組:取出目的基因與質(zhì)粒,先利用同種限制性?xún)?nèi)切酶將質(zhì)粒切開(kāi),再使用 DNA 連接酶將目的基因與質(zhì)?！翱p合“,形成一個(gè)能表達(dá)出胰島素的 DNA 質(zhì)粒.4.將質(zhì)粒送回大腸桿菌:再大腸桿菌的培養(yǎng)液中加入含有 Ca+的物質(zhì),如 CaCl2,這

2、使細(xì)胞會(huì)吸收外源基因.此時(shí)將重組的質(zhì)粒也放入培養(yǎng)液中,大腸桿菌便會(huì)將重組質(zhì)粒吸收.5.胰島素的產(chǎn)生:再大腸桿菌內(nèi) ,質(zhì)粒通過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄與翻譯后 ,便產(chǎn)生出胰島素蛋白質(zhì) .通過(guò)大腸桿菌的大量繁衍,便可大量生產(chǎn)出胰島素!〖學(xué)習(xí)要求〗 知道 DNA 的粗提取與鑒定的原理； 掌握并能分析 DNA 粗提取的技術(shù)方法和要求；學(xué)會(huì) DNA 分子的鑒定方法【預(yù)習(xí)指導(dǎo)】在課前時(shí)間通過(guò)閱讀教材、同學(xué)交流和討論，完成下列問(wèn)題，并 【預(yù)習(xí)指導(dǎo)】在課前時(shí)間通過(guò)閱讀

3、教材、同學(xué)交流和討論，完成下列問(wèn)題，并初步鞏固。 初步鞏固。一、基礎(chǔ)知識(shí)【活動(dòng) 【活動(dòng) 1】閱讀教材 】閱讀教材 P54 P54“基礎(chǔ)知識(shí)”，討論并回答下列問(wèn)題： “基礎(chǔ)知識(shí)”，討論并回答下列問(wèn)題：【活動(dòng) 【活動(dòng) 2】閱讀教材 】閱讀教材 P55 P55“實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)”，討論并回答下列問(wèn)題： “實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)”，討論并回答下列問(wèn)題：1．（記憶） （記憶）實(shí)驗(yàn)材料的選?。哼x取材料時(shí)應(yīng)本著 DNA 含量高、材料易得、便于提取的原則?！舅伎?3】你認(rèn)為

4、教材提供的材料中哺乳動(dòng)物的血液不適合提取 DNA。2．（記憶） （記憶）破碎細(xì)胞，獲取含 DNA 的濾液：雞血：向雞血細(xì)胞液中加入一定量蒸餾水并玻棒攪拌，用紗布過(guò)濾后，收集濾液。洋蔥：向研缽中加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，用紗布過(guò)濾后，收集濾液?！舅伎?4】在以上實(shí)驗(yàn)中，蒸餾水的作用是使血細(xì)胞大量吸水而脹裂，洗滌劑的作用是瓦解細(xì)胞膜，食鹽的作用是溶解 DNA 物質(zhì)。3．（學(xué)會(huì)） （學(xué)會(huì)）去除濾液中的雜質(zhì)：方案一：30mL 濾液→加