鹽析萃取分離純化血漿蛋白和重組人胰島素.pdf

1、IgG和白蛋白是血漿中主要的功能蛋白質(zhì)，臨床上用于抗病毒、治療燒傷和失血過多引起的血流動(dòng)力學(xué)疾病等。胰島素是體內(nèi)唯一一個(gè)降低血糖的激素，臨床上多用來治療糖尿病。當(dāng)前，工業(yè)上蛋白質(zhì)的分離純化主要采用有機(jī)溶劑沉淀、多步離心等初分離的方法以及柱層析的方法進(jìn)行分離純化，這些方法存在著操作繁瑣、周期長(zhǎng)、蛋白的回收率低和易失活等問題，本論文開展了親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取偶聯(lián)柱層析分離純化血漿中IgG和白蛋白的研究和鹽析萃取分離純化重組人胰島素的研究。

2、
　　首先，在前人的結(jié)果基礎(chǔ)上，驗(yàn)證了500 g體系中17.5％乙醇/20％ K2HPO4體系和14％乙醇/20％ K2HPO4鹽析萃取分離效果，發(fā)現(xiàn)14％乙醇和20％ K2HPO4體系放大穩(wěn)定，在pH7.0下，白蛋白和IgG分布在上相且得率分別為90％和65％。17.5％乙醇/20％K2HPO4體系則易使IgG沉淀。對(duì)14％乙醇/20％ K2HPO4體系的萃取相，進(jìn)行了疏水層析和離子交換層析條件的優(yōu)化，在優(yōu)化的條件下，可以得到電

3、泳純的IgG，但白蛋白的純度較低。
　　其次考察了血漿蛋白在叔丁醇/鹽體系中的分配情況。結(jié)果表明，在15％叔丁醇/14％ K2HPO4，pH7.0和添加7.5％ NaCl的條件下，血漿中的白蛋白主要分布在下相，收率為98％，而IgG以沉淀的方式分布在上下相界面中間，收率為77％，有利于兩種蛋白的分離。將叔丁醇/K2HPO4體系的的萃取相和沉淀相，使用優(yōu)化的疏水層析和離子交換層析進(jìn)行純化，可以得到電泳純度為100％的IgG和純度為8