烏賊加工副產(chǎn)物（墨汁黑色素）對(duì)機(jī)體AGEs及其受體的影響.pdf

1、烏賊的墨汁中含有大量的黑色素，黑色素具有抗輻射、防腐、抗衰老、抗氧化等多種生理生化功能。隨著人口老齡化日趨嚴(yán)重，黑色素抗衰老的功能研究越來(lái)越多。晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation endproducts，AGEs)是生物體內(nèi)還原糖類物質(zhì)的羰基與蛋白質(zhì)類物質(zhì)中的氨基經(jīng)過(guò)美拉德反應(yīng)生成的具有熒光作用的產(chǎn)物，依據(jù)糖基化衰老相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，糖基化終末產(chǎn)物的量與機(jī)體的衰老程度及健康有直接關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)糖基化衰老學(xué)說(shuō)，建立糖基

2、化動(dòng)物模型，進(jìn)一步通過(guò)黑色素灌胃糖基化模型小鼠，檢測(cè)和比較各組小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（Receptor for Advanced Glycation End products，RAGE）、可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（Soluble receptor for advanced glycation end products，sRAGE）、內(nèi)源性分泌型晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（Endogenous secretory

3、Receptor for advanced glycation end product，esRAGE）的水平，研究?jī)煞N烏賊墨汁黑色素通過(guò)降低糖基化產(chǎn)物水平這一途徑發(fā)揮其抗衰老的作用。黑色素分別采用了曼氏無(wú)針烏賊墨汁黑色素（melanin from Sepiella maindroni ink，MSMI）和虎斑烏賊墨汁黑色素（melanin from Sepia pharaonis Ehrenberg ink，MSPI)。
　　實(shí)驗(yàn)

4、采用200mg·kg-1·d-1的D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠45d建立糖基化模型，通過(guò)新物體識(shí)別檢測(cè)模型組與正常對(duì)照組小鼠行為學(xué)差異，進(jìn)一步利用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、皮膚、肌肉和血清中的晚期糖基化終末產(chǎn)物、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體、可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體、內(nèi)源性分泌型晚期糖基化終末產(chǎn)物受體，分析該模型中4種指標(biāo)的變化情況。結(jié)果表明模型組小鼠的辨別指數(shù)顯著低于空白組（P<0.01）；模型組小鼠各組織器官中的糖基化末端產(chǎn)物和

5、相關(guān)受體的表達(dá)量顯著高于空白組（P<0.01）。發(fā)現(xiàn)D-半乳糖慢性處理45d后的小鼠從行為上有一定的遲緩，同時(shí)各組織器官處于高糖基化狀態(tài)，糖基化模型建模成功，此模型可用于研究AGEs及其受體的發(fā)病機(jī)理和藥物治療作用途徑，并且可以選用多個(gè)組織器官作為實(shí)驗(yàn)靶點(diǎn)。
　　在已建立的糖基化模型的基礎(chǔ)上，研究烏賊黑色素對(duì)糖基化模型小鼠體內(nèi)糖基化產(chǎn)物和受體的作用。實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對(duì)照組（Control）、糖基化模型組(Glycation model

6、)、陽(yáng)性對(duì)照組（VC組）、曼氏無(wú)針烏賊墨汁黑色素高低高中低3個(gè)劑量組（MSMI低劑量組、MSMI中劑量組、MSMI高劑量組）、虎斑烏賊墨汁黑色素高中低3個(gè)劑量組（MSPI低劑量組、MSPI中劑量組、MSPI高劑量組）。除空白對(duì)照組皮下注射生理鹽水外，其他8組小鼠皮下注射200mg·kg-1·d-1的半乳糖，建立糖基化小鼠模型。對(duì)低中高三組分別灌胃120mg·kg-1·d-1，240mg·kg-1·d-1，480mg·kg-1·d-1的黑

7、色素。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃120mg·kg-1·d-1的維生素C，空白對(duì)照組灌胃等量生理鹽水。45d后測(cè)定各組小鼠心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、腦、肌肉、皮膚和血清中的AGEs、RAGE、sRAGE、esRAGE以及血清中的血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物（Hemoglobin advanced glycosylation end products，Hb-AGE）的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與糖基化模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、MSMI低中高3組、MSPI低中高3組的

8、小鼠各組織器官和血液中的Hb-AGE、AGEs及受體的水平顯著降低（P<0.01），且隨著黑色素劑量的增加，所有檢測(cè)指標(biāo)的水平越低。這說(shuō)明兩種烏賊墨汁黑色素都能有效的清除體內(nèi)的糖基化產(chǎn)物，可以通過(guò)該途徑發(fā)揮抗衰老功能，且黑色素對(duì)AGEs及其受體的清除能力與黑色素的劑量成正比。
　　進(jìn)一步比較兩種黑色素同劑量組中小鼠各組織器官中 AGEs、sRAGE、esRAGE、RAGE和Hb-AGE的水平。發(fā)現(xiàn)與同劑量的MSMI組相比，MSPI