牛血清蛋白分子生物整體柱的制備及當(dāng)歸提取液的分離分析.pdf

1、整體柱是近年發(fā)展起來(lái)的一種新型色譜柱，與傳統(tǒng)的填充柱相比，它具有滲透性好、制備簡(jiǎn)單，能實(shí)現(xiàn)快速、高選擇性分離等優(yōu)點(diǎn)。本論文采用甲基丙烯酸縮水甘油酯(Glycidylmethacrylate，GMA)為單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯(Ethylenedimethacrylate，EDMA)為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈(Azobisisobutyronitrile，AIBN)為引發(fā)劑，以正丙醇、1，4-丁二醇和水的混合物為致孔劑，將這些混合物在液相色

2、譜空管柱中通過(guò)熱引發(fā)“原位”(in-situ)聚合來(lái)制備整體柱基質(zhì)。然后將牛血清蛋白(Bovineserumalbumin，BSA)固載到基質(zhì)上，得到牛血清蛋白分子生物整體柱，用該整體柱對(duì)當(dāng)歸的提取液進(jìn)行了分離分析。 本論文通過(guò)對(duì)總單體(GMA和EDMA)和總致孔劑比例及總致孔劑中各成分比例的調(diào)節(jié)，優(yōu)化了制備整體柱基質(zhì)的條件，獲得較為理想的配比：30％總單體(GMA75％，EDMA25％)，70％致孔劑(正丙醇75％、1，4-丁

3、二醇15％、水10％)，總單體中加入1mg-ml的AIBN。在此基礎(chǔ)上，比較了不含間隔臂鍵合蛋白、含己二胺間隔臂鍵合蛋白以及吸附蛋白三種固載蛋白的方法，最終選擇吸附法固載蛋白。 用上述條件制得的牛血清蛋白分子生物整體柱，考察了HPLC條件(流動(dòng)相中甲醇含量、流速、緩沖溶液濃度、pH值、柱溫等)對(duì)當(dāng)歸在該整體柱上保留的影響，證明牛血清蛋白分子生物整體柱對(duì)當(dāng)歸提取液的分離是符合親和色譜機(jī)理的。在此基礎(chǔ)上，選擇了合適的梯度洗脫條件，以